Средства, усиливающие секрецию гормона роста

(51) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДСТВА, УСИЛИВАЮЩИЕ СЕКРЕЦИЮ ГОРМОНА РОСТА(57) 1. Соединение общей формулы 3 1 гдеозначает, что данный атом углерода, когда он является хиральным, имеетиликонфигурацию 1 - атом водорода 3 представляет собой группу формулы 9682 1 2007.08.30 2 - атом водорода, линейный или разветвленный С 1-С 6-алкил или группа формулы 4 - атом водорода или линейный или разветвленный С 1-С 4-алкил 5 - атом водорода, С 1-С 4-алкил, аминогруппа, группа 2-3 или пиперидинил 6 и 7 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или линейный или разветвленный С 1-С 4-алкил 11, 12, 15 и 16 представляют собой независимо друг от друга атом водорода или линейный или разветвленный С 1-С 4-алкилимеет значение 0, 1 или 2. 2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что 2 представляет собой атом водорода,3 - группу формулы ,имеет значение 0. 3. Соединение формулы 8. Фармацевтическая композиция, усиливающая секрецию гормона роста, включающая эффективное количество соединения общей формулыпо п. 1. 9. Фармацевтическая композиция по п. 8, отличающаяся тем, что представляет собой комбинацию соединения по п. 1 с фармацевтически приемлемым носителем. 10. Фармацевтическая композиция по п. 8, отличающаяся тем, что представляет собой комбинацию соединения по п. 1 с дополнительным средством, усиливающим секрецию гормона роста. 11. Способ повышения в плазме у млекопитающих уровня гормона роста, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по п. 1. 12. Способ лечения дефицита секреции гормона роста, включающий введение млекопитающему терапевтически эффективного количества соединения по п. 1. 13. Способ лечения замедления роста у детей, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п. 1. 14. Способ лечения нарушений обмена веществ, связанных с недостатком секреции гормона роста, в особенности в пожилом возрасте, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п. 1. 15. Способ промотирования процесса заживления ран, восстановления после хирургических операций или восстановления от изнурительных болезней, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения по п. 1. Приоритет установлен пп. 1-2, 5-15 - 13.06.2000, 26.09.2000 пп. 3-4 - 26.09.2000. 9682 1 2007.08.30 Изобретение относится к соединениям, которые полезны для введения млекопитающим с целью повышения в плазме уровня гормона роста. Гормон ростаили соматотропин, выделяемый гипофизом, входит в семейство гормонов, биологическая активность которых является не только основой для роста в длину молодого организма, но также поддерживает целостность организма в зрелом возрасте.действует непосредственно или косвенно на периферийные органы, стимулируя синтез факторов роста (инсулин-подобного фактора роста-1 или -1) или их рецепторов(эпидермальный фактор роста или ). Прямое действиеявляется тем типом, который относят к антиинсулиновому, что способствует расщеплению жира на уровне жировых тканей. Через его действие на -1 (соматомедин С) синтез и секрециюстимулирует рост хрящей и костей (структурный рост), белковый синтез и клеточную пролиферацию в многочисленных периферийных органах, включая мышцы и кожу. Благодаря своей биологической активности,участвует во взрослых организмах в поддержании состояния белкового анаболизма и играет первичную роль в регенерации ткани после травмы. Уменьшение секрециис возрастом, демонстрируемое у людей и животных, способствует метаболическим изменениям в сторону катаболизма, который инициирует или участвует в старении организма. Потеря мышечной массы, накопление жировых тканей,деминерализация костей, потеря способности регенерации ткани после травм, которые наблюдаются в пожилом возрасте, коррелируются с уменьшением секреции . Таким образом,является физиологическим анаболическим средством, абсолютно необходимым для роста детей и для управления белковым обменом взрослых. Секреция гормона ростарегулируется двумя гипоталамическими пептидами-высвобождающим гормоном , который оказывает стимулирующий эффект на высвобождение , и соматостатином, который демонстрирует ингибирующее воздействие. В последние несколько лет было продемонстрировано, что секрецияможет также стимулироваться синтетическими олигопептидами, названными -высвобождающими пептидами , такими как гексарелин и различные аналоги гексарелина ( . .,, 136, 445-460, 1997). Эти соединения действуют через механизм, который отличается от механизма действия( , в, . . и , . 9-28, -,, 1996), и путем взаимодействия со спецефическими рецепторами в гипофизе )..,, 157, 99-106, 1998. ,в , , 1998). Недавно было продемонстровано, чторецепторы присутствуют не только в системе гиптоталамо-гипофиза, но даже в различных тканях человека, вообще не связанных свысвобождением (.., см. выше (а.и их антагонисты описаны, например, в следующех публикациях . ,, , 1996, . 85-102..,, . . . .,8, . 311-313, 1996 . ,,. ., 423, . 85-87, 1997 .. .,и,., 50, . 1149-1155,1992 и Т.С.. .,,96/15143 ( 23, 1996).человека был получен с помощью генной инженерии приблизительно десять лет назад. До недавнего времени большинство примененийбыло связано с задержкой роста у детей, теперь исследуют использованиедля взрослых. Фармакологическое применение ,и средств, усиливающих секрецию гормона роста, можно разделить на следующее три главных категории. 4 Детский рост. Лечение с помощью рекомбинантного гормона роста человека показало, что он стимулируют рост у детей, имеющих карликовый гипофиз, почечную недостаточность, синдром Турнера и небольшой рост. Рекомбинантныйчеловека теперь коммерчески доступен в Европе и в Соединенных Штатах для применения в случае замедления роста ребенка, вызванного недостатком , а также для лечения почечной недостаточности у детей. Другие его применения находятся в стадии клинического исследования. Лечение в течение длительного срока взрослых и пожилых пациентов. Снижение секрециивызывает изменения в организме с возрастом. Предварительные исследования лечения в течение года рекомбинантнымчеловека показали увеличение мускульной массы и толщины кожи, снижение жировой массы при небольшом увеличении плотности кости у группы пожилых пациентов. В отношении остеопороза, как показали недавние исследования, рекомбинантныйчеловека не увеличивает костную минерализацию, но, возможно, он может предотвращать деминерализацию костей в период постменопаузы у женщин. Дальнейшие исследования находятся в настоящее время в процессе реализации для демонстрации этой теории.(с) Лечение взрослых и пожилых пациентов в течение короткого периода времени. В предклинических и клинических исследованиях было показано, что гормон роста стимулирует белковый анаболизм и заживление в случае ожогов, СПИДа и рака, при ранениях, а также стимулирует сращивание костей.,и средства, усиливающие секрецию гормона роста, также предназначены для фармакологического и ветеринарного применения. ,и средства, усиливающие секрецию гормона роста, стимулируют рост свиней в течение периода их выкармливания за счет благоприятного влияния на рост мышечной ткани по сравнению с ростом жировых тканей, а также увеличивают надои коров, и при этом не обнаруживаются нежелательные побочные эффекты, которые подвергли бы опасности здоровье животных, а также привели бы к вредным примесям в производимом мясе или молоке. Бычий соматотропинкоммерчески доступен в США. Большинство клинических исследований осуществляют в настоящее время с рекомбинантным .и средства, усиливающие секрецию гормона роста, рассматриваются в качестве продуктов второго поколения, предназначенных для замены в ближайшем будущем использованияв большинстве случаев. Соответственно применениеи средств, усиливающих секрецию гормона роста, в настоящее время имеет множество преимуществ перед использованимкак такового. Таким образом, имеется потребность в соединениях, которые, в случае их введения млекопитающим, действуют в качестве средств, усиливающих секрецию гормона роста. Настоящее изобретение относится к новым соединениям, которые действуют в качестве средств, усиливающих секрецию гормона роста, и, в целом, к способам повышения в плазме уровня гормона роста у млекопитающих путем введения одного или нескольких соединений согласно изобретению. Изобретение также относится к способам лечения дефицита секреции гормона роста, стимулирования заживления ран, восстановления после хирургических операций или восстановления от изнурительных болезней путем введения млекопитающим терапевтически эффективного количества одного из указанных соединений. Подробное описание предпочтительных воплощений изобретения. В этом описании применены следующее сокращенияобозначает декстро энантиомер,обозначает гормон роста, Вос обозначает трет-бутилоксикарбонил,обозначает бензилоксикарбонил, - обозначает -метил,обозначает 4-амино-пиперидин-4 карбоксилат,обозначает изонипекотил, т.е. пиперидин-4-карбоксилат,обозначает гдеозначает, что атом углерода, который, когда является хиральным атомом углерода,имеетиликонфигурацию. Соединения по изобретению имеют общую формулу 3 1 гдеозначает, что атом углерода, который, когда является хиральным атомом углерода,имеетиликонфигурацию, один из 1 и 3 является атомом водорода и другой является группой формулы 9682 1 2007.08.30 2 является атомом водорода, линейной или разветвленной 1-6-алкильной группой,арильной группой, гетероциклической группой, циклоалкильной группой (СН 2)арильной группой, (СН 2)-гетероциклической группой, (СН 2)-циклоалкильной группой,метилсульфонильной группой, фенилсульфонильной группой, 8-группой или группой согласно одной из формул отдо , представленных ниже 9 10 4 является атомом водорода или линейной или разветвленной С 1-С 4-алкильной группой, 5 является атомом водорода, линейной или разветвленной С 1-С 4-алкильной группой,(СН 2)-арильной группой, (СН 2)-гетероциклической группой, (СН 2)-циклоалкильной 7 9682 1 2007.08.30 группой или аминогруппой, 6 и 7 являются независимо друг от друга атомом водорода или линейной или разветвленной С 1-С 4-алкильной группой, 8 является линейной или разветвленной С 1-С 6-алкильной группой, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 и 16 независимо друг от друга являются атомом водорода или линейной или разветвленной С 1-С 4 алкильной группой,имеет значение 0, 1 или 2 иимеет значение 1 или 2. Предпочтительным воплощением изобретения являются соединения, в которых 2 представляет собой водород, 3 представляет собой группу формулыиимеет значение 0. Особенно предпочтительными являются соединения, в которых линейный или разветвленный С 1-С 4-алкил представляет собой метил, линейный или разветвленный С 1-С 6 алкил представляет собой метил, этил или изо-бутил, арил представляет собой фенил или нафтил, циклоалкил представляет собой циклогексил и гетероциклическая группа представляет собой 4-пиперидинил или 3-пирролильную группу. Особенно предпочтительные соединения по изобретению включают следующие Н 9682 1 2007.08.30 В соответствии с настоящим изобретеним было найдено, что соединения по изобретению являются полезными для повышения в плазме уровня гормона роста у млекопитающих. Кроме того, соединения по настоящему изобретению являются полезными для лечения дефицита секреции гормона роста, замедления роста у детей и нарушений обмена веществ, связанных с недостатком секреции гормона роста, в особенности в пожилом возрасте. Фармацевтически приемлемые соли указанных соединений могут быть также применены, если необходимо. Такие соли включают органические или неорганические аддитивные соли, такие как гидрохлоридные, гидробромидные, фосфатные, сульфатные,ацетатные, сукцинатные, аскорбатные, тартратные, глюконатные, бензоатные, малатные,фумаратные, стеаратные или памоатные соли. Фармацевтические композиции по изобретению являются полезными для повышения в плазме уровня гормона роста у млекопитающих, включая человека, также как и для лечения дефицита секреции гормона роста, задержки роста у детей и нарушений обмена веществ, связанных с недостатком секреции гормона роста, в особенности в пожилом возрасте. Такие фармацевтические композиции могут включать соединение согласно настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль или комбинации соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемые соли,необязательно в смеси с носителем, наполнителем, связующим веществом, разбавителем,матриксом или покрытием с пролонгированным выделением. Примеры таких носителей,наполнителей, связующих веществ и разбавителей могут быть найдены в, 18 , , .,, , 1990. Фармацевтические композиции по изобретению могут включать дополнительные средства, усиливающие секрецию гормона роста. Примерами соответствующих дополнительных средств, усиливающих секрецию гормонов роста, являются грелин(.-6 2. Любое из соединений в соответствии с настоящим изобретением может быть получено в соответствии со знаниями из уровня техники, связанными с созданием лекарственных средств, которые пригодны для парантерального, буккального, ректального, вагинального,трансдермального, легочного или орального пути введения. Тип состава лекарственного средства, содержащего соединение, может быть выбран согласно желаемой скорости высвобождения. Для примера, если соединения должны быть быстро введены, то предпочтительно назальное или внутривенное введение. Лекарственные средства могут быть введены млекопитающим, включая людей, в терапевтически эффективной дозе, которая может быть легко определена специалистом в этой области и которая может варьироваться в зависимости от вида лекарственного препарата, возраста, пола и веса лечащегося пациента или субъекта, также как от пути введения. Точный уровень может быть легко определен опытным путем. Примеры. Следующие примеры иллюстрируют эффективность наиболее предпочтительных соединений для лечения по настоящему изобретению. Пример 1. (8,9 г 26 ммоль 1 экв.) растворяют в диметиловом эфире (25 мл) и помещают на водяную со льдом баню при 0 С. Последовательно добавляют(3,5 мл 1,2 экв.),(4,1 мл 1,2 экв.) и раствор аммиака 28(8,9 мл 5 экв.). Смесь разбавляют водой (100 мл), после чего продукт 2 выпадает в осадок. Его фильтруют и сушат в вакууме, что дает 8,58 г белого твердого вещества. Выход 98 . 191933, 337 г.моль-1.0,46 Хлороформ/Метанол/Уксусная кислота (180/10/5). 1 Н ЯМР (250 МГц, -6) 2,9 (дд, 1, Н,14,5 Гц,9,8 Гц) 3,1 (дд, 1,Н,14,5 Гц,4,3 гц) 4,2 (сексдуплет, 1 Н, Н) 4,95 (с, 2 Н, СН 2( 6,9-7,4 (м,11) 7,5 (с, 1, Н 2) 7,65 (д, 1,7,7 Гц) 10,8 (с, 1 Н, ). Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 338 МН, 360 , 675 2 МН, 697 2. 2 (3 г 8,9 ммоль 1 экв.) растворяют в ДМФА (100 мл). К перемешиваемой смеси добавляют НС 36(845 мкл 1,1 экв.), воду (2 мл) и палладий на активированном угле (95 мг 0,1 экв.). Над раствором пробулькивают водород в течение 24 часов. После завершения реакции палладий фильтруют на целите. Растворитель удаляют в вакууме, что дает НС, 2 в виде бесцветного масла. 10 9682 1 2007.08.30 В 10 мл ДМФА последовательно добавляют , 2 (8,9 ммоль 1 экв.), (2,98 г 9,8 ммоль 1,1 экв.),(2,26 мл 2,1 экв.) и ВОР (4,33 г 1,1 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия(200 мл 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает 4,35 г 2 в виде белого твердого вещества. Выход 85 . С 27 Н 3154, 489 г.моль-1.0,48 Хлороформ/Метанол/Уксусная кислота (85/10/5). 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,28 (с, 9 Н, Во) 2,75-3,36 (м, 4 Н, 2 (СН 2) 4,14 (м,1, СН) 4,52 (м, 1, СН) 6,83-7,84 (м, 14 Н, 2 индола (10 Н), 2,(уретан) и 2 (3 г 6,13 ммоль 1 экв.) растворяют в ацетонитриле (25 мл). К полученному раствору последовательно добавляют ди-трет-бутилдикарбонат (3,4 г 2,5 экв.) и 4-диметиламинопиридин (150 мг 0,2 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия(200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия,фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/гексаном 5/5, что дает 2,53 г 2 в виде белого твердого вещества. Выход 60 . 374758, 689 г. моль-1.0,23 этилацетат/гексан (5/5). 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,25 (с, 9 Н, Во) 1,58 (с, 9 Н, ) 1,61 (с, 9 Н, ) 2,75-3,4 (м, 4 Н, 2 (СН 2 4,2 (м, 1, СН) 4,6 (м, 1 Н, СН) 7,06-8 (м, 14 Н, 2 индола 2 (3 г 4,3 ммоль 1 экв.) растворяют в смеси ДМФА/ вода (18 мл / 7 мл). Затем добавляют пиридин (772 мкл 2,2 экв.) и Бис(трифторацетокси)иодбензол (2,1 г 1,1 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1 М) и водным раствором насыщенного хлорида натрия (200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. применяют непосредственно на следующей стадии процесса формилирования.0,14 этилацетат/гексан (7/3). 364757, 661 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,29 (с, 9 Н, ) 1,61 (с, 18 Н, 2 ) 2,13 (с, 2 Н, 2 (4,3 ммоль 1 экв.) растворяют в ДМФА (20 мл). Затем добавляют 1,-диизопропилэтиламин (815 мкл 1,1 экв.) и 2,4,5-трихлорфенилформиат (1,08 г 1,1 экв.) Через 30 минут смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и про 11 9682 1 2007.08.30 мывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия(200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле,элюируя этилацетатом/гексаном 5/5, что дает 2,07 г в виде белого твердого вещества. Выход 70 . 374758, 689 г.моль-1.0,27 этилацетат/гексан (5/5). 1 ЯМР (200 МГц, -6)1,28 (с, 9 Н, ) 1,6 (с, 9 Н, ) 1,61 (с, 9 Н, ) 2,75-3,1 (м, 4 Н, 2 (СН 2 4,25 (м, 1, (СН)А) 5,39 (м, 0,4 Н, (СН 5,72 (м, 0,6 Н,(СН)А) 6,95-8,55 (м, 14 Н, 2 индола (10 Н),(уретан), 2(амиды), СНО (формил. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 690 МН, 712 , 1379 2 МН. (1,98 г 2,9 ммоль 1 экв.) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты(16 мл), анизола (2 мл) и тиоанизола (2 мл) в течение 30 минут при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и высаживают , фильтруют.(2,4 мл 4,2 экв.) и ВОР (1,53 г 1,2 экв.) последовательно добавляют в 10 мл ДМФА. Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (200 мл), водным раствором гидросульфата калия (200 мл,1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (200 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя с этилацетатом, что дает 1,16 г в виде белого твердого вещества. Выход 70 . 313865, 574 г.моль-1.0,26 Хлороформ/Метанол/ Уксусная кислота (180/10/5). 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,21 (с, 6 Н, 2 3( 1,31 (с, 9 Н, ) 2,98-3,12 (м,4 Н, 2 (СН 2 4,47 (м, 1, (СН)А) 5,2 (м, 0,4 Н, (СН 5,7 (м, 0,6 Н, (СН 6,958,37 (м, 15 Н, 2 индола (10 Н), 3(амиды), 1(уретан), СНО (формил 10,89 (м, 2 Н,2 1 (индолы. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 575 МН, 597 , 1149 2 МН,1171 2. (1 г 1,7 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок , фильтруют. Продукт , очищают с помощью препаративной ЖХВД(д, 0,4 Н, 2 (диамино 10,8 (с, 0,6 Н, 1 (индол 10,82 (с, 0,4 Н, 1 (индол 10,86 (с, 0,6 Н, 12 А (индол 10,91 (с, 0,4 Н, 12 (индол. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 475 МН, 949 2 МН. Аналогичный синтез выполнен для следующих соединений. Пример 2.(10 мл) и охлаждают до 0 С. Затем добавляют дициклогексилкарбодиимид (156 мг 0,75 ммоль 1,3 экв.). Смесь, после отфильтровывания(дициклогексилмочевина), добавляют к раствору, содержащему , СНО (0,58 ммоль 1 экв.) и триэтиламин (267 мкл 3,3 экв.) в хлористом метилене (5 мл). Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры и нагревание прекращают через 24 часа. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/метанолом 9/1, что дает 180 мг (180 мг 0,3 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок , фильтруют. Продукт , (39 мг 15 ) очищают с помощью препаративной ЖХВД (,, , 40100 мм, 5 мкм, 100 А). 273263, 488 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,19 (с, 3 Н, СН 3 ( 1,42 (с, 3 Н, СН 3 ( 2,26 (с,3 Н, 3) 3,12 (м, 4 Н, 2(СН 2 4,66 (м, 1, (СН 5,32 то же, что 5,7 (м, 1 Н, (СН 6,9-7,8 (м, 10 Н, 2 индола) 8 (м, 1, СНО (формил 8,2-9 (м, 4 Н, 3(амиды) то же, что(амин 10,87 (м, 2 Н, 2 (индолы. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 489,29 МН. Пример 4.(749 мл 1,1 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (100 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл), водным раствором гидросульфата калия (100 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в 13 9682 1 2007.08.30 вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/гексаном, что дает 370 мг (73 ) 3 в виде белого твердого вещества. Вос(Вос)(Вос)-СН 3 (350 мг 0,5 ммоль 1 экв.) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок , 3 фильтруют. В 10 мл ДМФА последовательно добавляют , 3 (0,5 ммоль 1 экв.), (121 мг 0,59 ммоль 1,2 экв.),(230 мкл 4,2 экв.) и ВОР (265 мг 1,2 экв.). Через час смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом, что дает 249 мг (85 ) С(О)СН 3 в виде белой пены. 3 (249 мг 0,42 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок ,3 фильтруют. Продукт , 3 (80 мг 23 ) очищают с помощью препаративной ЖХВД (,, 8, 40100 мм, 5 мм, 100 А). 273263, 488 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,22 (с, 3 Н, СН 3 ( 1,44 (с, 3 Н, СН 3 ( 1,8 (с,3 Н, С(О)СН 3) 3,06 (м, 4 Н, 2(СН 2 4,6 (м, 1 Н, (СН 5,6 (м, 1 Н, (СН 6,9-7,8 (м, 10 Н,2 индола) 7,99 (с, 2 Н, 2 ( 8,2-8,6 (м, 3 Н, 3 5(амиды 10,83 (с, 2 Н, 21 (индолы. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 489,32 МН. Пример 5.(10 мл) и охлаждают до 0 С. Затем добавляют дициклогексилкарбодиимид (520 мг 2,52 ммоль 2 экв.). Смесь, после отфильтровывания , добавляют к раствору, содержащему , 3 (940 мг 1,26 ммоль 1 экв.) и триэтиламин(580 мл 3,3 экв.) в хлористом метилене (5 мл). Реакционную смесь медленно нагревают до комнатной температуры и оставляют на 24 часа. Смесь разбавляют этилацетатом(50 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (100 мл),водным раствором гидросульфата калия (100 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (100 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Осадок очищают с помощью флэш хроматографии на силикагеле, элюируя этилацетатом/метанолом 9/1, что дает 530 мг (70 ) 3 в виде белой пены. 3 (530 мг 0,88 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 минут при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок, 3 фильтруют. Продукт , 3 (220 мг 30 ) очищают с помощью препаративной ЖХВД (,, , 40100 мм, 5 мм, 100 А). С 26 Н 346 О 3, 502 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,17 (с, 3, СН 3 ( 1,4 (с, 3, СН 3 ( 1,78 (с,3, С(О)СН 3) 2,23 (с, 3, 3) 3,15 (м, 4 Н, 2(СН 2 4,7 (м, 1 Н, (СН 5,55 (м, 1 Н, 14 В 5 мл ДМФА последовательно добавляют , (230 мг 0,31 ммоль 1 экв.), -(4)- (130 мг 0,38 ммоль 1,2 экв.),(145 мкл 4,2 экв.) и ВОР (167 мг 0,38 ммоль 1,2 экв.). Через 15 мин реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает Вос(4) в виде пены.-(4) (0,3 1 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 мин при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и , фильтруют. Продукт , (127 мг 42 ) с помощью препаративной ЖХВД (,, 18, 40100 мм, 5 мкм, 100 А). 283373, 515 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,81 (м, 2 Н, СН 2 ( 2,3 (м, 2 Н, СН 2 ( 3,1 (м,8 Н, 2(СН 2) то же, что 2 СН 2 ( 4,68 (м, 1, (СН 5,3 то же, что 5,73 (2 м, 1 Н, (СН 6,9-7,7 (м, 10, 2 индола) 7,98 (2 с, 1, СНО (формил 8,2-9,2 (м, 6 Н, 2 то же, что 3 В 5 мл ДМФА последовательно добавляют , 3 (218 мг 0,29 ммоль 1 экв.), -(4)- (121 мг 0,35 ммоль 1,2 экв.),(135 мкл 4,2 экв.) и ВОР (155 мг 0,35 ммоль 1,2 экв). Через 15 мин реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает (4)3 в виде пены.-(4)3 (0,29 ммоль) растворяют в смеси трифторуксусной кислоты (8 мл), анизола (1 мл) и тиоанизола (1 мл) в течение 30 мин при 0 С. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок , 3 фильтруют. Продукт , 3 (135 мг 47 ) очищают с помощью препаративной ЖХВД (,, 8, 40100 мм, 5 мкм, 100 А). 293573, 529 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,79 (м, 2 Н, СН 2 ( 1,81 (с, 3, С(О)СН 3) 2,3 (м,2 Н, СН 2 ( 3,1 (м, 8 Н, 2(СН 2) то же, что 2 СН 2 ( 4,7 (м, 1 Н, (СН 5,6 (м, 1 Н,(СН, 6,9-7,8 (м, 10, 2 индола) 8,2-9 (м, 6 Н, 2 то же, что, то же, что 3(амиды 10,85 (м, 2 Н, 2 1 Н (индолы. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 530,39 МН, 552,41 . Пример 8. ИзонипекотилВ 5 мл ДМФА последовательно добавляют , (250 мг 4,1 ммоль 1 экв.), -Изонипекотик-ОН (144 мг 4,1 ммоль 1,2 экв.),(158 мкл 15 9682 1 2007.08.30 4,2 экв.) и ВОР (181 мг 4,1 ммоль 1,2 экв.). Через 15 мин реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает Изонипекотил в виде пены.-Изонипекотил (4,1 ммоль) растворяют в смеси ДМФА (8 мл) и пиперидина (2 мл) и оставляют стоять в течение 30 мин. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок Изонипекотилфильтруют. Продукт Изонипекотил (81 мг 28 ) очищают с помощью препаративной ЖХВД (,, 8, 40100 мм, 5 мкм, 100 А). 283263, 500 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,65 (м, 4 Н, 2 СН 2 ( 2,4 (м, 1 Н, СН ( 2,7-3,3(м, 8 Н, 2(СН 2) то же, что 2 СН 2 ( 4,6 (м, 1, (СН 5,3 то же, что 5,7 (2 м, 1 Н,(СН 6,9-7,7 (м, 10, 2 индола) 7,97 (2 с, 1, СНО (формил 8-8,8 (м, 4 Н,то же, что 3(амиды 10,9 (м, 2 Н, 2 1 Н (индолы. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 501,36 МН. Пример 9. ИзонипекотилССН 3 В 5 мл ДМФА последовательно добавляют , 3 (250 мг 0,33 ммоль 1 экв.), -Изонипекотик-ОН (141 мг 0,4 ммоль 1,2 экв.),(155 мкл 4,2 экв.) и ВОР (178 мг 0,4 ммоль 1,2 экв). Через 15 мин реакция заканчивается. Смесь разбавляют этилацетатом (25 мл) и промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (50 мл), водным раствором гидросульфата калия (50 мл, 1 М) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (50 мл). Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и растворитель удаляют в вакууме, что дает ИзонипекотилССН 3 в виде пены.(8 мл) и пиперидина (2 мл) и оставляют стоять в течение 30 мин. Растворители удаляют в вакууме, осадок смешивают с эфиром и выпавший в осадок ИзонипекотилССН 3 фильтруют. Продукт ИзонипекотилССН 3 (65 мг 13 ) очищают с помощью препаративной ЖХВД (,, 8, 40100 мм, 5 мкм, 100 А). 293463, 514 г.моль-1. 1 Н ЯМР (200 МГц, -6)1,66 (м, 4 Н, 2 СН 2 ( 1,79 (с, 3, С(О)СН 3) 2,7-3,3(м, 8 Н, 2(СН 2) то же, что 2 СН 2 ( 4,54 (м, 1 Н, (СН 5,59 (м, 1 Н, (СН 6,9-7,7 (м,10, 2 индола) 8-8,6 (м, 4 Н,то же, что 3(амиды 10,82 (м, 2 Н, 2 1 (индолы. Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 515,44 МН. Примеры 10-62. Следующее соединения были получены аналогичными способами Пример 10. Пример 11. Пример 12. Пример 13. Пример 14. Пример 15. -МетилсульфонилПример 16. -ФенилсульфонилПример 17. -(3-Метил-бутаноил)-Р-ТрТр-СО-СН 3 Пример 18. -(3-тил-бутаноил)16(с, 3, СН 3 ( 1,8 (, 2 Н, 2) 2,95-3,15 (м, 6 Н, 2 (СН 2) и 23) 4,43 (м, 1 Н,СН) 5,39 (м, 1, СН) 6,02 (м, 1 Н) 6,22 (м, 1) 6,9-7,56 (м, 10, индолы) 8 (м, 1 Н) 8,31 (м, 1 Н) 10,77 и 10,79 (2, 2, 21). Масс-спектрометрия (Электроспрей), м/е 518,4 МН 540,3 . Аналитическая ВЭЖХ (симметричная защита 3,5 мк С 18 100 А, 1 мл/мин, 214 нм, элюент Н 2 О/ 0,1, градиент от 0 до 100 в 15 мин),7,12 мин, 99 . Сушка соединения вымораживанием. Пример 59. 23 Пример 60. формил Пример 61. формил Пример 62. ацетил Пример 63. Оценка активности по высвобождению гормона роста новыми средствами, усиливающими секрецию гормона роста, у новорожденных крыс Животные. Для опытов используют крыс, самцов, в возрасте 10 дней, вес тела около 25 г. Для опытов используют пятидневных щенков, содержащихся в следующих контролируемых условиях 222 С, 65 влажность и искусственный свет от 06.00 до 20.00 часов. Стандартная сухая диета и вода были доступны как добавка к материнскому кормлению. Эксперимент. За час до эксперимента щенков отделяют от их матерей и хаотично делят на группы по восемь щенков в каждой группе. Щенкам быстро вводят подкожно 100 мкл растворителя (, окончательное разбавление 1300 в физиологическом растворе), гексарелин (2, используемый как контроль) или новые соединения (300 г/кг) и убивают декапитацией 15 мин позже. Артериальную кровь собирают и немедленно центрифугируют. Образцы плазмы хранят при -20 С до проведения опытов по определению в плазме концентраций . Концентрации гормона роста в плазме измеряют с помощью , используя материалы, поставляемые,и Величины выражают в определениях - крыса 2 стандарта (эффективность 21 ед/мг) в виде нг/мл плазмы. Минимально определяемая величинакрысы составляет приблизительно 1,0 нг/ мл и колеблется внутри эксперимента в пределах приблизительно 6 . Полученные результаты из нескольких серий испытаний, в которых активность на крысах определялась, представлены в следующих табл. с 1 по 10. Таблица 1 Гормон роста,Пример Структура нг/мл 1 Кроме того, была определена зависимость активности от времени при оральном введении у собаки (1 мг/кг внутрь) по примеру 1 . Были исследованы хорошо подготовленные гончие собаки любого пола,10 лет, 10-15 кг веса. Животные питались нормальной сухой едой с водой и были на режиме 12 ч освещение/12 ч темнота, начиная с 7.00. Собакам, которые голодали, начиная с 16.00 часов предшествующего дня орально вводят соединение. Образцы крови забирают за 20 мин до введения, в процессе введения и в течение 15,30, 60, 90, 120 и 180 мин после введения. Результаты приведены в табл. 11. величин т (мин) Концентрация гормона роста (нг/мл) Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.