Слаборастворимая соль аналога рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона (РГ-ЛГ) и инъекционная суспензия пролонгированного действия, содержащая слаборастворимую соль аналога РГ-ЛГ

61 38/09, 61 5/00 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СЛАБОРАСТВОРИМАЯ СОЛЬ АНАЛОГА РИЛИЗИНГ-ГОРМОНА ЛЮТЕИНИЗИРУЮЩЕГО ГОРМОНА (РГ-ЛГ) И ИНЪЕКЦИОННАЯ СУСПЕНЗИЯ ПРОЛОНГИРОВАННОГО ДЕЙСТВИЯ, СОДЕРЖАЩАЯ СЛАБОРАСТВОРИМУЮ СОЛЬ АНАЛОГА РГ-ЛГ(57) 1. Слаборастворимая соль аналога рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона (РГ-ЛГ), размеры частиц которой предпочтительно составляют 5-200 мкм, отличающаяся тем, что аналогом РГ-ЛГ является антагонист РГ-ЛГ, выбранный из группы, состоящей из цетрореликса, антареликса, ганиреликса, антида или А 75998. 2. Соль по п. 1, отличающаяся тем, что размеры частиц составляют преимущественно 10-150 мкм. 3. Соль по п. 1, отличающаяся тем, что размеры частиц составляют преимущественно 20-125 мкм. 4. Соль по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что является солью эмбоновой кислоты. 5. Инъекционная суспензия пролонгированного действия, содержащая слаборастворимую соль аналога РГ-ЛГ, размеры частиц которой предпочтительно составляют 5-200 мкм, отличающаяся тем, что аналогом РГ-ЛГ является антагонист РГ-ЛГ, выбранный из группы, состоящей из цетрореликса, антареликса, ганиреликса, антида или А-75998. Изобретение относится к инъекционным суспензиям пролонгированного действия, содержащим терапевтически активные пептиды в виде плохо растворимых, физиологически приемлемых рентгеноаморфных или кристаллических солей. В терапии пептиды часто можно использовать надежно и с высокой биодоступностью только при парентеральном введении, т.к. при оральном приеме они разлагаются ферментами при назальном введении абсорбируется только небольшой процент дозы, а при накожном введении вовсе не происходит абсорбции. Поскольку пептиды характеризуются только очень коротким периодом полураспада в организме, парентеральное введение, пептидных препаратов, например аналогов рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона (РГ-ЛГ), так называемых суперагонистов и антагонистов РГ-ЛГ, должно применяться ежедневно для достижения желаемого эффекта, состоящего для обеих групп веществ в подавлении как лютеинизирующего гормона (ЛГ), так и фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). В результате у мужчин уменьшается образование тестостерона, а у женщин наблюдается снижение количества образуемого эстрадиола. Это называют химической кастрацией. Аналоги РГ-ЛГ рассматриваются и как суперагонисты, например гозерелин (Международное непатентованное название - МНН) или трипторелин (МНН), и как антагонисты, например цетрореликс (МНН), антид(МИН) или ганиреликс (МНН). Гозерелин и его синтез описаны в, 5(4), (1980), С.191. Бузерелин и его синтез - там же, 4(3), (1979), С.173 и, 21, (305), (1985). Декапептил и его синтез., ., До сих пор не было удачных попыток получить пролонгированные фармацевтические препараты аналогов РГ-ЛГ, обладающие замедленным рилизинг-эффектом. Например, в патенте Великобритании 2052258 описан препарат с замедленным рилизинг-эффектом, который содержит аналоги РГ-ЛГ в инъекционной форме из цинковой соли пептида, кунжутное масло и стеарат алюминия. Различие между суперагонистами и антагонистами заключается в том, что в случае применения суперагонистов механизм обратной связи приводит к нежелательному выделению большого количества гормонов в первые недели лечения, так называемому внезапному обострению болезни, которое необходимо преодолевать дополнительным лечением. В отличие от этого, в случае применения антагонистов, например цетрореликса (МНН), фармакологический эффект проявляется немедленно и без обострения. Продолжение снижения уровня половых гормонов в крови является стандартной терапией при паллиативном лечении карцином простаты и молочной железы для снижения роста опухолей, зависимых от половых гормонов, а также для лечения эндометриоза. С химической точки зрения суперагонисты РГ-ЛГ 10 и антагонисты являются нона- и декапептидами. Эффективным антагонистом РГ-ЛГ является цетрореликс, который представляет собой декапептид со следующей аминокислотной последовательностью 2. Его синтез и фармакологические свойства описаны в Европейском патенте ЕР 299402. Цетрореликс ацетат является физиологически приемлемой солью. В предклинических и клинических исследованиях было установлено, что, для снижения гормонального уровня тестостерона или эстрадиола до нужной степени вплоть до следующей инъекции, водный раствор цетрореликса ацетата должен вводиться ежедневно. Длительность действия не может быть увеличена из-за достижения пороговой дозы, хотя недельный интервал введения вместо ежедневного уже был бы заметным положительным шагом для хронических больных и негоспитализируемых пациентов. До настоящего времени аналоги РГ-ЛГ применяются путем ежедневного однократного введения раствора водорастворимых солей в виде инъекционного раствора или многократное назальное введение бузерелина ацетата в виде носовых капель ( ) или нафарелина ацетата в виде носовых капель, которые производятся только в США. Как описано выше, для таких форм медицинских препаратов предопределена необходимость частого применения. Инъекции могут проводиться только врачом, носовые капли должны вводиться несколько раз в день. Обе лекарственные формы плохо подходят для лечения хронических заболеваний. Патент - 4223282.1 описывает получение микроинкапсулированием лекарственной формы цетрореликса эмбоната пролонгированного действия. Имплантаты являются лекарственными формами, позволяющими увеличить интервалы применения. Например, будучи введенной под кожу, цилиндрическая капсула биологически разлагаемого сополимера поли(молочной-гликолевой кислоты), содержащая гозелерин ацетат,может эффективно снижать уровень тестостерона ( ). Ежемесячные инъекции суспензии биологически разлагаемых полимерных частиц, содержащих в качестве активного ингредиента лейпрорелин ацетат, также эффективно снижают уровень полового гормона в течение этого периода ( ). 2 4740 1 Обе лекарственные формы пролонгированного действия описаны в следующих патентах и патентных заявках. Их преимущество в интервалах между введениями сопровождается очевидными недостатками, которые будут указаны ниже. ЕР 0058481 описывает состав и способ получения имплантатов, распространяемых под товарным знаком. Недостаток этой лекарственной формы заключается в дорогостоящем процессе получения цилиндров, требующем экструзионного оборудования и устройств для упаковки, которые вставляют цилиндры в специально сконструированные шприцы с очень толстой канюлей. Диаметр цилиндра составляет 1 мм, а длина - несколько мм, что вызывает у пациентов болезненные при введении ощущения и гематомы. Желательно получение менее болезненных лекарственных форм. ЕР 0052510 описывает композицию и способ получения микрочастиц, содержащих, например, нафарелин ацетат. В присутствии хлорированных углеводородов активный ингредиент внедряется в сополимеры поли(молочной-гликолевой кислоты). Применение в этой композиции хлорированных углеводородов неизбежно, т.к. только в них растворимы биоразрушаемые полимеры, необходимые. Высокое остаточное содержание растворителей в лекарственной форме, полученной указанным способом, составляет примерно 1000 рр и является недостатком. В соответствии с ранними представлениями хлорированные углеводороды являются канцерогенами. Остаточное содержание растворителей в перевязочных материалах и медицинских препаратах сегодня ограничено значением 50 рр в соответствии с Европейской фармакопеей (, .4, 1,1992). Указанный способ обладает также тем недостатком, что выход активного вещества, заключенного в микрокапсулы, невелик из-за потерь пептида в водной фазе, которая обязательно присутствует в процессе. Уменьшение остаточного содержания растворителей ниже порогового значения для безопасности лекарств если и возможно, то только при применении трудоемких методов последующей обработки. Например, заявлен способ снижения остаточного содержания растворителей с помощью субкритических концентраций С 2. В 4023134 А 1 использован аналогичный описанному способ внедрения пептида в биоразлагающиеся полимеры типа сополимеров поли(молочной-гликолевой кислоты). Согласно заявке, в этом способе для уменьшения потери активного ингредиента вместо ацетата пептида, внедренного в полиэфир, применяют пептидную соль, нерастворимую в воде. Пептидными солями, нерастворимыми в воде, являются памоаты,таннаты, стеараты и пальмитаты. Как уже упоминалось, недостатком способа является необходимость применения канцерогенных углеводородов, что создает проблему физиологически неприемлемого остаточного содержания растворителей хлорметана или хлороформа. В ЕР 145240 предложен другой способ внедрения водорастворимых солей пептидов. В усложненном способе активный ингредиент внедряется со значительными потерями при переводе водного раствора активного ингредиента в биоразлагающиеся сополимеры поли(молочной-гликолевой кислот) посредством множественной эмульсии, при этом недостатком способа остается применение хлорированных углеводородов. В ЕР 505966 предложено внедрение бузерелина ацетата в сополимеры поли(молочной-гликолевой кислоты) посредством распылительной сушки раствора активный ингредиент-полимер, содержащего хлоруглеводороды. Недостатком указанного способа является применение канцерогенных хлоруглеводородов в качестве растворителей. Недостатком применения хлоруглеводородов является не только высокое содержание остаточных растворителей в готовой лекарственной форме, но и с экологической точки зрения применение указанных растворителей создает проблемы, связанные с отходами производства и техникой безопасности. В Международной заявке 9214449 предложено внедрение быстрорастворимых пептидов, таких как гормоны роста, в, например, лауриновую кислоту при смешивании активного ингредиента с указанной кислотой, дальнейшем сплавлении и размалывании смеси после охлаждения в частицы размером 100 мкм. В 5137669 предлагается получение таким же способом пролонгированых лекарственных форм антагонистов РГ-ЛГ для последующего получения инъекционных суспензий с постепенным выделением активного ингредиента. Общими факторами для обеих лекарственных форм является необходимость применения носителей для пролонгированного действия, и только в результате трудоемкого процесса получают инъекционные препараты. До настоящего времени было невозможно доказать толерантность жировых носителей, их надежность и воспроизводимость выделения активного вещества. В случае внедрения в жировую оболочку возможны побочные эффекты в виде инкапсуляции, что не допустимо при длительном лечении в течение нескольких лет. В 3430852 для бромкриптин мезилата, активного ингредиента, для которого очень трудно получить пролонгированную лекарственную форму, синтезирован новый полиэфир в виде полиолоэфира, например,глюкозы с молочной и гликолевой кислотой для получения желаемого режима выделения активного вещества. В этом случае было необходимо провести исчерпывающее и дорогое исследование и токсикологические пробы для получения лекарственной формы с достаточно длительным временем действия, поскольку было ясно, что никакая более простая и дешевая лекарственная форма не сможет дать такой же эффект. 4740 1 Эмбоновая кислота (4,4-метилен-бис-(3-окси-2-нафталиновая кислота часто применяется в фармацевтических препаратах для получения слаборастворимых солей медицинских препаратов. Указанные соли дольше расходуются в организме и таким образом проявляют пролонгированный эффект ( ,1976, стр.1007). Задачей изобретения является получение лекарственной формы с пролонгированным действием и улучшенным эффектом без применения биоразлагаемых полимеров или жиров. Для решения поставленной задачи предлагается слаборастворимая соль аналога рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона (РГ-ЛГ), размеры частиц которой предпочтительно составляют 5-200 мкм, причем аналогом РГ-ЛГ является антагонист РГ-ЛГ, выбранный из группы, состоящей из цетрореликса, антареликса,ганиреликса, антида или А-75998. В предпочтительном варианте размеры частиц составляют преимущественно 10-150, а еще более предпочтительно размеры частиц составляют преимущественно 20-125 мкм. В предпочтительном варианте соль является солью эмбоновой кислоты. Объектом изобретения также является инъекционная суспензия пролонгированного действия, содержащая слаборастворимую соль аналога РГ-ЛГ, размеры частиц которой предпочтительно составляют 5-200 мкм, причем аналогом РГ-ЛГ является антагонист РГ-ЛГ, выбранный из группы, состоящей из цетрореликса,антареликса, ганиреликса, антида или А-75998. Обнаружилось, что препарат по изобретению проявляет неожиданное пролонгированное действие и улучшенный эффект без применения биоразлагаемых полимеров или жиров. Наблюдалось не только пролонгированное действие, измеренное по длительности подавления гормонов, но также подавлялся рост опухоли в непропорциональной степени. Предложенный препарат может быть также использован в качестве агониста РГ-ЛГ, например, в лейпролиде, бузерелине, гозерелине и трипторелине. Он также может быть использован и в качестве антагонистов бомбезина и соматостатина и аналогов Р-ФРГ (рилизинг-фактора ростового гормона). Экспериментальные исследования проводились в соответствии со следующей методикой Ингибиторный эффект на карциноме молочной железы, вызванной ДМБА (7,12-диметилбенза-антраценом) у крыс- Способ Крысам-самкам - в возрасте 50 дней (диета животных Альтромин , вода) вводили перорально 20 мг ДМБА, растворенного в 1 мл оливкового масла, через желудочную трубку. Наблюдение за ростом опухоли проводилось еженедельно пальпацией животных. Примерно у 90 животных наблюдались опухоли, подходящие для экспериментального опыта, на 35-70-й день после введения. Вес опухоли определялся по методике , , , , , .(1983).--Экспериментальный вклад в изучение проблемы доз в хемотерапии рака и механизма действия эндоксана, 88651. Способ был подтвержден сравнением данных о весе опухоли, определенных пальпацией, с данными, полученными непосредственным взвешиванием (после удаления опухоли). Коэффициент корреляции составил 0,98. После того как общий вес опухолей достиг примерно 1 г, животные были случайным образом распределены в группы контроля по 7 животных каждая. Лечение начиналось немедленно после подкожного введения испытуемых веществ. Гормональное состояние животных определялось посредством мазка вагинальных клеток, окрашенных метиленовым синим, и изучалось в соответствии с методикой , ., , . (1972),(, , ). Экспериментальные данные представлены на фиг. 1. Кривая веса опухоли для нелеченных контрольных животных показывает отсутствие замедления роста. Кривые 1 и 2(о) соответствуют лечению цетрореликс ацетатом в двух различных носителях. Протяженная кривая 3 показывает резкое снижение веса опухоли после лечения эмбонатом. Поскольку в этом случае лечение проводилось только разовой дозой, опухоль продолжала расти, т.к. при разовой дозе не происходит уничтожение всех опухолевых клеток. Предложенный препарат представляет собой рентгеноаморфный осадок декапептида цетрореликса в виде соли эмбоновой кислоты. Водная суспензия этого осадка, которая может содержать изотонизирующие добавки, проявляет, по сравнению с водным раствором пептида, существенное пролонгирование действия на подопытных животных. Неожиданно оказалось, что продление действия было примерно таким же, как при инъекции суспензии, которая содержала осадок эмбоната пептида в биоразлагаемом полимере, например сополимерах поли(молочной, гликолевой кислоты). В частности, этот результат оказался неожиданным потому, что, как указывалось выше, только очень трудоемкие лекарственные формы, которые, как правило, содержат активный ингредиент в биоразлагающихся полимерах, до настоящего времени проявляли значительное пролонгированное действие. 4740 1 Этот результат был неожиданным еще и потому, что, в соответствии с . . 47, 878-883(1985), пуриметамин, производное 2,4-диаминопиримидина, не проявило различий по сравнению с его солью эмбоновой кислоты с точки зрения фармакокинетики, изменений плазменного уровня и(кривой зависимости концентрации от времени) после подкожного введения мышам. Аналогично, имипраминне проявил различий по сравнению с имипрамин эмбонатом после орального введения (25, (4), 331-338 (1989). Кристаллические инъекционные суспензии непептидных медицинских препаратов, таких как преднизолон или триамцинолон, являются известными препаратами с пролонгированным действием, так же как кристаллические цинковые суспензии инсулина, применяемые для лечения диабетов. Инсулин содержит 51 аминокислоту. Все последние перечисленные препараты являются кристаллическими, в то время как предложенный препарат по данным рентгеновского дифрактометрического анализа является аморфным. Размер частиц предложенного препарата составляет 5 - 200 мкм. Цетрореликс эмбонат с размерами частиц меньше 5 мкм проявляет пролонгирующий эффект меньший, чем у предложенного препарата. Аналогично, цетрореликс эмбонат с размерами частиц больше 200 мкм проявляет более слабый пролонгирующий эффект, чем у предложенного препарата. Другим преимуществом предложенного препарата является более высокая степень соответствия качество лекарства, полученного из данного препарата, более стабильно. Пример 1. Водный раствор эмбоновой кислоты, содержащий избыток щелочи, добавили к ацетатному раствору цетрореликса ацетата. При этом взяли эквимолярное количество пептида (рассчитанное на свободное основание) по отношению к эмбоновой кислоте. В результате образовались желтые кристаллы эмбоновой кислоты. При добавлении разбавленного раствора гидроксида натрия до рН 7-7,5 эмбоновая кислота растворилась и соосадилась с декапептидом в виде водной соли эмбоната цетрореликса. Молярное соотношение пептидэмбоновая кислота составило 21 (моль/моль). Осадок отфильтровали, промыли водой и высушили. Пример 2. Ацетат цетрореликса и эмбоновую кислоту в эквимолярном соотношении растворили в диметилацетамиде, и раствор добавили по каплям в воду. Белый осадок композиции цетрореликс эмбонат пептидэмбоновая кислота с соотношением 21 (моль/моль) отфильтровали и высушили. Пример 3. Цетрореликс и эмбоновую кислоту в молярном соотношении 11,6 растворили в диметилацетамиде, с возможным содержанием воды, и полученный раствор добавили по каплям в воду. Желтый осадок отфильтровали и высушили. Полученный осадок перевели в пастообразное состояние 70 этанолом, высушили при 35 С и просеяли через сито с размерами 80-125 мкм. Пример 4. Щелочной раствор эмбоната добавили к водному этанольному раствору ацетата пептида в молярном соотношении пептидэмбоновая кислота, равном 21. Белый осадок отфильтровали и высушили. Сухой осадок смочили 50 этанолом, высушили в вакуумной сушильной камере и пропустили через сито. Полученный белый осадок содержит композицию пептидэмбонатная соль в соотношении 21 (моль/моль). Пример 5. Щелочной раствор эмбоната добавили к водно-этанольному раствору ацетата пептида в молярном соотношении пептидэмбоновая кислота, равном 11,6. Желтый осадок отфильтровали и высушили. Высушенный осадок смочили 50 этанолом, высушили в вакуумной сушильной камере при 35 С и просеяли через сито. Полученный желтый продукт содержал пептид-соль эмбоната в соотношении 21 в избытке эмбоновой кислоты. Эксперименты по продолжительности действия на животных. Суспензии осадков ввели подкожно крысам-самцам в дозе 0,5 мг цетрореликса на кг веса тела и измеряли после введения действие пептида по уровням тестостерона в плазме. Действие цетрореликса заключается в снижении уровня тестостерона. Инъекционную суспензию тестировали в соответствии с 40232134 А 1. Указанная суспензия содержала эмбонат пептида в сополимерах поли(молочной, гликолевой кислот). Продолжительность действия лекарственной формы цетрореликса без рилизинг-эффекта определили при исследовании водного раствора ацетата цетрореликса. На фиг. 3 показано значение уровня тестостерона, определенного после 300 ч введения крысам-самцам водного раствора ацетата цетрореликса (-20761). Эффект подавления тестостерона достигался в течение 6 ч после введения. Подавление до значения ниже 1 нг/мл еще можно было отметить у двух животных через 24 ч, а у трех других через 48 ч или два дня. На фиг. 2 показан уровень тестостерона после 300 ч у четырех животных ( 11-14) после введения той же дозы цетрореликса в виде суспензии эмбоната цетрореликса (-20762) без вязких добавок, полученной в примере 1 (-20762). Подавление тестостерона также достигалось спустя 6 ч после введения, уровни повы 5 4740 1 шались выше 1 нг/мл у одного животного спустя 192 ч (восемь дней), у других трех животных достоверно продолжалось до девятого дня. На фиг. 4 показаны изменения уровня тестостерона у крыс при лечении эмбонатом согласно изобретению(размер частиц 80-125 мкм). Сравнение фиг. 2-3 с фиг. 4 убедительно показывает преимущество предложенного препарата. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.