Способ получения ранних эмбрионов крупного рогатого скота in vitro

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РАННИХ ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(71) Заявитель Республиканское унитарное предприятие Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству(72) Авторы Ганджа Алла Ивановна Леткевич Людмила Леонидовна Кириллова Ирина Викторовна(73) Патентообладатель Республиканское унитарное предприятие Научно-практический центр Национальной академии наук Беларуси по животноводству ГОЛУБЕЦ Л.В. и др. Заатэхнчная навука Беларус Сб. научн. трудов. Т. 38. - Минск УП Технопринт, 2003. С. 20-26. ГОЛУБЕЦ Л.В. и др. Заатэхнчная навука Беларус Сб. научн. трудов. Т. 38. - Минск УП Технопринт, 2003. С. 27-32. ГАНДЖА А.И. и др. Зоотехническая наука Беларуси Сб. научн. трудов. Т. 42. - Жодино, 2007. - С. 22-27. РАКОВИЧ Е.Д. Зоотехническая наука Беларуси Сб. научн. трудов. Т. 42. Жодино, 2007. - С. 128-134. Биотехнология получения и трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота (методические рекомендации). - Жодино, 2004. - С. 21-23. СИМОНЕНКО В.П. Эффективность технологических приемов и методов получения эмбрионов крупного рогатого скота вне организма Автореф. дис. Жодино, 2005. - С. 6-13.(57) Способ получения ранних эмбрионов крупного рогатого скота, включающий выделение ооцитов из яичников, постановку ооцитов на созревание, их оплодотворение капацитированной замороженно-оттаянной спермой быка-производителя, отмывку и культивирование оплодотворенных ооцитов до получения ранних эмбрионов в течение 710 дней в культуральной среде под слоем минерального масла в 2-инкубаторе при температуре 38,5 С, максимальной влажности 98 и содержании в воздухе 52, отличающийся тем, что культивируемые ооциты и ранние эмбрионы дополнительно облучают по 10 секунд ежедневно в течение 7 дней поляризованным светом лампы Биоптрон с интенсивностью излучения 40 мВт/см 2 и температурой воздействия 37 С с расстояния 3 см. Изобретение относится к области животноводства, в частности к способам для эмбриотрансплантации. 13775 1 2010.12.30 Известен способ повышения выхода ранних эмбрионов крупного рогатого скота вне организма, включающий выделение ооцитов из яичников, созревание ооцитов, оплодотворение их капацитированной замороженно-оттаянной спермой быка-производителя,культивирование ранних эмбрионов 7-10 дней в культуральной среде под слоем минерального масла в 2-инкубаторе при температуре 38,5 С с максимальной влажностью 98 и содержанием в воздухе 52, отмывание ооцитов 20 часов после совместного культивирования. При этом в среду для культивирования добавляют биологически активные вещества, в качестве которых используют эстральную сыворотку крови, полученную от коров в раннем эструсе, и фолликулостимулирующий гормон. При снижении в среде концентрации эстральной сыворотки до 5 и добавлении 20 мкг/мл фолликулостимулирующего гормона можно получатьдо 59,7 и 58,1 соответственно созревших и оплодотворенных ооцитов 1. Однако такой процент выхода ранних эмбрионов является низким для более эффективной селекционной работы по совершенствованию племенных и продуктивных качеств животных. Задача изобретения - повышение выхода ранних эмбрионов крупного рогатого скота. Сущность изобретения. Способ получения ранних эмбрионов крупного рогатого скота, включающий выделение ооцитов из яичников, постановку ооцитов на созревание, их оплодотворение капацитированной замороженно-оттаянной спермой быкапроизводителя, отмывку и культивирование оплодотворенных ооцитов до получения ранних эмбрионов в течение 7-10 дней в культуральной среде под слоем минерального масла в 2-инкубаторе при температуре 38,5 С, максимальной влажности 98 и содержании в воздухе 52, отличающийся тем, что культивируемые ооциты и ранние эмбрионы дополнительно облучают по 10 секунд ежедневно в течение 7 дней поляризованным светом лампы Биоптрон с интенсивностью излучения 40 мВт/см 2 и температурой воздействия 37 С с расстояния 3 см. Известна терапевтическая эффективность светолечения поляризованным светом лампы Биоптрон при лечении дерматологических заболеваний, в акушерстве и гинекологии,при повреждении и заболевании опорно-двигательного аппарата, в стоматологии и оториноларингологии и т.д. Лампа Биоптрон излучает линейный поляризованный свет, длина волны которого колеблется от 400 до 2000 нм, что значительно отличает его от естественного света, получаемого нами каждый день 2. Способ осуществляют следующим образом. По общепринятым методикам проводят доставку яичников с мясокомбината после убоя животного в лабораторию, выделение ооцитов, их созревание, оплодотворение их капацитированной замороженно-оттаянной спермой быка-производителя, культивирование ранних эмбрионов 7-10 дней в культуральной среде под слоем минерального масла в 2-инкубаторе при температуре 38,5 С с максимальной влажностью 98 и содержанием в воздухе 5 С. Спустя 20 часов после отмывания от спермиев проводят первое облучение ооцитов поляризованным светом лампы Биоптрон, а затем ежедневно в течение 7 дней культивирования ранних зародышей проводят облучение в течение 10 секунд. Клетки находятся в чашках Петри в культуральной среде под слоем минерального масла. Расстояние от лампы до чашки Петри 3 см. Интенсивность излучения составляет 40 мВт/см 2, температура воздействия 37 С. Диапазон излучения от видимого до слегка согревающего инфракрасного света, длина волны 400-2000 нм. Ежедневно проводят визуальный контроль уровня дробления и качества зародышей под микроскопом при увеличении в 56 раз, результат фиксируют в рабочем журнале. При проведении опыта контролем служили аналогичные ооциты и ранние зародыши, не подвергшиеся облучению направленным поляризованным светом лампы Биоптрон. Полученные результаты приведены в таблице. 13775 1 2010.12.30 Уровень Выход морулКоличество Эффективность Режим воздействия и объект дробления, бластоцист,ооцитов способа,Контроль 66 32-48,5 5-15,6 Яичники после доставки и ооциты перед оплодотворе 91 28-30,8 6-21,4 5,8 нием, по 10 с Ооциты перед оплодотворением и эмбрионы на 4-й день 82 38-46,3 7-18,4 2,8 культивирования, по 10 с Ооциты после оплодотворения по 10 с и эмбрионы,ежедневно в течение 7 дней по 10 с Таким образом, использование предложенного способа получения ранних эмбрионов крупного рогатого скотапозволяет повысить эффективность использования ооцитов, полученных от выбракованных коров, и увеличить выход морул-бластоцист на 9,4 по сравнению с контролем за счет ежедневного облучения клеток направленным поляризованным светом. Источники информации 1. Ахмолдаева А.Х., Сергеев И.И., Порфирьев И.А. Созревание и оплодотворениеооцитов крупного рогатого скота при действии биологически активных веществ // Сельскохозяйственная биология. - 2003. -6. - С. 58-65. 2. Аппараты Биоптрон. Действие и лечебное применение Сб. ст. / Под ред. В.С.Улащика. - Мн. Бизнесофсет, 2001. - С. 3, 24, 34-36. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3