Вакцина для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных и способ ее получения

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(72) Авторы Финогенов Артм Юрьевич Лемиш Артм Петрович Андрусевич Андрей Сергеевич Финогенова Елена Геннадьевна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(56)2311199 1, 2007.13773 1, 2010.2310473 1, 2007.2405567 1, 2010.2403061 1, 2010.6012 1, 2004.2757 1, 1999.11490 , 2008.43296 , 2009.4346074, 1982.1328071 , 1994. ЗАЕРКО В.И. Разработка и внедрение универсальной технологии изготовления, контроля и применения вакцин против пастереллеза животных Диссертация в форме научного доклада. М., 2000.(57) 1. Инактивированная вакцина для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, содержащая культуры штаммов-антигеновсеровариантов, , , взятые в соотношении 111, инактивант и адъювант, отличающаяся тем, что в качестве культур штаммов-антигенов содержит культуру штаммасеровариантКМИЭВ-67, культуру штаммасеровариантКМИЭВ 68 и культуру штаммасеровариантКМИЭВ-69, концентрация каждой культуры составляет 5-6 млрд. микробных клеток, в качестве инактиванта содержит 36 -ный раствор формальдегида, разведенный физиологическим раствором в соотношении 11, в количестве 0,5 к суммарному объему культур штаммов-антигенов, а в качестве адъюванта - масляный адъювант 70, взятый в количестве 70 от суммарного объема культур штаммов-антигенов и раствора формальдегида,вакцины находится в пределах 7,2-7,4. 2. Способ получения инактивированной вакцины для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных по п. 1, при котором культивируют в отдельных реакторах штаммы-антигенысеровариантКМИЭВ-67,серовариантКМИЭВ-68 исеровариантКМИЭВ-69 на мясопептонном бульоне или бульоне Хоттингера при температуре 37-38 С в течение 12-14 ч при непрерывном перемешивании со скоростью 35-40 об/мин и одновременной аэрации при расходе воздуха 15-25 л/ч, при этом поддерживаютв пределах 7,2-7,4, выращен 17656 1 2013.10.30 ные культуры, при необходимости, разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 5-6 млрд. микробных клеток, инактивируют путем введения 36 -ного раствора формальдегида, разведенного физиологическим раствором в соотношении 11, в количестве 0,5 к объему культуры с последующим выдерживанием при температуре 3742 С в течение 5-7 суток, затем инактивированные культуры штаммов-антигенов смешивают в соотношении 111, добавляют масляный адъювант 70 в количестве 70 от суммарного объема культур штаммов-антигенов и раствора формальдегида и доводятдо 7,2-7,4. Изобретение относится к области получения биопрепаратов и может быть использовано в биологической промышленности и ветеринарии для массовой профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных. Известна вакцина для профилактики легочного пастереллеза свиней, содержащая в своем составе сероварыи, в качестве адъюванта - 10 -ные алюмокалиевые квасцы 1. Эта вакцина обладает недостатком, характеризующимся тем, что в состав вакцины входят штаммы сероварыи, которые обладают сравнительно низкой иммуногенностью и содержат в качестве адъюванта 10 -ные алюмокалиевые квасцы, что в свою очередь приводит к непродолжительному иммунитету. Известна эмульсионная противопастереллезная вакцина, включающая штаммысеротипы А, Д и В, инактивант - аминоэтилэтиленимин и масляный адъювант. Иммуногенность составляет 802. Недостатком данной вакцины является применение в качестве инактиванта аминоэтилэтиленимина, так как данный компонент обуславливает реактогенность вакцины, а штаммы импортного происхождения. Известные способы получения вакцины для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных не позволяют получить заявляемую вакцину ввиду того, что в состав известных вакцин входят штаммы с низкой иммуногенной активностью для сельскохозяйственных животных, а также для их получения применяют дорогостоящие компоненты масляный адъювант и инактивант аминоэтилэтиленимин. Известен способ изготовления эмульсионной противопастереллезной вакцины, включающий получение суспензии культур пастерелл, то есть штаммов микроорганизмов,инактивацию полученной культуры и смешивание штамма-антигена с масляным адъювантом, причем в качестве инактиванта используют аминоэтилэтиленимин в концентрации 054 , а по окончании инактивации полученный антиген вносят в стабилизирующую среду 3. Этот способ обладает недостатком, заключающимся в том, что он является относительно трудоемким и длительным, связанным с получением вакцины. Задачей предлагаемого изобретения является конструирование высокоиммуногенной,ареактогенной и сравнительно дешевой вакцины для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных и разработка способа ее получения с использованием компонентов отечественного производства. Поставленная задача достигается тем, что вакцина для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, содержащая культуры штаммов-антигеновсеровариантов , , , взятые в соотношении 111, инактивант и адъювант,причем в качестве культур штаммов-антигенов содержит культуру штаммасеровариантКМИЭВ-67, культуру штаммасеровариантКМИЭВ-68 и культуру штаммасеровариантКМИЭВ-69, концентрация каждой культуры составляет 5-6 млрд. микробных клеток, в качестве инактиванта содержит 36 -ный раствор формальдегида, разведенный физиологическим растворов в соотношении 11, в количестве 0,5 к суммарному объему культур штаммов-антигенов,2 17656 1 2013.10.30 а в качестве адъюванта - масляный адъювант -70, взятый в количестве 70 от суммарного объема культур штаммов-антигенов и раствора формальдегида,вакцины находится в пределах 7,2-7,4. Кроме того, поставленная задача достигается тем, что в способе получения вакцины для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных, при котором культивируют в отдельных реакторах штаммы-антигенысеровариантКМИЭВ-67,серовариантКМИЭВ-68 исеровариантКМИЭВ-69 на мясопептонном бульоне или бульоне Хоттингера при температуре 3738 С в течение 12-14 ч при непрерывном перемешивании со скоростью 35-40 об/мин и одновременной аэрации при расходе воздуха 15-25 л/ч, при этом поддерживаютв пределах 7,2-7,4, выращенные культуры, при необходимости, разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 5-6 млрд. микробных клеток, инактивируют путем введения 36 -ного раствора формальдегида, разведенного физиологическим раствором в соотношении 11, в количестве 0,5 к объему культуры с последующим выдерживанием при температуре 37-42 С в течение 5-7 суток, затем инактивированные культуры штаммов-антигенов смешивают в соотношении 111, добавляют масляный адъювант 70 в качестве 70 от суммарного объема культур штаммов-антигенов и раствора формальдегида и доводятдо 7,2-7,4. Таким образом, заявленные признаки позволяют достичь поставленной задачи тем,что штаммы штаммсеровариантКМИЭВ-67 - штамм-антиген,штаммсеровариантКМИЭВ-68 - штамм-антиген и штаммсеровариантКМИЭВ-69 - штамм-антиген - обладают более высокой иммуногенностью до 90 по сравнению с прототипом, который имеет иммуногенность 80 , и являются ареактогенными, и заявленный способ изготовления вакцины является сравнительно дешевым. ШтаммсеровариантКМИЭВ-67 - штамм-антиген выделен в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь от сельскохозяйственных животных,больных пастереллезом, является специфичным для сельскохозяйственных животных и содержит активные и адекватные антигены для получения вакцины, обладающей высокой иммуногенностью. Штамм депонирован и хранится в музее культур микроорганизмов РУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского. Культурально-морфологические признаки штаммасеровариантКМИЭВ-67 - штамма-антигена. В мазках, приготовленных из бульонных и агаровых культур, данный микроорганизм при окрашивании по Граму располагается в виде мелких грамотрицательных кокко-овоидов размером 0,28-1,450,15-0,2 мкм, располагающихся отдельно, иногда парами, может в виде цепочек. Имеется выраженное капсулообразование, спор не образует, неподвижен. В начале роста вызывает легкое помутнение бульона,иногда с образованием пристеночного кольца. На 4-5 день на дне пробирки образуется характерный слизистый осадок, при встряхивании пробирки поднимающийся в виде косички, при этом наблюдается просветление бульона. На сывороточном агаре данный микроорганизм образует колонии с ровными краями, серовато-белого цвета, диаметром 2-3 мм. На МПА растет в виде нежных мелких росинчатых колоний, слегка опалесцирующих в косопроходящем свете. Биохимические свойства. ШтаммсеровариантКМИЭВ-67 штамм-антиген по биохимическим свойствам обладает способностью ферментировать глюкозу, галактозу, сахарозу, ксилозу, маннит и сорбит с образованием кислоты без газа. Реакция Фогес-Проскауэра - отрицательная, на индол - положительная. Не продуцирует гемолизин и уреазу. Антигенный состав. Имеет в своем составе - и -антигены. Другие особенности и маркерные признаки. ШтаммсеровариантКМИЭВ-67 - штамм-антиген в процессе роста образует гиалуроновую кислоту, которая 3 17656 1 2013.10.30 может расщепляться гиалуронидазой, продуцируемой стафилококком. При взаимодействии с раствором акрифлавина в разведении 11000 штамм образует хлопьевидный осадок, разбивающийся при встряхивании. Антигенные свойства. Антигенная активность штаммасеровариантаКМИЭВ-67 штамма-антигена в РНГА составляет 8 2. Иммуногенность штаммасеровариантаКМИЭВ-67 - штаммаантигена составляет 90 . Вирулентность. ШтаммсеровариантКМИЭВ-67 - штаммантиген обладает высокой вирулентностью, 50 которого составляет 0,3109 м.к. Чувствительность к антибиотикам. ШтаммсеровариантКМИЭВ 67 - штамм-антиген чувствителен к следующим антибактериальным препаратам цефатоксиму, норфлоксацину, канамицину, цефалексину, пенициллину, энроксилу, гентамицину,амоксициллину, карбенициллину, рифампицину, доксициклину 4. ШтаммсеровариантКМИЭВ-68 - штамм-антиген выделен в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь от сельскохозяйственных животных,больных пастереллезом, является специфичным для сельскохозяйственных животных и содержит активные и адекватные антигены для получения вакцины, обладающей высокой иммуногенностью. Штамм депонирован и хранится в музее культур микроорганизмов РУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского. Культурально-морфологические признаки штаммасеровариантКМИЭВ-68 - штамма-антигена. При микроскопии мазков, приготовленных из бульонных и агаровых культур, окрашенных по Граму, данный микроорганизм имеет вид мелких грамотрицательных кокко-овоидов размером 0,23-1,20,14-0,2 мкм, имеющих изолированное, парное расположение, иногда цепочное. Культура пастерелл спор не образует, неподвижна, имеет капсулу. На бульоне рост определяется в виде равномерного помутнения с образованием пристеночного кольца. На сывороточном МПА образует серовато-белые колонии с ровными краями диаметром 1-2 мм. На агаровых средах пастереллы имеют вид нежных мелких росинчатых колоний, дающих радужное свечение в косопроходящем свете. Биохимические свойства. ШтаммсеровариантКМИЭВ-68 штамм-антиген обладает способностью ферментировать глюкозу, галактозу, сахарозу,ксилозу, маннит и сорбит с образованием кислоты без газа. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная, на индол - положительная. Не обладает гемолитическими свойствами. Антигенный состав. Имеет в своем составе - и -антигены. Другие особенности и маркерные свойства. ШтаммсеровариантКМИЭВ-68 - штамм-антиген образовывает слабый хлопьевидный флоккулят при взаимодействии с раствором акрифлавина в разведении 11000. При встряхивании он разбивается. Антигенные свойства. Антигенная активность штаммасеровариантаКМИЭВ-68 - штамма-антигена в РНГА составляет 9 2. Иммуногенность штаммасеровариантаКМИЭВ-68 - штаммаантигена составляет 95 . Вирулентность. ШтаммсеровариантКМИЭВ-68 штаммантиген обладает высокой вирулентностью, 50 которого составляет 0,23109 м.к. Устойчивость к антибиотикам. ШтаммсеровариантКМИЭВ 68 - штамм-антиген чувствителен к следующим антибактериальным препаратам норфлоксацину, цефатоксиму, энроксилу, цефалексину, рифампицину, амоксициллину 5. ШтаммсеровариантКМИЭВ-67 - штамм-антиген выделен в животноводческих хозяйствах Республики Беларусь от сельскохозяйственных животных,больных пастереллезом, является специфичным для сельскохозяйственных животных и содержит активные и адекватные антигены для получения вакцины, обладающей высокой иммуногенностью. 4 17656 1 2013.10.30 Штамм депонирован и хранится в музее культур микроорганизмов РУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н. Вышелесского. Культурально-морфологические признаки штаммасеровариантКМИЭВ-69 - штамма-антигена. Микроорганизм в фиксированных и окрашенных по Граму мазках имеет вид мелких грамотрицательных кокко-овоидов размером 0,3-1,40,13-0,27 мкм,может располагаться одиночно, парами, иногда цепочками. Культура пастерелл неподвижная, имеет капсулу, спор не образует. На бульоне дает равномерное помутнение, при длительном хранении образует пристеночное кольцо и формирует феномен косички. На агаровых средах образует серовато-белые колонии с ровными краями диаметром до 3 мм. Биохимические свойства. ШтаммсеровариантКМИЭВ-69 штамм-антиген обладает способностью ферментировать глюкозу, галактозу, сахарозу,ксилозу, маннит и сорбит с образованием кислоты без газа. Реакция Фогес-Проскауэра отрицательная, на индол - положительная. Не продуцирует гемолизин и уреазу. Антигенный состав. Имеет в своем составе - и -антигены. Другие особенности и маркерные свойства. ШтаммсеровариантКМИЭВ-69 - штамм-антиген дает положительную реакцию с раствором акрифлавина в разведении 11000, при этом образуется интенсивный хлопьевидный флоккулят, оседающий на дне пробирки и не разбивающийся при встряхивании. Способы и условия хранения. Хранят после лиофильного высушивания в сахарозожелатиновой среде в ампулах при температуре 2 - 4 С в течение 5 лет. Сохранность культур обеспечивается путем пересева на питательные среды ПЖА, бульон Хоттингера,МПА на основе перевара Хоттингера 1 раз в течение месяца. Антигенные свойства. Антигенная активность штаммасеровариантаКМИЭВ-69 - штамма-антигена в РНГА составляет 7 2. Иммуногенность штаммасеровариантаКМИЭВ-69 - штаммаантигена составляет 100 . Вирулентность. ШтаммсеровариантаКМИЭВ-69 - штаммантиген обладает высокой вирулентностью. Чувствительность к антибиотикам. Штамм чувствителен к антибактериальным препаратам энроксилу, норфлоксацину, цефатоксиму, цефалексину, гентамицину, канамицину,карбенициллину, рифампицину, пенициллину, доксициклину, окситетрациклину, амоксициллину, левомицетину 6. Масляный адъювант -70 является адъювантом на основе минерального масла, который был разработан для изготовления эмульсии вода-в-масле. Адъювант предназначен для создания длительного иммунитета. Он включает минеральное масло и эмульгаторы с высокой степенью очистки, основанные на манните и очищенной олеиновой кислоте растительного происхождения 7. Формальдегид - альдегид муравьиной кислоты. Бесцветный газ со своеобразным острым запахом. Обычно он бывает в форме формалина - 40 -ного раствора формальдегида в воде с примесью метилового спирта и муравьиной кислоты 8. Мясопептонный бульон (МПБ) - основная жидкая питательная среда, используемая для выращивания хемоорганотрофных бактерий. Готовят на основе мясной воды или 0,5-1 водного раствора мясного экстракта, добавляя к ним 0,5-1 пептона и 0,5 хлорида натрия 9. Физиологический раствор - изотонический для какого-либо естественного субстрата раствор солей. Применяют 0,85-0,9 -ный раствор хлорида натрия. Один из наиболее часто применяемых разбавителей 10. Пример 1. Способ получения вакцины для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных осуществляется следующим образом. Для приготовления вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных эмульгированной используют 3 ампулы с сухой культурой производственных штаммов 5 17656 1 2013.10.30 штаммсеровариантКМИЭВ-67 - штамм-антиген, штаммсеровариантКМИЭВ-68 - штамм-антиген и штаммсеровариантКМИЭВ-69 - штамм-антиген. В каждую ампулу вносят 2-3 см 3 МПВ, растворяют, и засевают в 50 см 3 флаконы с мясопептонным бульоном (МПБ), и культивируют в течение 18 ч при температуре от 37 до 38 С. Затем культуру высевают на чашки Петри с 2 -ным МПА для отбора колоний только вформе, с которыми в дальнейшем ведут работу по изучению культуральных, морфологических, биохимических, вирулентных свойств штаммов. Для получения посевного материала 1-ой генерации культуры пастерелл в объеме 0,5 см 3 засевают в 100 см 3 флаконы с МПБ или бульоном Хоттингера. Одновременно проводят контрольный засев в пробирки с МПБ и МПА. Культуры инкубируют при температуре от 37 до 38 С в течение 10-12 ч. Выросшие культуры проверяют на морфологические свойства путем микроскопии мазков, окрашенных по Грамму, и культуральные свойства. Для получения посевного материала 2-ой генерации культуры пастерелл из флаконов в количестве 20-25 см 3 засевают в 10-20 литровые бутыли, содержащие 5-6 литров стерильного бульона Хоттингера. Культуры выращивают в течение 14-18 ч при температуре от 37 до 38 С. Выросшие культуры пастерелл проверяют на морфологические свойства путем микроскопии мазков, окрашенных по Грамму, и культуральные свойства. Для получения производственной расплодки подготовленные стерильные реакторы заполняют питательной средой (бульон Хоттингера) на 1/3 от их объема. Для предупреждения пенообразования к среде добавляют до 0,04 (40 см 3 на 0,1 м 3 среды) подсолнечного масла. Бульон в реакторах стерилизуют при температуре 120 С в течение 45 мин, охлаждают до 37-38 С и делают контрольный высев бульона на стерильность (МПА, МПБ,МППБ, среду Сабуро). Как стимулятор роста добавляют 0,4-0,6 дрожжевого экстракта. Проверенную культуру (посевной материал 2-ой генерации) засевают в отдельные реакторы для культивирования в количестве 8-10 к объему среды. Культуры выращивают в течение 12-14 ч при температуре от 37 до 38 С при непрерывном перемешивании в пределах 35-40 об/мин. Подачу стерильного воздуха регулируют в зависимости от объема суспензии и продолжительности выращивания клеток. Режим аэрации приведен в табл. 1. Таблица 1 Режим аэрации в культиваторе Расход воздуха (л/ч) при объеме заполнений 10 л 15 л 0-2 0 0 5-14 15 25 В процессе роста через каждые два часа отбирают пробы для определения , концентрации микробных клеток по оптическому стандарту мутности. Для улучшения условий роста пастерелл и снижения , при его повышении от 7,6 и выше проводят дробную подачу стерильного 40 -ного раствора глюкозы до 2 -ного содержания сухой глюкозы в среде. В процессе ростаподдерживают в пределах 7,2-7,4. Выросшие культуры штаммовсеровариантов ,исмешивают в соотношении 111. Инактивация культуры. Выращенную в реакторах чистую культуру пастерелл скачивают в подготовленный стерильный реактор и при необходимости разводят стерильным физиологическим раствором до концентрации 5-6 млрд. микробных клеток. При включенной мешалке реактора добавляют 0,5 формалина, разведенного физиологическим раствором 11 с содержанием не менее 36 формальдегида. Инактивацию культур проводят в течение 5-7 суток при температуре от 37 до 42 С. Время культивирования (ч) 17656 1 2013.10.30 По окончании инактивации добавляют в смесь штаммов масляный адъювант -70,взятый в объеме 70 от суммы штаммов с формальдегидом. Вакцину подщелачивают 4 -ным раствором гидроокиси натрия до 7,2-7,4. Полученная вакцина представляет собой гомогенную эмульсию серовато-белого цвета, содержащая антигены, инактивированные 36 -ным формальдегидом в концентрации 0,5 штаммов(серовариантов ,ив соотношении 111 в количестве 5-6 млрд. микробных клеток для каждого штамма), эмульгированных на масляном адъюванте, взятом в объеме 70 от суммы штаммов с формальдегидом с 7,2-7,4. Пример 2. Бактериологический контроль стерильности полученной вакцины осуществляют следующим образом. Пробы вакцины высевают в объеме 0,2 см 3 в пробирки с МПБ, МПА,средами Сабуро и Китта-Тароцци и по 2 см 3 во флаконы с МПБ и средой Китта-Тароцци по 3 пробирки и 3 флакона с каждой средой. Через двое суток из жидких питательных сред проводят пересев на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Посевы на среде Сабуро выдерживают в термостате при температуре от 20 до 22 С, а на остальных средах - при температуре от 37 до 38 С в течение 10 суток первичные посевы, в течение 8 суток - вторичные. Одновременно проводят контроль стерильности питательных сред. Результаты первичного и вторичного посевов оценивают путем микроскопического исследования посевов. Рост микроорганизмов на питательных средах отсутствует. Пример 3. Контроль безвредности и реактогенности полученной вакцины осуществляют следующим образом. Безвредность вакцины определяли путем подкожного введения в область спины препарата 10-ти белым мышам массой 18-20 г в дозе 1 см 3. Наблюдение за животными вели в течение 10 дней. Все животные остались живы. Реактогенность вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных эмульгированной устанавливали путем внутримышечного введения пяти клинически здоровым кроликам и норкам в дозе по 5 см 3 с внутренней стороны бедра. Наблюдения вели в течение 10 дней. В течение всего срока наблюдения местной и общей реакции организма на введение препарата не установлено. Через 10 дней после введения вакцины провели убой кроликов и норок, при осмотре места введения наличие остатков вакцины не обнаружено. Пример 4. Определение иммуногенной активности полученной вакцины осуществляют следующим образом. Испытания вакцины на иммуногенные свойства провели на 70-ти белых мышах путем двукратной иммунизации с интервалом 7 дней с их последующим заражением. Из животных сформировали 5 групп (3 опытные и 4 контрольные) по 10 животных в каждой группе. Мышей опытных групп иммунизировали подкожно в области спины в объеме 0,3 см 3 эмульгированной вакциной. Напряженность иммунитета определяли через 14 дней после повторной вакцинации путем подкожного заражения животных опытных и контрольных групп объемом 0,5 см 3 18-часовой бульонной культурой в дозе 250 каждого штамма в раздельности (животных 1 опытной группы и 1 контрольной - серовариантом, животных 2 опытной и 2 контрольной групп - серовариантом, животных 3 опытной и 3 контрольной групп - серовариантом, контрольной группе 4 вводили физиологический раствор по той же схеме. Наблюдение за животными вели в течение 10 дней. Результаты исследований показали, что в опытных группах 1, 2, 3 пало по одной мыши. В контрольных группах 1, 2 и 3 отмечали гибель 100 животных, в контрольной группе 4 все мыши остались живы. 17656 1 2013.10.30 Таблица 2 Иммуногенная активность вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных эмульгированной Группы животных Количество павших животных Количество выживших животных 1 опытная 1 (10 ) 9 (90 ) 2 опытная 1 (10 ) 9 (90 ) 3 опытная 1 (10 ) 9 (90 ) 1 контрольная 10 (100 ) 2 контрольная 10 (100 ) 3 контрольная 10 (100 ) 4 контрольная 10 (100 ) Иммуногенная активность вакцины против пастереллеза сельскохозяйственных животных эмульгированной составила длясероварианта 90 ,сероварианта 90 исероварианта 90 . Таким образом, заявленное изобретение позволяет сконструировать высокоиммуногенную до 90 по сравнению с прототипом, который имеет иммуногенность 80 , ареактогенную, предназначенную для сельскохозяйственных животных и простую в применении вакцину за счет того, что в вакцине и способе ее получения используются высокоиммуногенные, специфичные и адекватные в антигенном отношении штаммысеровариантКМИЭВ-67 - штамм-антиген,серовариантКМИЭВ-68 - штамм-антиген исеровариантКМИЭВ-69 - штамм-антиген, подобранные в оптимальных соотношениях 111 в количестве 5-6 млрд. микробных клеток для каждого штамма в качестве инактиванта 36 -ный формальдегид, обеспечивающий необходимую полноту инактивации по сравнению с аминоэтилэтиленимином в прототипе, масляный адъювант в качестве адъюванта, обеспечивающего равномерное поступление антигена и обладающего минимальной реактогенностью. Предложенная вакцина для профилактики пастереллеза сельскохозяйственных животных обладает высокой специфичностью, ареактогенностью, и иммуногенность ее составляет 90 . Способ ее получения основан на использовании компонентов отечественного производства, достаточно прост в производстве, что делает его гораздо дешевле, чем в прототипе. Источники информации 1. Лях Ю.Г. Эпизоотология и специфическая профилактика пастереллеза свиней, обусловленногосероварами А и Д. Автореф. дис.докт. веет. наук. Минск, 2003. - С. 21. 2. Патент 2162339, МПК 761 39/102,61 2/16,12 1/00, 2001 (прототип). 3. Патент 2162339, МПК 761 39/102,61 2/16,12 1/00, 2001 (прототип). 4. Патент 13085. 5. Патент 13085. 6. Патент 13085. 7.2962, 2005. 8. Мозгов И.Е. Фармакология. - М. Колос, 1969. - С. 339-340. 9. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник. - Минск Беларусь,1986. - С. 203. 10. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник. - Минск Беларусь,1986. - С. 318. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 8