Применение экстрактов семейства Iridaceae и Cimicifuga racemosa и текторигенина в качестве действующего по типу эстрогена орган-селективного лекарственного препарата, не имеющего утеротропного эффекта

ПРИМЕНЕНИЕ ЭКСТРАКТОВ СЕМЕЙСТВАИИ ТЕКТОРИГЕНИНА В КАЧЕСТВЕ ДЕЙСТВУЮЩЕГО ПО ТИПУ ЭСТРОГЕНА ОРГАН-СЕЛЕКТИВНОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА,НЕ ИМЕЮЩЕГО УТЕРОТРОПНОГО ЭФФЕКТА(57) 1. Применение экстрактовдля получения подобного эстрогену органселективного лекарственного препарата, не имеющего утеротропного эффекта или имеющего таковой, каким по меньшей мере можно пренебречь при условии, что не используется экстракт, если лекарственный препарат применяют для смягчения перии постменопаузных расстройств. 2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что экстракт получают из. 3. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что экстракт применяют для получения лекарственного препарата с готовой формулой для селективного лечения и/или профилактики кардиоваскулярных заболеваний, в частности атеросклероза. 7347 1 2005.09.30 4. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что экстракт применяют для получения лекарственного препарата с готовой формулой для селективного лечения и/или профилактики остеопороза. 5. Применение по п. 1 или 2, отличающееся тем, что экстракт применяют для получения лекарственного препарата с готовой формулой для селективного лечения и/или профилактики климактерических нарушений, в частности для предотвращения или смягчения приливов. 6. Применение экстрактовдля получения подобного эстрогену орган-селективного лекарственного препарата, не имеющего утеротропного эффекта или имеющего таковой, каким по меньшей мере можно пренебречь при условии, что лекарственный препарат не применяют для смягчения пери- и постменопаузных расстройств и дисменореи. 7. Применение по п. 6, отличающееся тем, что экстракт применяют для получения лекарственного препарата с готовой формулой для селективного лечения и/или профилактики кардиоваскулярных заболеваний, в частности атеросклероза. 8. Применение по п. 6, отличающееся тем, что экстракт применяют для получения лекарственного препарата с готовой формулой для селективного лечения и/или профилактики остеопороза. 9. Применение по п. 6, отличающееся тем, что экстракт применяют для получения лекарственного препарата с готовой формулой для селективного лечения и/или профилактики климактерических нарушений, в частности для предотвращения или смягчения приливов. 10. Применение экстрактов, содержащих текторигенин и/или гликозид текторигенина,за исключением экстрактов семействаили экстрактов, обогащенных текторигенином и/или гликозидом текторигенина, для получения эстрогенподобных орган-селективных лекарственных препаратов, не имеющих утеротропного эффекта или имеющих таковой,каким по меньшей мере можно пренебречь. 11. Применение по п. 10, отличающееся тем, что экстракт применяют для получения лекарственного препарата с готовой формулой для селективного лечения и/или профилактики климактерических нарушений, в частности для предотвращения или смягчения приливов. 12. Применение текторигенина и/или его гликозидов для получения эстрогенподобного орган-селективного лекарственного препарата, не имеющего утеротропного эффекта или имеющего таковой, каким по меньшей мере можно пренебречь. 13. Применение по п. 12, отличающееся тем, что лекарственный препарат является препаратом для селективного лечения и/или профилактики кардиоваскулярных заболеваний, в частности атеросклероза, остеопороза и климактерических нарушений, в частности для предотвращения или смягчения приливов. Настоящее изобретение относится к применению экстрактов сем.по п. 1 и экстрактовв качестве действующего по типу эстрогена органселективного лекарственного препарата, а также к применению текторигенина и/или гликозидов текторигенина в качестве лекарственного препарата по п. 8. Образующийся в яичниках 17 эстрадиол (где бы эстрадиол не упоминался далее, это всякий раз относится к физиологическому 17 эстрадиолу далее также упоминаемому как Е 2) в организме обычно имеет функцию ускорения пролиферации. Помимо регулирования женского цикла он, например, оказывает гомеостатическое влияние на костный метаболизм и предотвращает образование атеросклеротических бляшек на эндотелии сосудов. 2 7347 1 2005.09.30 Во время менопаузы из-за прекращения функции яичников происходит снижение уровня эстрадиола. Это вызывает ослабление процессов пролиферации и в гипоталамусе приводит к повышенной активности генератора импульсов ГтВГ (генератор импульсов гонадотропин высвобождающего гормона является таймером в гипоталамусе и поэтому отбивает такт периодической секреции ЛГ (лютеинизирующего гормона) стероидами,влияющими на ее амплитуду и частоту). В итоге у женщин в климаксе простимулированная секреция ЛГ влечет за собой так называемые приливы, которые ощущаются как раздражающие. При отсутствии достаточно высокого уровня эстрадиола в крови активность остеокластов и, таким образом, разрушение костной массы преобладает, что сопровождается увеличением риска переломов костей. В то же время существует долгосрочный риск образования бляшек в сосудистой системе и, следовательно, возрастает риск инфарктов. Экстрактыихорошо известны в народной медицине как способные смягчать перименопаузные и пост-менопаузные нарушения. До настоящего времени это объясняли тем фактом, что экстракты обоих растительных лекарственных веществ проявляют действие, подобное эстрогену, со всеми его положительными воздействиями на множество органов человеческого тела, в особенности на мозг, яичники, кости, сосудистую систему. В свою очередь подобное эстрогену воздействие на матку, влагалище, ткани молочной железы и печени будет неблагоприятным. Плохо,однако, то, что вплоть до настоящего времени лекарство из этих лекарственных растений,которое можно было бы использовать в орган-селективной профилактике или в лечении в случаях эстрогенной недостаточности, до сих пор не было доступно. Исходя из этого, задачей настоящего изобретения, таким образом, является получение растительных лекарственных веществ с действием, подобным эстрогену, при этом с воздействием, являющимся орган-селективным, без воздействия или с особым воздействием на матку. Задача независимо решается признаками п. 1 в отношении применения экстрактов сем. , и посредством применения экстрактовпо п. 6. Вышеуказанная задача, более того, может быть решена согласно признакам п. 2 в отношении лекарственных препаратов на основе текторигенина и/или его гликозидов согласно п. 12. Другое независимое решение представлено растительным экстрактом, содержащим текторигенин и/или гликозид текторигенина или обогащенным текторигенином и/или гликозидом текторигенина согласно п. 10. В экспериментах как -, так и - к удивлению было обнаружено, что экстракты, получаемые как из сем. , в особенности, так и изорганическими растворителями или сверхкритическим СО 2, органселективно воздействуют на центральную нервную систему, костную систему и сосудистую систему при отсутствии воздействия на матку, т.е. при отсутствии так называемого утеропропного эффекта. Экстракты, используемые в соответствии с изобретением, таким образом, подходят для производства лекарственных препаратов с готовой рецептурой для селективного лечения и/или профилактики остеопороза. Более того, такие экстракты подходят для производства лекарственных препаратов с готовой рецептурой для селективного лечения и/или профилактики кардиоваскулярных заболеваний, в особенности атеросклероза. Более того, они подходят для получения лекарственных препаратов с готовой рецептурой для селективного лечения и/или профилактики пери-менопаузных и постменопаузных психовегетативных расстройств, таких как, например, приливы. Более того, было обнаружено, что компонент текторигенин, который был выделен из, по существу вызывает тот же эффект, что и экстракт в целом. Текторигенин Помимоэтот компонент был обнаружен в других представителях сем.таких, как, например,, . , . , . . Таксономическиклассифицируется следующим образом Порядок Виды.(.) -, а также. ((.) . ) Для получения экстрактов предпочтительно использовать корневища, стебли, листья и/или лепестки. Фундаментальное фитохимическое описаниеи его составных частей дано в диссертации г-жи .( , 1997), озаглавленной,. С лекарственными препаратами, согласно изобретению, впервые были получены лекарственные вещества изии других сем.и лекарственные препараты на основе текторигенина, которые действуют как полные антагонисты рецепторов эстрогена в костях, кардиоваскулярной системе и мозге. Дальнейшие преимущества и признаки настоящего изобретения будут ясны из описания экспериментальных данных со ссылками на фигуры, показывающие Фиг. 1. Сравнение органической и водной фаз. График замещения типичного эстрогенового рецептора в опытах по связыванию лигандов. Концентрация стартового раствора 17.66 мг/мл с последующим разбавлением 12, 14 и т.д. до 164. Фиг. 2. ЛГ в сыворотке до и через 2 ч после внутривенного введения экстракта, 2 и наполнителя. Экстрактимеет аналогичную способность снижать повышенный уровень ЛГ в сыворотке, как и Е 2. Фиг. 3. Влияниеи Е 2 на вес матки (фиг. 3 а) и уровни ЛГ в крови(фиг. 3) у овариэктомированных крыс после семидневного подкожного введения (среднее значениеСВЗ,8, 0,05 в сравнении с кремофором в качестве наполнителя). Фиг. 3 а). Масса матки. Фиг. 3). Концентрация ЛГ в крови. Фиг. 4 а). Влияниеи Е 2 у овариэктомированных крыс после семидневного подкожного введения (среднее значениеСВЗ,8, 0,05 в сравнении с кремофором в качестве наполнителя) на экспрессию мРНК для Е 2-рецепторав преоптической зоне гипоталамуса. Фиг 4). Экспрессия мРНК дляи С 3 в матке овариэктомированных крыс после семидневного подкожного введения. Фиг. 4 с). Экспрессия мРНК для коллагена 1 ( ) и остеокальцина в кости овариэктомированных крыс после 7 дней подкожного введения. Экспериментальное подтверждение подобного эстрогену воздействияи. Подобное эстрогену селективное воздействие было продемонстрировано по стадиям по порядку на сериях тест-систем различной степени сложности. 4 7347 1 2005.09.30 1. Эксперименты. 1.1.Экспериментына. Распознавание эстрогеноподобной структуры компонентов антителами, направленными против 17 эстрадиола (Е 2), показано. Экстрактвыпаривали над остатком. Вещества, имеющие разные полярности, обогащали фазовым разделением между дихлорметаном и водой. Сродство к связыванию компонентами обеих фаз было определенона эстрогенных рецепторах из матки свиньи. Цитозольные эстрогенные рецепторы из матки свиньи выделяли в соответствии с обычной методикой и использовали в экспериментах по замещению лигандов. При этом было обнаружено, что эстрогеноподобные структуры, например из, по природе своей не гидрофильны, а липофильны, поскольку их можно извлекать из экстракта органическими растворителями. Вещества, присутствующие в органически экстрагированной фазе, имели сродство с антителами в десять раз более сильное, чем вещества, остающиеся в водной фазе. Различия между двумя фазами в сериях опытов со связыванием с рецепторами эстрадиола были еще больше. Сродство связывающих веществ к эстрадиолу должно быть достаточно высоким, чтобы обеспечить селективно-конкурентное взаимодействие с рецептором эстрадиола в свободном от клеток препарате. В пределах данной тест-системы водная фаза не обладала активностью, тогда как органическая фаза имела очень сильное связывание с рецептором. Результаты представлены на фиг. 1. 1.2.. По результатам других исследований известно, что экстрактытакже имеют компоненты, которые распознаются антителами, направленными против 17-эстрадиола, и связываются с рецептором 17 эстрадиола (.. .).удивлению авторов настоящей заявки было обнаружено, что эти экстракты оказывают подобное эстрогену различное воздействие на разные системы органов, и, в частности, отсутствие у них утеротропного эффекта. 2. ЭкспериментыПодтверждение эстрогенного воздействия на овариэктомированную крысу. Связывание с рецептором Е 2 очень селективно однако, невозможно сказать, ускоряются или ингибируются последующие процессы внутри клетки, т.е. является ли вещество агонистом или антагонистом. Это свойство может быть определено только в подходящих клеточных системах или на целом животном. Овариэктомированная крыса является признанной моделью пост-менопаузной женщины, у которой прекращается выработка эстрадиола. В результате внешнего поступления 17 эстрадиола или веществ, имеющих подобное эстрогену воздействие, происходит восстановление эстроген-чувствительных анатомо-морфологических параметров, таких как увеличение веса матки и распространение ороговевших клеток, т.е. бляшковых эпителиальных клеток в эпителии влагалища, или гормональные изменения, такие как снижение уровня ЛГ в крови обработанных животных. Все описанные далее эксперименты проводили на овариэктомированных крысах - ( овэ крысы), имеющих вес от 240 до 280 г. 2.1. Однократное применение. Проявление действия экстракта, действующего по типу эстрадиола, происходит очень быстро. Даже после однократного в/в введения наполнителя, эстрадиола и экстрактаовэ крысам пульсативность прекращается как под действием Е 2, так и под действием. При оценке степени усовершенствования лекарственного препарата происходит достоверное снижение уровня ЛГ в сыворотке как в сравнении с предыдущими уровнями, так и в сравнении с обрабатываемыми 5 7347 1 2005.09.30 кремафором контрольными животными. Кремафор является эмульгатором на основе полиэтоксилированных производных касторового масла. Результаты представлены на фиг. 2. В матке животных через шесть часов после введения экстрактаэкспрессия маточных генов ,1 и СЗ не менялась по сравнению с контролем, тогда как введение эстрадиола вызвало четкое увеличение экспрессии генов этих трех эстроген-регулируемых белков. На конститутивно экспрессируемый генни одна из этих обработок не оказала достоверного влияния. Эти находки указывают на то, что компонентывызывают ингибирование генератора импульсов ГтВГ в эстроген-рецептивных структурах гипоталамуса и,таким образом, имеют эстроген-агонистический эффект. При этом гипофизарная секреция ЛГ значительно ингибируется как компонентами, так и эстрадиолом. В противоположность эстрадиолу компонентыне имеют утеротропного действия. Эстрадиол существенно регулирует экспрессию генов ,1 и С 3 в сторону увеличения - действие, которое не наблюдается у. Проведение активных опытов по влиянию в/в инъекций экстракта. 24 крысам (т.е. по 8 животных в группе) под эфирной анестезией за день до начала эксперимента в яремную вену имплантировали катетер. В день эксперимента отобрали 6 проб крови с интервалом в 10 мин. Сразу после отбора шестой пробы 62.5 мг (5 ) экстрактаили 10 микрограмм 17 эстрадиола (Е 2) или раствор (5 ) кремофора в изотоническом , 1 мл, соответственно, вводили внутривенно и в течение еще 2 ч с 10-ти минутным интервалом отбирали пробы крови. Через 6 ч после внутривенного введения животных обезглавили, отобрали кровь, вырезали яичники, взвесили и подвергли глубокой заморозке в жидком азоте. 2.2. Однократное применение текторигенина. После однократного введения текторигенина было определено его влияние во времени на уровень ЛГ в крови и подобная эстрадиолу иммунореактивность. Концентрация текторигенина в крови животных, определенная с помощью Е 2-РИА через 20 мин, соответствует эквивалентам примерно 100 пикограммов эстрадиола. Текторигенин иницирует быстрое снижение ЛГ. Кинетика снижения ЛГ, полученная под действием текторигенина до 60 мин вслед за в/в введением, прекрасно соотносится с таковой эстрадиола, но затем не приводит к дальнейшему снижению, а вновь медленно возрастает. Проведение ОВЭ-крысы имели катетеры, помещенные в наружную яремную вену под эфирной анестезией за 24 ч до начала эксперимента в соответствии с методикой( . . (1974) 36 391-392). Конец трубки помещали в кожный карман на шее. С тем, чтобы при отборе проб крови не надо было трогать животных, катетер удлинили с помощью силиконовой трубки. Катетер и трубку промыли раствором Рингера,содержащего 50(международных единиц) гепарина/мл. Пробы крови, каждая по 100 микрограмм, отбирали у животных с 10-минутными интервалами, а отобранный объем возмещали раствором Рингера/с гепарином. После отбора 6-й пробы внутривенно вводили но 1.0 мл соответствующего тестируемого раствора. В качестве тестируемых растворов использовали 2 кремофор ( раствор наполнителя),текторигенин 7 мг/мл наполнителя, 17 эстрадиол 10 микрограмм/мл наполнителя. Кровь с 10-минутными интервалами брали еще в течение 140 мин. Пробы крови, полученные таким образом, помещали в сосуд для реакцийобъемом 0.5 мл с 10 мл гепарин- (5000 международных единиц/мл, ), центрифугировали в течение 10 мин при 10000 и плазму хранили при -20 С до проведения радиоиммунологических анализов. 6 7347 1 2005.09.30 РИА для ЛГ и пролактина основаны на антисыворотке, контрольные и иодирующие препараты от фирмы(, , ). Концентрации эстрадиола и перекрестно реагирующих изофлавонов измеряли при помощи РИА из ,. 2.3. Влияние экстрактапосле введения в течение 7 дней. Влияние неоднократного введения эстрадиола, экстрактаи наполнителя на общую массу, массу матки, гормональный уровень и активацию генов матки и кости было исследовано на овариэктомированных крысах после ежедневного подкожного введения в течение 7 дней. Средние массы тел животных, получавших кремофор и, не различались, тогда как животные, получавшие Е 2, были достоверно легче. Также достоверно не различались массы маток животных, получавших кремофор и, тогда как те, которые получали Е 2, более чем утроили массу маток. Уровни сывороточного ЛГ у животных, получавших, снижались незначительно, но достоверно по сравнению с контрольными кремофорными, снижение под действием эстрадиола было более выраженным. В маточном экстракте мРПК экстрадиол достоверно повышал экспрессию геновдо 149 по сравнению с контролем после одной недели введения. Под действием экстрактаэкспрессия слегка, но недостоверно, возрастала. Не была затронута экспрессия не эстроген-регулируемых основных генов, на примере цитохром С оксидазы ( ЦСО). В экстракте головки бедренной кости была определена экспрессия генов коллаген-1 А 1,остеокальцина,и-мРНК. Эстрадиол, так же как и, достоверно ингибирует экспрессию всех 4 генов, не оказывая влияния на ген ЦСО. Различие в действии эстрадиола истановится ярко выраженным после семидневной обработки. Экстрактимеет эстрадиол агонистическое влияние на гипофизарную секрецию ЛГ путем ингибирования генератора импульсов ГтВГ и на генную экспрессию четырех эстроген-регулируемых генов в кости. В отличие от этого, эстрогенное воздействие на матку отсутствует ни масса матки, ни эстроген-зависимый генне подвергаются влиянию экстракта.отличие от этого эстрадиол вызывает раздувание матки и активацию гена . Проведение подострых опытов по влиянию ежедневного подкожного введения в течение 7 дней 8-ми животным из каждой опытной группы (всего 24) ежедневно с 800 до 900 подкожно вводили 62.5 мг экстракта, 10 микрограмм эстрадиола или растворителя (кремафор 5 , 1 мл) соответственно. Через 6 ч после последнего введения животных обезглавливали и у каждого животного отбирали аорту, матку, головку левой бедренной кости, очищали и замораживали в жидком азоте. В пробах крови определяли ЛГ и иммунореактивность эстрадиола. 2.4. Повторное применение. Не ранее 14 дней после овариэктомии, животным подкожно вводили соответствующие тестируемые вещества в дозах 62.5 мгна крысу, или 8 микрограмм эстадиола на крысу один раз в день утром в течение 7 дней. Оба вещества были растворены в 5 кремофоре, контрольные животные получали только наполнитель. Вслед за обезглавливанием животных мозг, матку и бедро препарировали для регенерации мРНК. Концентрацию ЛГ в крови животных определяли с помощью РИА. Экспрессию эстроген-регулируемых генов в вышеназванных органах определяли с помощью полуколичественного анализа -. Матки животных, обработанных эстрадиолом, были более чем в три раза больше по массе, чем таковые животных, обработанныхи наполнителем, которые по существу не отличались по своим средним значениям. Это означает, что компонентыне влияют на матку животных. Это же справедливо для 7 7347 1 2005.09.30 влагалища, где не происходит ороговения эпителиальных тканей у животных, получавшихи наполнитель, в прямую противоположность животным, получающим эстрадиол. Уровни ЛГ животных, получавших наполнитель, оставались высокими, однако достоверно снижались под действием как эстрадиола, так и. Результаты представлены на фиг. 3) и 3). Масса матки (сырой) Кремофор (контроль)Е 2 Число животных 8 8 8 Средние значения (мг) 185.6 192.3 702.1 СО 18.81 22.53 94.97 СВЗ 6.65 7.97 68.92 Концентрации ЛГ в крови Кремофор (контроль)Е 2 Число животных 8 8 8 Средние значения (нг/мл) 16.9 12.5 7.83 СО 3.99 3.4 5.57 СВЗ 1.41 1.2 1.97 В качестве другого маркера эстрогенного влияния была измерена активация мРНК эстроген-стимулируемых белков. В данной работе измерения проводили на тканях из матки,из кости (бедреная) и из преоптической зоны гипоталамуса. В гипоталамусе как, так и Е 2 стимулировали экспрессию мРНК для эстрогенного рецептора а (фиг. 4).костной тканитоже ведет себя как эстроген и снижает по аналогии с эстрадиолом экспрессию мРНК для костноспецифического коллагена 1 и для генов остеокальцина (фиг. 4). Напротив, не наблюдали влиянияна эстроген-регулируемые гены в матке. Только эстрадиол повышает мРНК дляи комплиментарного фактора С 3(фиг. 4 с). Эти находки доказывают, что компонентыселективно воздействуют на отдельные органы экстракт действует эстрогеноподобно в гипоталамусе (экспрессия Е 2 рецептора , высвобождение ЛГ) и на кость, что доказано экспрессией генов для коллагена 1 и остеокальцина. Однако в отличие от эстрадиолане влияет на матку, поскольку проявляется отсутствие влияния на массу матки и экспрессию генов 1 и С 3. Экспериментами, проведеннымии, может быть продемонстрировано,что экстрактыиоказывают подобное эстрогену действие. К удивлению было обнаружено, что экстракты из названных лекарственных веществ действуют орган-селективно на центральную нервную систему, кость и сосуды, но не на матку и, таким образом, отлично подходят для профилактики и лечения эстрогенной недостаточности без отрицательного влияния на эндометрий. Идентичные эффекты были достигнуты при использовании текторигенина, содержащегося в . Таким образом, впервые стали доступными лекарственные препараты с действием,подобным эстрогену, но без утеротропного эффекта. Подобные лекарственные препараты могут быть использованы для лечения и/или профилактики кардиоваскулярных заболеваний, особенно атеросклероза, остеопороза и перии пост-менопаузных психовегетативных расстройств, таких как, например, приливы. Известны оральный, внутривенный и подкожный способы употребления. 8 Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.