Плазмозамещающее средство, корректирующее гемодинамические нарушения – неорондекс

Изобретение относится к области медицины,а именно к лечебным препаратам - заменителям плазмы крови декстранового ряда, и может быть использовано для коррекции состояний, связанных с нарушением центральной и периферической гемодинамики и тканевого кровотока.Исходя из анализа развития уровня техники,заявляемый объект не имеет аналогов в планеЗадачей настоящего изобретения является создание плазмозамещающето средства на основе декстрина, обладающего полифункционалъными свойствами - способностью одновременно и длительно коррегировать нарушения центральной и периферической гемодинамики, тканевого кровотока, улучшать реологические свойства крови, оказывать иммуностимулирующее и противовоспалительное действие.Поставленная задача достигается тем, что плазмозамещающее средство, корректирующее гемодинамические нарушения, обладающее иммуностимулирующим и противовоспалительным действием, представляет собой радиационно-модифицированный декстран с молекулярной массой 650005000, имеющийгде К 370-432, 1 5-7 , ш 10-12, при содержании на 1 молекулу декстрана 10-12 карбоксильных и 5-7 карбонильных групп.Способ получения данного соединения состоит в том, что в водном растворе нативного декстрана введением щлочи ЫаОН рН доводят до 9,0-11,0 добавляют водорода перекись и облучают раствор гамма-лучами боСо дозами 0,85-2,60 Мрад. Радиационно-химическая модификация декстрана под воздействием гаммаизлучения заключается во введении в епо макромолекулу при радиолизе карбоксильных и карбонильных групп. Концевые карбоксильные группы представлены в виде лактонов глюконовой и глюкуроновой кислот.Определение содержания карбоксильных групп в макромолекулах радиационно-модифицированного декстрина, проводят титрованием 0,111 бария гидроксида Ва(ОН)1 и методом инфракрасной спектроскопии по полосам поглощения при 1615 и 1425 смд и устанавливают, что на одну макромолекулуприходится в среднем 10-12 карбоксильных групп, две из которых являются концевыми и имеют структуру лактонов глюконовой и глюкуроновой кислот.Содержание карбонильных (СК-оксикетонных) групп в полисахариде определяют химически - оксимированием, а также по спектрам поглощения в инфракрасной области при 1 1735 см 1 и в ультрафиолетовой области при /1 260 нм и устанавливают, что оно составляет 5-7 групп на молекулу.Определение молекулярной массы заявляемого объекта проводят методом светорассеяния и устанавливают, что е значение составляет 6500015000.Состав готовят следующим образом.59,8 г радиационно-модифицированного декстрана с молекулярной массой 68200, содержанием 136 гликозидных звеньев с карбонильными (С 0) и 172 гликозидных звеньев с карбоксильными (СООН) группами,имеющий приведенную выше химическую структуру, где 1426, 1 б, п 112, растворяют в воде для инъекций, добавляют 9,0 г апирогенного натрия хлорида и доводят рН раствора натрия гидроокисью до значений 4,8-7,3. Водой для инъекций объем доводят до 1 л. Раствор фильтруют через стерилизующие фильтры с диаметром пор 0,22 мкм и автоклавируют при 120 С в течение 15 мин. Плазмозамещающее средство готово к употреблению.Биологическая активность заявляемого объекта иллюстрируется следующими примераМИ.Пример 2. В опытах на 8 беспородных собаках обоего пола весом 13,6-2 б,0 кг изучали лечебный эффект неорондекса при острой смертельной кровопотере, которую моделировали однокраъ ным кровопусканием из бедренной артерии в размере 60 от объема циркулирующей крови в течение 8-10 минут. Затем лечили заявляемьш плазмозамещаютгпш средством в объеме, соответствующем обьему кровопотери.В динамике, по общепринятым методикам исследовагш следующие показателя среднее и максимальное артериальное давление(АДср.,АД), сердечный выброс и минутный объем кровообращетшя (по отношеьшю к весу животного - УИ и ИК, соответственно), частоту сердечных сокращений (ЧСС), отношение индекса периферического сопротивления сосудов к его должной величине (ИПС/ДИПС), период полувыведения подкожно введенного радионуклида Ыа 1251 (Т 1/2), объемы циркулирующей крови (ОЦК) и плазмы (ОЦП).Изменение регистрируемых показателей носило следующий характер (табл. 1).Среднее артериальное давление в результате проведенного лечения полностью восстанавли 5 ВУ 1218 С 1 ввалось и не отличалось от исходных величин на протяжении 7 суток наблюдений за животными.Величина сердечного выброса после кровопотери снизилась в среднем на 80, сразу после инфузии неорондекса нормализовалась и составляла 55,0 - 68,0 от исходного уровня в первые 2 часа - 1 сутки после лечения. К 4-7 суткам эксперимента значения сердечного выброса статистически значимо не отличались от изначальных величин.Коррекция кровопотери неорондексом НЕ только устраняла сниженный почти втрое минутный объем кровообращения, но, за счет возросшей частоты сердечных сокращений,увеличивала его значения более чем в 1,5 раза на момент окончания инфузии. Весь последующий период наблюдений значения ИК не выходили за границы физиологической нормы.После введения неорондекса происходило снижение общего периферического сопротивления сосудов, а показатели полупериода выведения радионуклида Ыа 1251 отражали ускорение тканевого кровотока и улучшение реологических свойств крови не только сразу после введения препарата, но и на 1-4 сутки.Инфузии неорондекса оказывали выраженное волемическое действие, полностью устраняя возникающий после кровопотери ДЕФИЦИТ ОЦП, за счт чего в значительной степени коррегировался и ОЦК.Эти данные подтверждают способность плазмозамещающего средства неорондекс ОДНОВРЕменно и длительно нормализовывать нарушения центральной и периферической гемодинамики, тканевого кровотока и улучшать реологические свойства крови, и дополняются в последующих исследованиях.Пример 3. В опытах на 8 беспородных собаках обоего пола весом 14,0-21,2 кг изучали лечебный эффект неорондекса при острой кровопотере, которую моделировали однократным кровопусканием из бедренной артерии в размере 45 И, от ОЦК в течение 6-8 минут. Затем лечили плазмозамещающим средством неорондекс в объеме, соответствующем объему кровопотери.Состав определяемых параметров идентичен описанному в примере 2.В таблицах 2, 3 отражена динамика изменений некоторых показателей центральной и периферической гемодинамики, тканевого кровотока, характеризующих общее состояние животных.Изъятие из системы циркуляции крови приводило к уменьшению у животных ОЦК на 38,9 и ОЦП на 35,3. Дефицит объема циркулирующей крови вызывал снижение сердечного выброса более чем в три раза, в то время как значение коэффициента, отражаю 10щего отношение ИПС к его должной величине и свидетельствующего о степени вазоконстрикЦИИ Возрастало на 1428 (Р 0001) резко ухудшался тканевый кровоток. Хотя число сердечных сокращений и увеличивалось, оно оказывалось недостаточным для поддержания ИК на должном уровне.инфузии неорондекса приводили к устранению гипотонии, причем использование заявляемого объекта полностью стабилизировало артериальное давление, значения которого даже несколько превышали изначальные величины.Благоприятное влияние плазмозамегцающего средства нсорондекс на восстановление основных показателей гемодинамики прослеживалось по большинству исследуемых параметров. Так, после инфузий неорондекса сердечный выброс спустя 2 часа и 1 сутки после лечения статистически достоверно не отличался от исходного уровня. Характерной являлась тенденция к повышению УИ после инфузии неорондекса и в последующем, к 4-7 суткам постинфузионного периода. При введении препарата уже спустя сутки исчезали статистические различия с изначальными величштами по показателям ЧСС и ИПС/ДИПС (в то время как в серии собак с невозмещенной кровопотерей такого же обгьема нормализация пульса и периферического сопротивления сосудов запаздывали на 6-9 суток).Особо следует обратить внимание на влияние заявляемого плазмозамещающего средства на время полувыведения Ыа 1251, интегрально отражающее состояние нутритивного кровотока и реологических свойств крови. Так, проведение инфузионной терапии неорондексом устраняло негативное влияние кровопотери на скорость тканевого кровотока, способствовало существенному его улучшению даже в сравнении с изначальными значениями. Причем интенсивность активации кровотока в терминальном отделе микроциркуляции в случае введения неорондекса имела характер статистически значимой закономерности на протяжении всего постинфузионного периода,вплоть до 7 суток эксперимента.С учетом того, что инфузионная коррекция моделируемой кровопотери неорондексом приводила не только к восстановлению ОЦК, но и его некоторому увеличению на момент окончания введений (при отсутствии достоверных различий по отношению к исходным значениям на протяжении всего последующего периода наблюдений), а также стабильно высокие значения ОЦП (таблд), регистрируемые сдвиги основных показателей гемодинамики, тканевого кровотока и реологических свойств крови после возмещения кровопотери неорондексом можно отнести за счет достигаемой в процессеполучения заявляемого объекта модификации основною компонента плазмозаменителя - радиолизованного декстрана.Пример 4. Для более детального изучения влияния заявляемого объекта - плазмозамещающего раствора неорондекс на гемореологические показатели крови, ставилась специальная СЕРИЯ СТЕНДОВЫХ опытов с донорской кровью. Изучали электрофоретическую подвижность(ЭФП) эритроцитов и адгезию тромбоцитов после предварительного контакта клеток крови с исследуемым препаратом.В качестве контроля использовали интактные клетки или физиологический раствор.Результаты исследования ЭФП эритроцитов приведены в таблице 4. Как следует из их анализа, инкубация эритроцитов с неорондексом не оказывала негативного влияния на этот важный гемореологический показатель.В таблице 5 приведены данные о влиянии неорондекса на адгезивные свойства тромбоцитов. Как оказалось, антиадгезивный эффект у заявляемого плазмозамещающего средства превосходил аналогичное действие 0,9 натрия хлорида (контроль) более чем в 8 разСледует заметить, что способность уменьшать адгезию тромбоцитов является положительным свойством любого кровезаменителя,поскольку препятствует запуску патологических реакций внутрисосудистой дессимивированной агрегации тромбоцитов. Таким образом, в результате радиационно-химической технологии получения неорондекса его антиадгезивные свойства не только не ослабели, но приобрели еще более выраженный характер.Пример 5. Исследование иммуномодулирующих свойств заявляемого объекта - неорондекса проводили в реакциях гуморального иммунитета.Влияние неорондекса на гуморальный иммунный ответ оценивали по изменению накопления в селезенке антителообразующих клеток(АОК) после иммунизации мышей высокореагирующей (СВА) и низкореагирующей(С 57 В 1/6) линий эритроцитами барана (ЭВ),взятыми в субоптимальной (2-107 клеток/мъгшь) дозе.В опытной серии (л 10) исследуемый препарат вводили мышам внутрибрюшинно в дозе 100 мг/кг массы (в перерасчете на сухой декстран) на изотоническом растворе натрия хлорида одновременно с ЭБ. В контрольных сериях вместо неорондекса вводили изотонический раствор натрия хлорида (п 10) в той же дозе или ЭБ (п 10) .Динамика содержания АОК после введения неорондекса (табл.6) свидетельствует о том,что заявляемый объект эффективно стимули 10руст образование АОК и ЭБ, причем иммуносгимулирующая активность у препарата проявлялась как у высоко-, так и низкореагирующих на ЭБ линий мышей. Количество АОК в серии экспериментов на жинотных линии СВА возрастало по отношению к контролю на 40 (Р 0,05), а на животных линии С 57 В 1/6 - на 112 (РО,05), соответственно.Полученные результаты свидетельствуют о выраженной способности неорондекса стимулировать гуморальный иммунитет.Пример 6. Изучение противовоспалительного действия неорондекса проводшш на 40 беспородных белых мышах самцах массой 18-20 г,с целью выяснения влияния заявляемого гшазмозамещающего средства на активацию факторов высвобождения медиаторов воспаления. Метод основан на способности лектинов растительного происхождения (конканавалин А) высвобождать медиаторы воспаления (в т.ч. и гистамин).Мышам 3-х опытных групп вводили внутривенно раствор неорондекса в дозе 5,7 мл/кг(1110), 28,6 ьш/кг (п 10) и 50 мл/кг (г 110). Эти дозы соответствуют минимальной и максимальной терапевтическим дозам (400 мл 2000 мл), а также учитывают влияние на организм избыточной дозы (3,5 - 4,0 л). Животным контрольной группы (п 10) вводили изотонический раствор натрия хлорида. Затем,через 1 час, мышам опытных и контрольной групп субплантарно, в подушечки конечностей, вводили конканавалин А в концентрации 5 мг/мл, в объеме 20 мкл, в дозе 100 мкг/вант,и в контралатеральную конечность - изотонический раствор натрия хлорида в том же обвеме. Через час мышей выключали из опыта декапитацией и по разности массы правой и левой конечностей определяли индекс реакции у животных опытных и контрольной групп.Как следует из полученных данных (табл. 7),неорондекс подавлял высвобождение медиаторов воспаления. Введение препарата в терапевтических дозах 5,7 мл/кг и 28,6 мл/кг подавляло реакцию воспаления на 28,3 и 23,1, соответственно. Инфузии неорондекса в избыточной дозе 50 мл/кг вызывали еще более значительное подавление реакции (более чем в 2 раза).Полученные результаты свидетельствуют 0 наличии у плазмозамещающего средства - неорондекс противовоспалительных свойств.Итак, в результате проведенных исследований биологической эффективности плазмозамешающего средства - неорондекс сделаны следующие выводы- при острой массивной кровопотере плазмозамещающее средство неорондекс обладает выраженным эффектом по восстановлению истабилизации центральной и периферической гемодинамики, улучшению тканевого кровотока и реологических свойств крови позитивное биологическое действие препарата на систему макро- и микрогемодинамики проявляется одновременно и прослеживается длительно, что выгодно отличает неорондекс как корректор гемодинамических нарушенийзаявляемое средство оказывает сильное антиадгезивное действие на тромбоциты и неоказывает негативного влияния на электрофоретическую подвижность эритроцитов, что указывает на наличие у неорондекса выраженных свойств по улучшению микрогемореологни- неорондекс обладает иммуностимулирующим и противовоспалительным действием, что является преимуществом по сравнению с другими кровезаменителями, для которых данные свойства не показаны.Изменение некоторых показателей системной гемодинамики при изоволемическом возмещении острой 60 от ОЦК кровопотери плазмозаменяющим средством неорондекс