Способ идентификации растительного сырья

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ИДЕНТИФИКАЦИИ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ(71) Заявители Наумов Александр Васильевич Дорошенко Евгений Михайлович Дорошкевич Николай Александрович(72) Авторы Наумов Александр Васильевич Дорошенко Евгений Михайлович Дорошкевич Николай Александрович(73) Патентообладатели Наумов Александр Васильевич Дорошенко Евгений Михайлович Дорошкевич Николай Александрович(57) Способ идентификации растительного сырья, заключающийся в том, что проводят анализ хлорнокислого экстракта измельченного образца растительного сырья методом обращенно-фазной ВЭЖХ с контролируемыми параметрами разделения и детектированием по флуоресценции и идентифицируют сырье путем выявления идентичности хроматограммы исследуемого образца с хроматограммой растения из библиотеки эталонных хроматограмм, полученных в таких же условиях. 10273 1 2008.02.28 Изобретение относится к способам идентификации растительного сырья и может быть использовано в медицине, фармации, сельском хозяйстве, в табачной, парфюмерной, пищевой, винодельческой промышленности и прочих разделах деятельности, где требуется идентификация и стандартизация растительного сырья. Существует несколько способов идентификации растительного сырья. Большинство из них основано на сравнении анатомических особенностей растений (, 2234211 С 2, 2004). Основным недостатком этих способов является необходимость работы с целостными частями растения и совершенно невозможны при анализе измельченных препаратов. Кроме того, идентичность анатомического строения не гарантирует от ошибок при сравнении близких по структуре растений, непригоден при сравнении генетических модифицированных аналогов и совершенно непригоден при сравнении водных и спиртовых экстрактов растений и продуктов их технологической переработки (чай). Существует способ идентификации по генетическим маркерам (, 99122162 А, 2001). Способ чрезвычайно сложен технически, проводить его могут только специалисты в специализированных лабораториях. Очень длительный, дорогостоящий способ не годится для динамичного промышленного контроля. Совершенно непригоден для сравнения малых количеств сырья из-за своей сложности и дороговизны. Кроме того, способ применим, только если есть генетическая карта растения, что на данный момент практически неприменимо для большинства растений, необходимо установление локализации локусов генетических маркеров, что связано с необходимостью выполнения научно-исследовательских работ. Метод совершенно неприменим для водных и спиртовых экстрактов растений. Известен способ количественного контроля и стандартизации медицинских и растительных продуктов (6,806,09019, 2004). Предлагается применение ЯМР-спектроскопии в комбинации с технологией компьютерного распознавания образов и биостандартизации. Учитывая сложность состава любой биологической матрицы пробы, наиболее информативным представляется именно подход, основанный на распознавании образов, однако,информативность образа может значительно различаться в зависимости от способа его получения (линейный профиль или резонансный спектр), от способа пробоподготовки(предпочтителен тот, который оказывает наименьшее влияние на химическое строение компонентов пробы). С этой точки зрения выбор ЯМР-спектроскопии, возможно, не является самым удачным. Изучив доступную патентную литературу, мы не смогли обнаружить источник, который мог бы служить прототипом заявляемого изобретения. Задача изобретения - разработать высокоточный и информативный способ идентификации любого растительного сырья. Поставленная задача решается путем анализа хлорнокислых экстрактов измельченных образцов растительного сырья методомв обращенно-фазной системе с контролируемыми параметрами разделения и детектированием по флуоресценции с последующим сравнением образов хроматограмм исследуемого и стандартного (эталонного) образцов. Способ осуществляют следующим образом. Образцы растительного материала, хранящиеся в герметично упакованных полиэтиленовых пакетах при 4 С, подвергают дезинтеграции в растворе хлорной кислоты, после чего центрифугируют и надосадочную жидкость используют для анализа методомс контролируемыми параметрами разделения и детектированием по флуоресценции. Затем хроматограммы, приведенные к одинаковому масштабу, сравнивают с библиотекой эталонных хроматограмм, полученных в таких же условиях. Принимаются во внимание сходный профиль кривой, соотношение высот и формы наиболее повторяющихся (характерных) пиков, соотношение ширины пиков с определенными временами удерживания. В случае, если хроматограммы совпадают, констатируют идентичность стандартного и испытуемого образцов. Если в хроматограммах обнаружатся различия, констатируют несоответствие испытуемого образца стандарту. 2 10273 1 2008.02.28 Разделение проб биологического материала проводят на колонке с привитой фазой С 18, в подвижной фазе, содержащей буфер, ион-парный реагент, ацетонитрил или метанол в качестве органического модификатора, при контролируемой температуре колонки. Детектирование по флуоресценции. Образцом может служить любая часть растения, его плодов, семян и т.д. В качестве конкретных примеров, подтверждающих возможность осуществления изобретения, приводим хроматограммы травы чистотела большого, шалфея, шиповника, эхинацеи. На фиг. 1 изображены хроматограммы травы чистотела большого. На фиг. 2 показаны те же хроматограммы, только начальная часть (13 мин). На фиг. 3 показан фрагмент тех же хроматограмм, без начальной части. На фиг. 4 изображены хроматограммы шалфея. На фиг. 5 показаны те же хроматограммы, только начальная часть (14 мин). На фиг. 6 показан фрагмент тех же хроматограмм, без начальной части. На фиг. 7 изображены хроматограммы шиповника. На фиг. 8 показаны те же хроматограммы, только начальная часть (10 мин). На фиг. 9 показан фрагмент тех же хроматограмм, без начальной части. На фиг. 10 изображены хроматограммы эхинацеи. На фиг. 11 показаны те же хроматограммы, только начальная часть (13 мин). На фиг. 12 показан фрагмент тех же хроматограмм, более высокая чувствительность. На всех приведенных хроматограммах видно, что наложение хроматограмм нескольких проб одного вида растений показывает высокую степень подобия, если сравнивать как хроматограммы в целом, так и их отдельные фрагменты. И в то же время хроматограммы всех исследованных видов растений существенно различаются между собой вплоть до того, что не удается найти в них даже общих фрагментов. Таким образом, предлагаемый метод позволяет уверенно различать виды растительного сырья, а при накоплении базы данных - идентифицировать его. При этом не требуется идентификация отдельных пиков, в том числе используемых при идентификации, с помощью стандартов для идентификации могут быть использованы даже фрагменты хроматограмм, содержащие неразделенные/недостаточно разделенные пики. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6