Способ получения поливалентного антигена для прижизненной диагностики сальмонеллеза у птиц

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ПРИЖИЗНЕННОЙ ДИАГНОСТИКИ САЛЬМОНЕЛЛЕЗА У ПТИЦ(71) Заявитель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(72) Авторы Зайцева Алеся Владимировна Дремач Геннадий Эдуардович Зайцева Людмила Петровна(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(56)1121825 1, 1996.955573 1, 1996.2070055 1, 1996.2158133 2, 2000. ЗАЙЦЕВА А.В. и др. Ученые записки учреждения образования Витебская ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины,2004. Т. 40. Ч. 1. - С. 208-210.2257581 2, 2005.4371 1, 2002.7787 1, 2006.(57) Способ получения поливалентного антигена для прижизненной диагностики сальмонеллеза у птиц, при котором бактериальную суспензию- иинактивируют добавлением мертиолята натрия до концентрации 0,01 , бактериальную массу отделяют, осуществляют экстракцию антигена путем обработки бактериальной массы 0,15-0,18 -ным раствором едкого натрия при температуре 86-92 С в течение 40-60 минут, полученный экстракт отделяют. Изобретение относится к микробиологии, а именно к производству диагностикумов,используемых для серодиагностики сальмонеллезов. Известны способы получения диагностических препаратов, включающие выделение антигенной фракции из микробных клеток в виде полисахаридного комплекса с последующей сенсибилизацией ею эритроцитов 1, 2, 3. Прототип изобретения не установлен, так как в открытой печати доступная информация, касающаяся получения антигена для диагностики сальмонеллеза птиц, отсутствует. Основным недостатком существующих способов получения сальмонеллезных диагностикумов является низкий выход целевого продукта. Задача изобретения - удешевление способа и повышение выхода целевого продукта. Поставленная цель достигается тем, что баксуспензию сальмонеллезных бактерий инактивируют путем добавления мертиолята натрия до 0,01 , отделяют от культуральной жидкости путем центрифугирования, полисахариднополипептидную фракцию соматических антигенов экстрагируют путем термогидролиза бакмассы возбудителей .и .0,15-0,18 -ным раствором едкого натрия при температуре 14409 1 2011.06.30 86-92 С в течение 40-60 мин, экстракт отделяют от бакмассы и сенсибилизируют формалинизированные эритроциты барана. Сущность изобретения. Способ получения поливалентного антигена для прижизненной диагностики сальмонеллеза у птиц, при котором бактериальную суспензию .и .инактивируют добавлением мертиолята натрия до концентрации 0,01 , бактериальную массу отделяют, осуществляют экстракцию антигена путем обработки бактериальной массы 0,15-0,18 -ным раствором едкого натрия при температуре 86-92 С в течение 40-60 мин, полученный экстракт отделяют. Пример 1. Культуры сальмонелл инактивировали путем добавления до 0,01 мертиолята натрия, бакмассу отделяли путем центрифугирования или сепарирования при 9 тыс. об/мин. Бакмассу ресуспендировали в 0,15 -ном растворе едкого натрия и инкубировали при температуре 86 С в течение 40 мин. Экстракт полисахариднополипептидной фракции антигенов сальмонелл отделяли от бакмассы и сенсибилизировали формалинизированные эритроциты барана. Для этого к 20 -ной взвеси эритроцитов барана добавляли раствор полисахариднополипептидной фракции антигенов сальмонелл в соотношении 51. Выход целевого продукта из литра 100 млрд. взвеси сальмонелл составил 10,2 л. Пример 2. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но культуру сальмонелл инактивировали путем добавления до 0,005 мертиолята натрия. Выход целевого продукта составил 6,2 л. Пример 3. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но культуру сальмонелл инактивировали путем добавления до 0,02 мертиолята натрия. Выход целевого продукта составил 6,5 л. Пример 4. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но бакмассу ресупендировали в 0,18 -ном растворе едкого натрия и инкубировали при температуре 92 С в течение 60 мин. Выход целевого продукта из 1 л 100 млрд. взвеси сальмонелл составил 10,4 л. Пример 5. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но бакмассу ресупендировали в 0,14 -ном растворе едкого натрия и инкубировали при температуре 93 С в течение 36 мин. Выход целевого продукта составил 6,8 л. Пример 6. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но бакмассу ресупендировали в 0,19 -ном растворе едкого натрия и инкубировали при температуре 84 С в течение 62 мин. Выход целевого продукта составил 6,3 л. Пример 7. Способ осуществляли аналогично примеру 1, но бакмассу ресупендировали в 0,14 -ном растворе едкого натрия и инкубировали при температуре 93 С в течение 62 мин. Выход целевого продукта составил 6,5 л. Пример 8. Применение поливалентного антигена для прижизненной диагностики сальмонеллеза у птиц. Исследования птиц на сальмонеллез по ККРНГА проводят в возрасте 50-55 дней и повторно в возрасте 7 мес. При неблагополучии хозяйства по сальмонеллезу последующие исследования проводят в сроки, предусмотренные инструкцией о мероприятиях по борьбе с сальмонеллезом птиц. Кровь для ККРНГА берут у птиц из гребня или подкрыльцовой вены. Каплю крови наносят на сухое, обезжиренное стекло и добавляют к ней каплю антигена (их соотноше 2 14409 1 2011.06.30 ние должно быть 11). Кровь смешивают с антигеном покачиванием предметного стекла на грелке-качалке при температуре 37-40 С. Реакцию на поливалентный антиген считают положительной, если в течение 2 мин в смеси крови с антигеном выпали хорошо заметные хлопья коричневого цвета. Реакцию считают сомнительной, если в течение 2 мин в смеси крови с антигеном появились слабовыраженные мелкозернистые хлопья коричневого цвета. Отрицательная реакция характеризуется образованием в капле крови с антигеном равномерной стабильной гомогенной взвеси эритроцитов барана. Положительно и сомнительно реагирующую птицу изолируют и отправляют на убой. Из полученных данных следует, что выход препарата, приготовленного по способам,представленным в примерах 1 и 4, составил 10,2-10,4 л, в то время как по известному способу только 0,6-0,8 л. Источники информации 1. А.с. СССР 1084293, МПК 61 39/02, 1982. 2. А.с. СССР 594173, МПК 61 39/02, 1975. 3.955573 1, 1996. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3