Гибридный белок CFP10-ESAT6 из М. tuberculosis, индуцирующий реакцию гиперчувствительности замедленного типа в отношении М. tuberculosis, кодирующая его химерная нуклеиновая кислота и рекомбинантный плазмидный экспрессирующий вектор, ее содержащий, спосо
Номер патента: 15748
Опубликовано: 30.04.2012
Авторы: Киселев Всеволод Иванович, Пальцев Михаил Александрович
Текст
Изобретение относится к области медицины, фармакологии и биотехнологии, конкретно к новому диагностикуму в виде дозированной лекарственной формы для внутрикожного введения,позволяющему осуществить диагностику туберкулезного процесса,новому гибридному белку СРР 1 ОЕ 5 АТ 6 полученному с помощью новой рекомбинантной плазмидной ДНК. Исследования, проведенные Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ), показали, что проблема туберкулеза (ТБ) попрежнему стоит чрезвычайно остро, о чем свидетельствует уровень инфицированности населения земного шара, составляющий свыше 1 миллиарда человек. Около 8 миллионов человек заболевают туберкулезом каждый год. При этом 44 болеют легочной формой этого заболевания. Около 2 млн. человек умирает ежегодно, что составляет 23 смертельных исходов в мировом масштабе И превышает 50 летальности в Африканских странах (Вуе С, 5 сЬее 1 е З, Во 11 п Р, РасЬап 1 а Ч апа Кау 1 п 911 опе М С, 1999, дАМА, 282, 7,677-686).Для контроля за распространением ТБ и значительногоснижения риска распространения этого заболевания необходимо, втом числе, создание эффективных реагентов для специфичнойБазовым методом выявления туберкулезной инфекции многие годы является реакция Манту.В основе этого метода лежит определение гиперчувствительности замедленного типа в отношении антигенных детерминант микобактерий. Реагент для постановки кожной пробы представляет собой суммарный экстракт антигенов из МусоЬасег 1 ит ЬоУ 1 что предопределяет очень низкий уровень специфичности реакции Манту. Положительная проба не выявляет различий между активной формой заболевания, предварительной сенсибилизацией в результате контакта с М)иЬегси 1 о 15, БЦЖ (ВС 6) вакцинацией или перекрестной сенсибилизацией другими видами микобактерий. Более того, антигенные компоненты пробы не стандартизованы и поэтому пробы из разных источников могут различаться по кожной реакции(мцзгайа АЗ, Тсе 11 зцрзегз ада суЕоК 1 пе 5 1 пгегр 1 ау 1 п 1 пЕесп 1 оцз 1 зеазе 5, рр. 201-211).Таким образом, сложилась настоятельная необходимость идентифицировать антигены М.йиЬегси 1 о 1 которые могут стать кандидатами для производства улучшенных вакцин с универсальной эффективностью и специфических диагностических реагентов для детекции ТБ.Развитие биотехнологии, в частности, использование технологий ДНК клонирования и экспрессии, значительно облегчило идентификацию нескольких основных антигенов М.йиЬегси 1 о 1.На основе некоторых из идентифицированных антигеновМ.иЬегси 1 о 15 (в основном это белки теплового шока, такие какразработаны методы диагностики гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (патент 05 6458366, Сотроипбз йог а 1 а 9 по 515 ой йиЬесц 1 оз 15 апо шегпоаз ой пЬе 1 г шее, заявка ИО 0 О 21983 ТВ уасс 1 пе ап б 1 а 9 поз 1 с Ьазео оп ап 19 епз Егот М.йиЬегси 1 о 1 се 11 патент 05 6120776 В 1 а 9 позЕ 1 с 5 К 1 п тез Бог иЬехсц 1 оз 1).Общим недостатком этих подходов является отсутствие полной специфичности используемых белковых, полипептидных в том числе, гибридных реагентов в отношении М.иЬегси 1 о 515, так как подобныебелкиполипептиды ИМЕЮТСЯ В ШТЭММЭХ ДРУГИХ микобактерий И Ввакцинном штамме БЦЖ. В случае наличия последнего обстоятельства, разработанные подходы не пригодны для дифференциальной диагностики инфекционного иммунитета отМ.иЬегси 1 о 1 обеспечивает синтез двух секреторных белков ЕЗАТ 6На основе только пептидов белка ЕБАТБ была создана специфическая диагностическая система, позволяющая уверенно дифференцировать гиперчувствительность замедленного типа (ГЗТ)На основе этого диагностикума был разработан методдиагностики туберкулезной инфекции путем индукции реакции гиперчувствительности замедленного типа инкубацией ТлимфоЦИтов преимущественно периферической крови пациента в условиях 1 п у 1 йго со смесью указанных выше антигенов. В случае положительнойреакции с помощью чувствительных иммунологических методов фиксировался повышенный уровень синтеза уинтерферона.Однако известный способ очень сложен в постановке, требует дорогостоящего оборудования и реагентов, а потому не пригоден для массового применения в качестве скринингого метода.Известен (Патент РФ Ш 2277540 Способ диагностики туберкулезной инфекции, рекомбинантная плазмидная ДНК,кодирующая синтез гибридного СЕР 10 ЕАТ 6 из МусоЬасйег 1 ит иЬегси 1 о 51, способ его получения, гибридный белок СЕР 10 ЕАТ 6 И его применение прототип) неприродный гибридный белок,содержащий антигенные детерминанты двух секреторных белков Е 5 АТ 6 (еаг 1 у зесгейеа апй 19 еп 1 с валуев) и СЕР 10 (си 1 ие г 11 йаЕе ргоСе 1 п) М йиЬегси 1 о 1 которые отсутствуют у М. Ьоу 15 и большинства непатогенных микобактерий. При этом удалось экспрессировать гибридный белок в клетках кишечной палочки и получить его в очищенном виде, пригодном для постановки кожной пробы. С помощью этого полипептида удается дифференцировать инфекционный иммунитет и иммунные реакции, развивающиеся в результате вакцинации .Однако на стадии предклинических исследований этого рекомбинантного белка была установлена его повышеннаядиагностики была не всегда УДОВЛЭТВОРИТЭЛЬНОЙ, кроме ТОГО, ВЫХОД
МПК / Метки
МПК: C07K 19/00, A61K 39/04
Метки: замедленного, кодирующая, типа, cfp10-esat6, спосо, вектор, химерная, реакцию, плазмидный, белок, рекомбинантный, индуцирующий, гибридный, кислота, отношении, гиперчувствительности, экспрессирующий, tuberculosis, содержащий, нуклеиновая
Код ссылки
<a href="https://by.patents.su/26-15748-gibridnyjj-belok-cfp10-esat6-iz-m-tuberculosis-induciruyushhijj-reakciyu-giperchuvstvitelnosti-zamedlennogo-tipa-v-otnoshenii-m-tuberculosis-kodiruyushhaya-ego-himernaya-nukleinova.html" rel="bookmark" title="База патентов Беларуси">Гибридный белок CFP10-ESAT6 из М. tuberculosis, индуцирующий реакцию гиперчувствительности замедленного типа в отношении М. tuberculosis, кодирующая его химерная нуклеиновая кислота и рекомбинантный плазмидный экспрессирующий вектор, ее содержащий, спосо</a>