Средство для коррекции нарушений в системе мать-плод при эндотоксинемии в период беременности

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДСТВО ДЛЯ КОРРЕКЦИИ НАРУШЕНИЙ В СИСТЕМЕ МАТЬ-ПЛОД ПРИ ЭНДОТОКСИНЕМИИ В ПЕРИОД БЕРЕМЕННОСТИ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Милош Татьяна Сергеевна Максимович Наталия Евгеньевна(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(56) КАЖИНА и др. Инфекции репродуктивного тракта женщин. - Гродно, 2005. . 167-170. МИЛОШ Т.С. и др. Дисфункция эндотелия экспериментальные и клинические исследования. Трудымеждународной научно-практической конференции. - Витебск, 2006. - . 93-96. МИЛОШ Т.С. и др. Здоровая мать здоровый ребенок Сб. материаловсъезда педиатров Республики Беларусь. - Минск, 2006. - . 306-309. ШЕЙБАК Л.Н. и др. Биологически активные соединения в регуляции метаболического гомеостаза. Материалы международной научной конференции. Ч. 2. Гродно, 2000. - . 298-301.(57) Применение таурина в качестве средства для коррекции нарушений в системе матьплод в период беременности при эндотоксинемии, вызванной бактериальным липополисахаридом. Изобретение относится к области медицины, а именно к лекарственным средствам, и может быть использовано для коррекции нарушений в системе мать-плод при эндотоксинемии, имеющей место при инфицировании во время беременности. Инфекция во время беременности определяет уровень мертворождаемости и ранней неонатальной смертности, является актуальной проблемой современного акушерства. У выживших детей с внутриутробной инфекцией очень часто в дальнейшем развиваются серьезные нарушения здоровья, среди которых значительное место составляют нарушения со стороны нервной системы Черенкевич А.А., Богданович Л.Н., Смать И.И., Гаврилюк С.И.,Медведик О.В., Ницыпорович И.Н. Особенности течения перинатального периода у детей с патологией нервной системы. Безопасное материнство ввеке Сб. материаловсъезда акушеров-генекологов и неонатологов республики Беларусь. - 2007. - С. 523-525. Известно применение для профилактики осложнений инфекции в период беременности и предотвращения внутриутробной инфекции плода антимикробных препаратов, ан 13519 1 2010.08.30 тибиотиков, противогрибковых, противовирусных средств, иммуномодуляторов, средств системной энзимтерапии, антиоксидантов, эубиотиков Кажина М.В. Инфекции репродуктивного тракта женщин. Монография, 2005. - С. 167-216. Недостатком данных препаратов является их токсичность для плода, возможность возникновения внутриутробных пороков развития плода, недостаточная эффективность. Задача изобретения - расширить арсенал средств с низкой токсичностью и высоким терапевтическим эффектом, используемых для лечения нарушений в системе мать-плод при эндотоксинемии, обусловливающей возникновение патологии при инфицировании во время беременности. Поставленная задача решается путем применения аминокислоты таурин для коррекции нарушений в системе мать-плод при эндотоксинемии в период беременности, вызванной бактериальным липополисахаридом. Нами были проведены эксперименты на 140 беременных крысах, 46 плодах и 192 новорожденных крысятах путем проведения исследований по изучению физического развития и показателей крови потомства крыс, а также продукции оксида азота, активности окислительных процессов и морфофункциональных изменений эндотелия сосудов в организме самок крыс. Экспериментальные животные в количестве 140 белых беспородных беременных крыс массой 200-230 г были разделены на 3 группы (2 опытные,119 и контрольная,21). Выявление беременных крыс осуществляли по наличию сперматозоидов во влагалищном мазке (1-й день беременности). Беременным крысам первой опытной группы (50) моделировали инфицирование путем внутримышечного введения компонента грамотрицательных микроорганизмов - липополисахарида (ЛПС) .в дозе 0,4 мг/кг внутримышечно. Контрольная и первая опытная группа были, в свою очередь, подразделены на три подгруппы (1, 2, 3), в которых введение препаратов осуществляли соответственно на 2-5-е сутки - ранний период имплантации и эмбриогенеза, на 11-14-е сутки - период плацентации и на 17-18-е сутки беременности - поздний период, или период органогенеза. Животным второй опытной группы (44) с 11-х суток беременности наряду с ЛПС внутримышечно вводили аминокислоту таурин в дозе 10 мг/кг в течение 7 суток ежедневно. Крысы трех контрольных групп (46) в аналогичные сроки беременности внутримышечно получали эквиобъемное количество изотонического раствора(0,5 мл). У 21 беременной крысы (опыт -14, контроль -7) оценивали прибавку веса за период беременности (с 1-х по 20-е сутки), определяли количество крысят в помете и у 109 крысят опытных групп и 44 крысят контрольной группы в постнатальном периоде изучали физическое развитие (вес, прирост массы тела, сроки отлипания ушей, появления шерсти, прорезывания резцов, открытия глаз). У 39 новорожденных крысят (8 крысят 1-й опытной, 12 крысят 2-й опытной, 10 крысят 3-й опытной группы и 18 крысят контрольной группы) определяли содержание эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови на 1-е, 5-е, 12-е сутки постнатального развития. Подсчет содержания эритроцитов осуществляли в сетке Горяева общепринятым методом, определение гемоглобина - фотометрически на КФК-3 гемоглобинцианидным методом с использованием трансформирующего раствора и калибровочной кривой. Взятие материала (крови и плацент, аорты) для исследований осуществляли в условиях наркоза (внутримышечно тиопентал натрия, 40-60 мг/кг). Плазму крови получали путем центрифугирования крови, забранной из общей сонной артерии, с добавлением гепарина (20 ЕД/мл) при 1000 об/мин в течение 10 мин, а также при 3000 об/мин в течение 20 мин. Плаценты, взятые для исследований, замораживали в жидком азоте, а перед исследованием гомогенезировали с использованием фосфатного буфера. 2 13519 1 2010.08.30 У самок крыс изучали продукцию оксида азота , активность окислительных процессов, а также морфофункциональное состояние эндотелия сосудов. Изучение продукции оксида азота в организме 74 беременных самок крыс производили общепринятым фотометрическим методом на основании определения уровня нитритов и нитратов в плазме крови с помощью реактива Грисса и кадмия на фотометре КФК-3 при 525 нм,. ., 1996. . 269. - . 434-442. Оценку активности окислительных процессов в организме беременных крыс, получавших ЛПС, в плазме крови осуществляли по степени перекисного окисления липидов(ПОЛ) и уровню показателей антиоксидантной защиты (АОЗ). Определение содержания показателей прооксидантно-антиоксидантного состояния выполнено в плазме крови 76 крыс и плацентах 31 крысы. Определение активности перекисного окисления липидов осуществляли спектрофотометрически (СА-46, ЛОМО, Россия) по концентрации диеновых конъюгатов (ДК), малонового диальдегида (МДА), оснований Шиффа (ОШ). Содержание ДК определяли по интенсивности УФ-поглощения конъюгированных диеновых структур гидроперекисей липидов при длине волны 232-234 нм Костюк В.А., Потапович А.И., Лунец Е.Ф. Спектрофотометрическое определение диеновых конъюгатов // Вопросы мед. химии. - 1984.4. - С. 125-127. Определение МДА оценивали по образованию с тиобарбитуровой кислотой окрашенных продуктов на спектрофотометре.,.. . , 1978. - . 86. - . 271-278- ,,. - , 1991. --- . - 291 Уровень ОШ определяли на спектрофотометре фирмыпо интенсивности флуоресценции хлороформного экстракта при длинах волн возбуждения и эмиссии 344 нм и 440 нм соответственно -, ,/ -, , // - . - 1991. - -. - 291 . Состояние антиоксидантной защиты в плазме крови оценивали по концентрации ретинола и -токоферола, а в плаценте - ретинола, -токоферола и каталазы на спектрофлуориметре -4010 фирмы . Содержание ретинола (витамина А) определяли по интенсивности флуоресценции гексанового экстракта при длине волны возбуждения 335 нм и длине волны флуоресценции (эмиссии) 460 нм. Уровень -токоферола (витамина Е) оценивали по интенсивности флуоресценции гексанового экстракта при длинах волн возбуждения и флуоресценции 292 и 325 нм соответственно Черняускене Р.Ч., Варшкявичене З.З., Грибаускас П.С. Одновременное флюориметрическое определение концентраций витаминов Е и А в сыворотке крови / Лабораторное дело. - 1984. - Т. 6. - С. 362-365. Активность каталазы определяли колориметрическим методом, основанном на реакции солей молибдена с перекисью водорода, генерируемой каталазой Королюк М.А., Иванова Л.И.,Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения каталазы / Лабораторное дело. - 1988.1. - С. 16-19. У 42 беременных крыс определяли выраженность функциональных нарушений эндотелия кровеносных сосудов (эндотелий-зависимой дилатации и эндотелий-независимой дилатации), а также осуществляли оценку его морфологических повреждений (степень десквамации эндотелия кровеносных сосудов). Эндотелий-зависимую дилатацию (ЭЗД) изучали микроскопически на основании определения прироста диаметра колец аорты бе 3 13519 1 2010.08.30 ременных крыс, предварительно спазмированных норадреналином (10-6 М), в ответ на ацетилхолин (АцХ, 10-5 М). Эндотелий-независимую дилатацию (ЭНД) колец аорты оценивали аналогичным образом в ответ на глицеролтринитрат (ГТН, 10-6 М).,.,./(. ,., , .). - -, -, 1995. - . 7-18..,-,/ .. - 1992. - . 43. - . 353-365 Степень морфологического повреждения эндотелия кровеносных сосудов изучали по количеству десквамированных циркулирующих эндотелиальных клеток (ЦЭК) в 100 мл плазмы крови методом микроскопии.,./. . - 1973. - .3. - . 665-674 в модификации Власов Т.Д. Системные нарушения микроциркуляции как следствие органной постишемической реперфузии / Патофизиология микроциркуляции и гемостаза Сб. науч. трудов . - Санкт-Петербург, 1998. - С. 90-106. Полученные данные обработаны методами вариационной статистики с использованием -критерия Стьюдента. Установлен целый ряд нарушений в течении беременности и постнатального периода после введения беременным крысам инфекционного агента. У крыс (11) с введением ЛПС во время беременности в 24 случаев установлено ее прерывание (у 5 крыс - в раннем периоде и 6 крыс - в период плацентации). У крыс с введением ЛПС отмечали также более низкую прибавку массы тела, особенно у крыс, получавших ЛПС в 1-й и 2-й периоды. Так, прибавка массы тела крыс, получавших ЛПС, за период беременности составила после введения препарата в период эмбриогенеза - 84,32,97 г (7,0,05), что меньше, чем у крыс 1-й контрольной группы - 106,45,08 г (7) после введения ЛПС в период плацентации - 85,72,54 г (7,0,001), в контроле 2 - 106,43,89 г (7) после введения ЛПС в период завершения органогенеза - 91,04,88 г (10,0,05), в контроле 3 - 106,45,08 г (7). В помете крыс, получавших ЛПС в 1-й период беременности, количество крысят составило 7,60,46 (8,0,001), что меньше, чем у крыс 1-й контрольной группы(11,50,46,8), у крыс, получавших ЛПС во 2-й период - 7,50,63 (8,0,001), во 2-й контрольной группе - 11,10,35 (8), а у крыс с введением ЛПС в период органогенеза - 9,50,73 (8), в контроле 3 - 11,30,37 (8). Таким образом, количество крысят в помете крыс, получавших ЛПС во все периоды беременности, было меньше чем в контроле, наименьшее количество крысят отмечалось у крыс, получавших препарат в периоды эмбриогенеза и плацентации. Определение динамики веса крысят в постнатальном периоде выявило следующие изменения (табл. 1). Вес новорожденных крысят 1-й подгруппы составил 5,60,05 г (17),в 1-й контрольной группе - 5,90,14 г (13). Через сутки прирост веса крысят опытной группы составил 10,7(0,05), что меньше, чем у крысят в контроле (16,9 ), на 5 сутки - 26,8(0,001), в контроле - 54,2 , на 7-е сутки - 30,4(0,001), в контроле- 432(0,05), в контроле - 470(10). Таким образом, крысята 1-й опытной группы отставали в весе от контрольных до 20-х суток постнатального развития. Установлено, что при рождении вес крысят 3-й подгруппы не отличался от веса крысят контроля 3, а со 2-х суток крысята отставали в прибавке их массы тела по сравнению с контрольными крысятами. 13519 1 2010.08.30 Таблица 1 Масса тела (г) крысят от крыс с введением липополисахарида (ЛПС) в различные сроки беременности, а также ЛПС и таурина в период плацентацииПодгруппы животных Контроль 1 Контроль 2 Контроль 3 Примечание-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытных и контрольной групп-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытных групп. Вес новорожденных крысят 2-й подгруппы крыс, получавших ЛПС в период плацентации, составил 5,10,13 г (7,0,001), в контроле - 6,10,07 г (8). На 2-е сутки прирост веса крысят опытной группы составил 9,8(0,001), что ниже, чем в контроле(0,001), в контроле - 90,2 , на 12-е сутки - 224(0,001), в контроле - 269 , на 20-е сутки - 298(0,001), в контроле - 472 . Видно, что введение ЛПС в наибольшей степени нарушало развитие потомства при его введении в период плацентации. Вес новорожденных крысят группы крыс, получавших ЛПС в 3-й период беременности (период завершения органогенеза), составил 5,50,22 г (8,0,05), в контрольной группе - 6,20,07 г (7), через сутки прирост массы тела крысят опытной группы составил 5,5(0,05), что так же, как и в 1-й опытной, значительно меньше, чем у крысят 3 й контрольной группы (15 ), на 5-е сутки - 33(0,05), в контроле - 52 , на 7-е сутки - 87(0,05), в контроле - 90 , на 12-е сутки - 251(0,05), в контроле - 258 ,на 20-е сутки - 407(0,05), в контроле - 427 . Таким образом, как и у крысят, родившихся от самок крыс, получавших ЛПС в 1-й период беременности, у крысят, родившихся от крыс опытной группы, получавших препарат в период плацентации, наблюдали более низкие показатели массы тела крысят как при рождении, так и при их последующем развитии, чем у крысят 3-й подгруппы. Видно, что потомство, рожденное крысами, получавшими ЛПС, отставало в прибавке массы тела во все изучаемые сроки постнатального периода. 5 13519 1 2010.08.30 Появление других показателей физического развития у крысят 2-й подгруппы также запаздывало (0,001) отлипание ушей отмечалось на 4-е сутки постнатального периода(в контрольной группе - на 2-е сутки), появление шерсти происходило на 6-7-е сутки (в контрольной группе - на 5-е сутки), прорезывание резцов - на 11-е сутки (в контрольной группе - на 8-е сутки), открытие глаз - на 16-17-е сутки (в контрольной группе - на 15-е сутки). У потомства крыс, получавших ЛПС в период эмбриогенеза, наблюдали более низкие показатели массы тела до 7-х суток постнатального развития, у крысят, родившихся от самок крыс, получавших ЛПС в период плацентации, более низкие показатели массы тела отмечались до 12-х суток жизни. Крысята, рожденные от крыс, получавших препарат в период завершения органогенеза, практически не отставали в прибавке массы тела от крысят контрольной группы. У беременных крыс с введением ЛПС и таурина число случаев ее прерывания было меньше (11 ). У крыс с введением ЛПС и таурина в период плацентации отмечали более высокую прибавку массы тела за период беременности, чем у крыс, получавших ЛПС. У крыс, получавших ЛПС и таурин, отмечалось повышение прибавки веса до 106,33,40 г (7,0,001), что выше в сравнении с первой опытной группой - 85,72,54 г (7,0,001) и не отличалось от прибавки веса беременных крыс контрольной группы - 106,43,89 г(7,0,05). В помете крыс, получавших ЛПС и таурин, количество крысят составило 100,5 (8,0,05), что больше, чем в 1-й опытной группе - и не отличалось от данного показателя в контроле (0,05). Вес новорожденных крысят группы крыс, получавших ЛПС и таурин в период плацентации, составил 6,20,12 г (9,0,001), через сутки прирост массы тела крысят составил 12,9 , на 5-е сутки - 45,2(0,001), на 7-е сутки - 127,4(0,001), на 12-е- 237(0,05), на 20-е сутки - 432 , что значительно больше чем у крысят 2-й опытной группы с введением ЛПС в период плацентации (0,001). При этом прибавка массы тела крысят не отличалась от значений этого показателя в контроле (0,05). Таким образом, у потомства крыс, получавших ЛПС в период плацентации, отмечались более низкие показатели массы тела, чем в контроле до 20-х суток жизни, а у крысят,рожденных от крыс, получавших ЛПС и таурин, отставание в весе от крысят контрольной группы отмечалось до 7-х суток постнатального периода. Сроки появления признаков физического развития у потомства крыс, получавших ЛПС и таурин, не отличались от времени их появления в контрольной группе (0,001). В частности, отлипание ушей отмечалось на 2-е сутки постнатального периода, появление шерсти - на 5-е сутки, прорезывание резцов - на 8-е сутки, открытие глаз - на 14-е сутки. Изучение содержание эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови у крысят опытной группы с введением ЛПС выявило развитие анемии в постнатальном периоде(табл. 2). Причем наиболее существенные изменения эритроцитов и гемоглобина отмечены во 2-й подгруппе с введением ЛПС в период плацентации. Так, содержание эритроцитов в единице объема крови у крысят 2-й подгруппы при рождении составило (1,60,11)1012/л (7,0,001), гемоглобина - 1027,0 г/л (7,0,05), в контроле 2 - (2,80,10)1012/л,17 и 1244,3 г/л,15, соответственно на 5-е сутки постнатального периода содержание эритроцитов в единице объема крови в опытной группе составило (1,80,11)1012/л,12,0,001, гемоглобина - 833,0 г/л,9,0,001, у крысят контроля 2 - (2,40,1)1012/л,18, и 1164,9 г/л,6, соответственно, на 12-е сутки жизни содержание эритроцитов у крысят 2-й подгруппы 6(2,30,10)1012/л,10,0,001, гемоглобина - 842,8 г/л,9,0,001, в контроле (2,80,1)1012/л, (14), и 1242,8 г/л,7, соответственно. Содержание эритроцитов в единице объема крови у крысят с введением ЛПС и таурина в период плацентации при рождении составило (2,40,03)1012/л,5,0,05, содержание гемоглобина - 1241,58 г/л,6,0,05, на 5-е сутки постнатального периода содержание эритроцитов составило (2,360,11)1012/л,6,0,05, гемоглобина 1123,8 г/л,7,0,001, на 12-е сутки жизни содержание эритроцитов составило(2,90,13)1012/л,9,0,05, гемоглобина - 1171,30 г/л,7,0,001. Таблица 2 Содержание эритроцитов (Эр) и гемоглобинав крови потомства крыс,получавших липополисахарид (ЛПС) в различные сроки беременности и липополисахарид с таурином в период плацентацииГруппы животных Контроль 1 Контроль 2 Контроль 3 Опыт 1 Примечание-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытных и контрольных групп-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытных групп. Видно, что у новорожденных крысят, рожденных от крыс с введением ЛПС в период плацентации, содержание эритроцитов и гемоглобина в единице объема крови было ниже,по сравнению со значениями этих показателей в контроле, во все исследуемые сроки постнатального периода. У крысят же, рожденных крысами с введением ЛПС и таурина в период плацентации, содержание эритроцитов в единице объема крови было меньше, чем в контроле, до 5-х суток жизни с исчезновением различий по этому показателю к 12-м суткам и было выше, чем у крысят группы крыс с введением ЛПС. Содержание гемоглобина в единице объема крови крысят было больше, чем у крысят с введением ЛПС, во все исследуемые сроки и не отличалось от данного показателя в контрольной группе. Введение таурина препятствует развитию анемии у потомства крыс, получавших в период плацентации микробный агент. 7 13519 1 2010.08.30 Исследовали продукцию оксида азота с целью изучения его роли в патогенезе перинатальных нарушений при введении эндотоксина в период беременности путем определения содержания в плазме крови его стабильных метаболитов - нитритов и нитратов. В результате изучения продукции оксида азота установлено повышенное содержание нитритов и нитратов в плазме крови крыс, получавших ЛПС, до 99,54,65 мкМ/л (24,0,001), в контроле этот показатель составил 33,52,92 мкМ/л (25), что свидетельствует о возможном участии -зависимых механизмов в патогенезе нарушений, возникающих у потомства крыс с введением эндотоксина (табл. 3). Таблица 3 Содержание нитритов и нитратов , диеновых конъюгатов (ДК),малонового диальдегида (МДА), оснований Шиффа (ОШ), ретинола,-токоферола в плазме крови беременных крыс после введения липополисахарида (ЛПС), а также совместно ЛПС и тауринаПоказатели(М/л) ДК (233 ЕД/мл) МДА (мкМ/л) ОШ (ЕД/мл) Ретинол (мМ/л) Группа животных ЛПС (24) ЛПСтаурин (25) 99,54,65 55,65,60 2,10,13 0,950,12 2,90,22 2,30,07 148,52,26 137,92,67 3,60,17 5,00,19 22,10,65 24,80,23 Примечание-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытной и контрольной групп-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытных групп. В группе крыс, получавших таурин, отмечались более низкие концентрации нитритов и нитратов (55,65,6 мкМ/л,25) по сравнению с первой опытной группой (0,001),что отражает способность таурина уменьшать уровеньлибо в результате его непосредственного нейтрализующего действия, либо вследствие ингибирования индуцируемой-синтазы, активируемой ЛПС-препаратом. При изучении динамики показателей, характеризующих прооксидантно-антиоксидантное состояние диеновых конъюгатов (ДК), малонового диальдегида (МДА), оснований Шиффа (ОШ) в организме беременных самок крыс, получавших ЛПС, выявлено увеличение активности перекисного окисления липидов на фоне уменьшения антиоксидантной защиты (табл. 3, 4). Так, концентрация ДК в плазме крови у крыс, получавших ЛПС, возросла до 2,10,13233 ЕД/мл, (21,0,001) по сравнению с контролем (1,20,1233 ЕД/мл,23), или на 75 , а в плаценте - от 6,80,61233/г (11) до 11,60,65233/г, или на 71(8,0,001). Содержание МДА в плазме крови крыс первой опытной группы увеличилось от 1,60,10 мкМ/л в контроле (20) до 2,90,2 мкМ/л (19), или на 81(0,001), в плаценте - от 5,61,19 нМ/г (8) до 13,40,92 нМ/г (9), или на 139(0,05). Концентрация ОШ в плазме крови крыс, получавших ЛПС, увеличилась от 137,83,1 ЕД/мл (17) - в контроле до 148,52,26 ЕД/мл (24), или на 7,8(0,05) и в плаценте - от 94,44,46 ЕД/г (12) до 136,21,88 ЕД/г (10), или на 44 13519 1 2010.08.30 У крыс, получавших ЛПС и таурин в период плацентации, отмечалось снижение ДК в плазме крови по сравнению с ДК в группе с введением ЛПС, до 0,950,12233 ЕД/мл(19), или на 55(0,001), а в плаценте - до 4,10,74 233/г, или на 65(7,0,001). В группе крыс, с введением ЛПС и таурина наблюдались более низкие значения МДА в плазме крови (2,30,07 мкМ/л,17) по сравнению с его значением в группе с введением ЛПС (0,05) со снижением на 21 и в плаценте - 9,50,7 нМ/г (7) со снижением на 29(0,001). У крыс, получавших ЛПС и таурин, отмечалось снижение ОШ в плазме крови по сравнению с его значением в первой опытной группе до 137,92,67 ЕД/мл (20) или на 7,1(0,05), и в плаценте - до 110,54,3 ЕД/г (8), или на 18,9(0,05). При изучении состояния антиоксидантной защиты получены следующие результаты. Содержание ретинола в плазме крови самок крыс с введением ЛПС уменьшилось от 4,90,31 мМ/л (23) до 3,60,17 мМ/л (17), или на 27(0,05), в плаценте - от 83,03,17 мМ/г (12) и до 57,13,61 мМ/г (7), или на 31(0,05). Таблица 4 Содержание диеновых конъюгатов (ДК), малонового диальдегида (МДА), оснований Шиффа (ОШ), ретинола, -токоферола и каталазы в плаценте беременных крыс после введения липополисахарида (ЛПС), а также совместно ЛПС и тауринаПоказатели ДК (233/г) МДА (нМ/г) ОШ (ЕД/г) Ретинол (мМ/г) Группы животных Контроль (13) ЛПС (10) ЛПСтаурин (8) 6,80,61 11,60,65 4,10,74 5,61,19 13,40,92 9,50,7 94,44,46 136,21,88 110,54,3 83,03,17 57,13,6 83,011,83 142,012,88 126,62,12 234,222,03 0,50,06 1,60,26 0,70,07 Примечание-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытной и контрольной групп-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытных групп. Концентрация -токоферола в плазме крови от 24,80,13 мкМ/л (20) до 22,10,65 мкМ/л (22,0,001), что составило 11 , в плаценте - от 142,112,88 мкМ/г(13) до 126,62,12 мкМ/г, или на 11(6,0,05). Активность каталазы в плаценте крыс, получавших ЛПС, повысилась от 0,50,06 мкМ 22/г белка/с (13) до 1,60,3 мкМ 22/г белка/с (6,0,05), что составило 220 . В группе крыс с введением ЛПС и таурина отмечалось повышение концентрации ретинола, по сравнению с его значением в группе крыс с введением ЛПС, до 5,00,19 мМ/л(0,05). У крыс, получавших ЛПС и таурин, отмечалось увеличение концентрации токоферола в плазме крови до 24,80,23 мкМ/л, или на 12(27,0,001), а в плаценте - до 234,222,03 мкМ/г, или на 85(7,0,05). В группе крыс с введением таурина отмечено снижение концентрации каталазы до 0,70,07 мкМ 22/г белка/с, или на 56(7,0,05). Характер изменения показателей АОЗ свидетельствует об уменьшении антиоксидантного резерва в организме беремен 9 13519 1 2010.08.30 ных крыс после введения ЛПС, как в плазме крови, так и в плаценте, и наличии у таурина корригирующих свойств. Изучение выраженности морфофункциональных изменений со стороны эндотелия кровеносных сосудов у самок крыс, получавших ЛПС, выявило наличие следующих изменений (табл. 5). Таблица 5 Вазоконстрикция (ВК), эндотелий-зависимая (ЭЗД) и эндотелий-независимая дилатация (ЭНД), диаметрколец аорты после действия ацетилхолина (АцХ) , а также после действия глицеролтринитрата (ГТН) и количество десквамированных циркулирующих эндотелиальных клеток (ЦЭК) в плазме крови у беременных крыс с введением липополисахарида (ЛПС), а также совместно ЛПС и тауринаПоказатели ВКЭЗДот исх.после АцХ ЭНДот исх.после ГТН ЦЭК/100 л Группы животных Контроль (8) ЛПС (22) ЛПСтаурин (12) 336,3 385,5 347,8 7010,8 52,3 385,3 970,6 724,7 802,9 883,6 857,4 853,3 990,8 990,7 980,4 40,7 9412,3 212,0 Примечание-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытной и контрольной группы-0,05,-0,001 - различия статистически значимы между показателями опытных групп. У крыс, получавших ЛПС, отмечена тенденция к более выраженной вазоконстрикторной реакции колец аорты на норадреналин (, 10-6 М) (38 ,0,05) по сравнению с ВК в контрольной группе - 33 . Прирост диаметра колец аортыв ответ на ацетилхолин (АцХ) (10-5 М) у крыс первой опытной группы был существенно меньше, чем в контроле (52,3 ,22, и 7010,8 ,8, соответственно (0,001, во второй опытной группе он составил 385,3(12,0,05) и был больше по сравнению со значением в первой опытной группе с ведением ЛПС (0,001). В результате после воздействия АцХ на предварительно спазмированные норадреналином кольца аорты их диаметру крыс, получавших ЛПС, составил 724,7(17,0,001) от исходного диаметра колец аорты, в то время как в контролесоставил 970,6(8,0,05). Эндотелий-независимая дилатация (ЭНД), определяемая приростом диаметра колец аорты после воздействия на предварительно спазмированныекольца аорты глицеролтринитратом (ГТН, 10-6 М) непрямым донором оксида азота в качестве эндотелий-независимого вазодилататора, не была изменена у крыс с введением эндотоксина, по сравнению с ее значением у крыс контрольной группы, и составила 857,4 и 883,6 соответственно (0,05). Последнее свидетельствует об отсутствии нарушений миогенных механизмов регуляции сосудистого тонуса. У крыс с введением ЛПС и таурина отмечено меньшее снижение диаметра колец аорты на НА - 34 , чем в группе с введением ЛПС (0,05), и не отличалось от этого показателя в контроле (0,05). В группе крыс, получавших ЛПС и таурин, отмечено увеличение диаметра спазмированных НА колец аорты после воздействия АцХ до 802,9(10,0,001) от исходного, что отражает улучшение состояния эндотелийзависимых механизмов вазодилатации. У крыс с введением ЛПС и таурина ЭНД колец аорты не изменилась - 853,3(8,0,05). При этом диаметр колец аорты крыс,10 13519 1 2010.08.30 предварительно спазмированных НА, после добавления ГТН составил 980,4(9,0,05). Исследования по изучению функционального состояния эндотелия кровеносных сосудов выявили, что у крыс, получавших ЛПС, имеется наличие существенных функциональных изменений. Они проявляются в повышении вазоконстрикторных реакций под влиянием норадреналина, выраженным ухудшением эндотелий-зависимых реакций под влиянием ацетилхолина и повышением количества циркулирующих эндотелиальных клеток. При этом эндотелий-независимые вазодилататорные реакции у крыс, получавших ЛПС, определяемые добавлением непрямого донора оксида азота - глицерол-тринитрата,нарушены не были. Это свидетельствует об отсутствии нарушений гуанилатциклазного механизма у крыс, получавших ЛПС. Введение таурина уменьшало степень вазоактивных реакций эндотелия у беременных крыс, получавших ЛПС в период плацентации. При изучении выраженности десквамации эндотелия кровеносных сосудов, как маркера морфологического повреждения, оцениваемой на основании количества циркулирующих эндотелиальных клеток, установлено существенное повышение морфологического повреждения эндотелия кровеносных сосудов у крыс, получавших в период беременности ЛПС. Так, количество ЦЭК в плазме крови крыс первой опытной группы составило 9412,3/100 цл(0,001,22), в то время как в контроле значение этого показателя составило 40,7/100 л (8). В группе крыс с введением аминокислоты таурин отмечено снижение количества ЦЭК, по сравнению со значением его в первой опытной группе с введением ЛПС, до 212,0/100 л (0,001,12), что указывает на ее эндотелиопротекторный эффект. Изучение морфофункционального состояния эндотелия кровеносных сосудов беременных самок крыс с введением эндотоксина показало, что важное значение в генезе выявленных нарушений у потомства при инфекции во время беременности могут играть морфофункциональные нарушения эндотелия кровеносных сосудов. Учитывая, что эндотелий играет ключевую роль в регуляции сосудистого тонуса и кровотока, в том числе и в матке, очевидно, что его повреждение может стать важным звеном патогенеза нарушений у потомства крыс, испытывающих воздействие на организм ЛПС. Введение аминокислоты таурин беременным крысам, получавшим ЛПС, приводит к уменьшению нарушений в системе мать-плод, вызванных его введением отставания физического развития потомства, снижению выраженности анемии в постнатальном периоде, уменьшению продукции оксида азота и активности окислительных процессов,улучшению морфофункционального состояния эндотелия кровеносных сосудов у крыс с введением эндотоксина, что указывает на ее корригирующие свойства. Корригирующие эффекты таурина, обладающего ингибирующим в отношении индуцированной -синтазы действием, вызывают нормализацию продукции , снижение ПОЛ, повышение антиоксидантного резерва, устраняют дисфункцию эндотелия, что подтверждает вовлечение оксида азота, окислительных процессов и дисфункции эндотелия сосудов в патогенез нарушений в системе мать-плод при беременности, осложненной инфекцией. В работе проведены исследования по изучению физического развития потомства, показателей крови, а также показателей, характеризующих активность окислительных процессов, продукции оксида азота, морфофункционального состояния эндотелия сосудов в организме самок крыс в условиях введения липополисахаридного компонента грамотрицательных бактерий липополисахарида Е.и аминокислоты таурин в разные периоды беременности. 13519 1 2010.08.30 Установлен целый ряд нарушений в течении беременности и постнатального периода после введения беременным крысам инфекционного агента. В частности, выявлено уменьшение прибавки массы тела крыс за период беременности, уменьшение количества родившихся крысят до 80,6, (0,001) по сравнению с 11 0,4 в контроле, уменьшение веса родившихся крысят на 2,3 , отставание крысят в физическом развитии (прибавке веса крысят, сроках отлипания ушей, появления шерсти,прорезывания резцов, открытия глаз), развитие анемического синдрома. У самок крыс, получавших ЛПС в дозе 0,4 мг/кг, в плазме крови и плацентах отмечено увеличение содержания продуктов перекисного окисления липидов диеновых конъюгатов, малонового диальдегида, оснований Шиффа, а также снижение уровня каталазы, как антиоксидантного фактора ферментативной природы, с одновременным снижением концентрации -токоферола и ретинола. В плазме крови крыс также установлено повышение концентрации нитритов и нитратов, отражающих продукцию оксида азота в организме. Изучение морфофункциональных изменений эндотелия сосудов в организме самок крыс, получавших эндотоксин в период плацентации, выявило тенденцию к более выраженной констрикторной реакции колец аорты на норадреналин и снижение эндотелий зависимой вазодилатации на ацетилхолин, морфологическое повреждение эндотелия кровеносных сосудов, определяемое на основании циркулирующих эндотелиальных клеток. Вышеотмеченные изменения показателей свидетельствуют об участии окислительного и нитрозативного стресса, дисфункции эндотелия кровеносных сосудов в генезе перинатальных нарушений при ЛПС-интоксикации в период беременности. Учитывая, что липополисахарид - один из основных компонентов грамотрицательных микроорганизмов,отвечающих за возникновение патогенных нарушений у потомства, можно предполагать,что патогенез перинатальных нарушений при инфицировании во время беременности также связан с участием данных механизмов. Исследования, проведенные с введением таурина, выявили уменьшение перинатальных нарушений у плодов при его введении в дозе 10 мг/кг в течение 7 суток, а также снижение активности окислительного и нитрозативного стресса, выраженности морфофункциональных изменений эндотелия сосудов в организме беременных крыс. Это указывает на возможность использования таурина в профилактике нарушений в системе мать-плод при беременности, осложненной инфекцией. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 12