Способ моделирования острого панкреатита у собаки в эксперименте

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ МОДЕЛИРОВАНИЯ ОСТРОГО ПАНКРЕАТИТА У СОБАКИ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ(71) Заявитель Учреждение образования Белорусский государственный медицинский университет(72) Авторы Неверов Павел Сергеевич Кондратенко Геннадий Георгиевич Леонович Сергей Иванович Бутько Людмила Владимировна(73) Патентообладатель Учреждение образования Белорусский государственный медицинский университет(56) ФИЛИПОВИЧ Н.Е. Диагностика и лечение деструктивных форм острого панкреатита Автореф. дис. - Минск,1986. - С. 9. ЛУГОВОЙ А.О. и др. Анналы хирургической гепатологии. - 2007. - Т. 12.4. - С. 84-90.1236537 1, 1986.2008721 1, 1994.2244345 1, 2005.(57) Способ моделирования острого панкреатита у собаки в эксперименте, заключающийся в том, что выполняют верхнюю срединную лапаротомию, осуществляют забор желчи из желчного пузыря, выводят в рану двенадцатиперстную кишку и поджелудочную железу,выделяют главный панкреатический проток, надсекают его на 1/2 диаметра на расстоянии 2-3 мм от места впадения в кишку, канюлируют место надсечения и вводят забранную желчь в количестве 0,5-0,7 мл/кг массы животного, после чего лигируют проток и ушивают лапаротомную рану. 14027 1 2011.02.28 Изобретение относится к экспериментальной хирургии и может быть использовано при моделировании острого панкреатита у животных (собаки) для изучения эффективности разрабатываемых новых средств и методов лечения. Лечение легких и среднетяжелых форм острого панкреатита по применяемым лечебным схемам достаточно эффективно, при них практически не возникает осложнений и не наблюдается летальности. Тяжелые формы острого панкреатита, несмотря на использование современных протоколов лечения, сопровождаются большим числом осложнений и высокой летальностью, что требует разработки более совершенных методов лечения и предварительного изучения их эффективности в эксперименте. Известен способ моделирования острого панкреатита у собак, который заключается в введении под капсулу поджелудочной железы 70 этилового спирта 1. Однако этот способ не имеет достаточного патофизиологического обоснования. Внешнее воздействие агрессивного фактора, как правило, способствует формированию деструкции железы непосредственно в месте введения препарата и в лучшем случае вызывает развитие ограниченного очага некроза паренхимы. Клинически развиваются легкие формы острого панкреатита. Описан способ моделирования острого панкреатита у собаки путем пережатия протока поджелудочной железы с последующей 3-кратной стимуляцией внешней секреции органа секретином и панкеозимином 2. Недостатками указанного метода являются высокая стоимость применяемых ферментных препаратов, длительность процесса моделирования(1,5-2 часа), а также сложность создания тяжелых форм развивающегося панкреатита. Наиболее близким способом, принятым за прототип, является способ создания модели острого деструктивного панкреатита у собаки путем катетеризации сосочка протока поджелудочной железы со стороны слизистой оболочки двенадцатиперстной кишки с последующим введением аутожелчи и прошиванием протока 3. Недостаток способа заключается в том, что при вскрытии просвета кишки нарушается асептичность операционного поля и формирующийся процесс в поджелудочной железе изначально течет по септическому варианту, что не соответствует патогенезу острого панкреатита. Кроме того, не всегда удается четко лоцировать сосочек через стенку двенадцатиперстной кишки, что заставляет выполнять широкую дуоденотомию с последующей дуоденопластикой. Во многих наблюдениях выраженная складка слизистой двенадцатиперстной кишки в месте впадения протока у собак отсутствует, что крайне затрудняет канюлирование протока. Жесткость канюли не всегда позволяет продвигать ее непосредственно в просвете протока, что часто сопровождается разрывом протока и введением желчи не в протоковую систему, а в толщу паренхимы поджелудочной железы. При развитии некротизирующего панкреатита существует большая вероятность несостоятельности кишечного шва в области дуоденотомии с развитием перитонита, что нарушает чистоту эксперимента. Задачей заявляемого способа является создание первично асептического некротизирующего процесса в поджелудочной железе с клинической картиной тяжелого острого панкреатита при существенном повышении чистоты эксперимента, с относительно меньшей травматичностью и простотой выполнения. Поставленная задача достигается с помощью предлагаемого способа моделирования острого панкреатита у собаки в эксперименте, заключающегося в том, что выполняют верхнюю срединную лапаротомию, осуществляют забор желчи из желчного пузыря, выводят в рану двенадцатиперстную кишку и поджелудочную железу, выделяют главный панкреатический проток, надсекают его на 1/2 диаметра на расстоянии 2-3 мм от места впадения в кишку, канюлируют место надсечения и вводят забранную желчь в количестве 0,5-0,7 мл/кг массы животного, после чего лигируют проток и ушивают лапаротомную рану. 14027 1 2011.02.28 Способ осуществляют следующим образом. Схема выполнения операции представлена на фиг. 1-3. В качестве экспериментальных животных используют беспородных собак весом 10-25 кг. Под общим обезболиванием производится срединная лапаротомия, пунктируется дно желчного пузыря и забирается 10-15 мл желчи, место пункции перитонизируется -образным швом. В рану выводится подвижная у собак двенадцатиперстная кишка 1 (фиг. 1) с поджелудочной железой 3 (фиг. 1). Вскрытия просвета двенадцатиперстной кишки для канюлирования протока поджелудочной железы не производится, что является принципиальным моментом, обеспечивающим асептичность брюшной полости. Затем на 3-4 см проксимальнее места впадения желчного протока выполняется порционное прецизионное лигирование двух-трех мелких экстрапанкреатических сосудистых образований 2 (фиг. 1),лежащих над протоком. После четкой дифференцировки главного протока поджелудочной железы 4 (фиг. 1, 2) под него подводится две нити-держалки. Затем проток рассекается на 1/2 диаметра на расстоянии 2-3 мм от места впадения в кишку и в дистальном направлении проводится венозный катетер 5 (фиг. 3) соответствующего диаметра (20-22) не далее 3-4 мм, чтобы избежать разрыва протока. Дистальная нить-держалка 6 (фиг. 3) затягивается над катетером, что обеспечивает надежную его фиксацию и герметизирует систему. В катетер шприцем медленно вводится аутожелчь из расчета 0,5-0,7 мл/кг, обычно не менее 5 мл. Введение желчи прекращается после появления мелких темно-зеленых участков в дольках железы. Затем катетер извлекается, проксимальная и дистальная порции протока лигируются нитями-держалками, лапаротомная рана ушивается. Операция технически не сложна, после отработки методики длительность вмешательства составляла 30-40 минут. Пример выполнения способа. Беспородной собаке мужского пола массой 20 кг после премедикации анфином под внутривенным тиопенталовым наркозом, потенцированным фентанилом, выполнена срединная лапаротомия. Пунктировано дно желчного пузыря, аспирировано 15 мл желчи, место пункции перитонизировано -образным швом. В рану выведена двенадцатиперстная кишка и прилежащая часть поджелудочной железы. Пальпаторно определен общий желчный проток. На 3 см выше места его впадения в двенадцатиперстную кишку произведено порционное прецизионное лигирование трех мелких экстрапанкреатических сосудистых образований, лежащих над протоком поджелудочной железы. После четкой дифференцировки панкреатического протока под него подведено две нити-держалки. Проток рассечен надиаметра на расстоянии 2 мм от места впадения в кишку, и в дистальном направлении на 3 мм проведен венозный катетер диаметром 20. Дистальная нить-держалка завязана над катетером. В катетер шприцем медленно введено 12 мл аутожелчи, после чего появились мелкие темно-зеленые участки в дольках по всей поверхности железы. Катетер извлекли, проксимальная порция протока лигирована проксимальной нитью-держалкой. Дистальная часть протока дополнительно лигирована. К этому моменту уже отмечен отек поджелудочной железы. Лапаротомная рана ушита послойно наглухо. С целью обезболивания в послеоперационном периоде назначен анфин 2 мл внутримышечно через 8 ч в течение 5 суток. Описанным способом прооперировано 22 животных. В первые сутки наблюдалось резкое ограничение подвижности животных, они не принимали пищу, возникала многократная рвота с примесью желчи, появлялось вздутие живота и выраженная реакция на его пальпацию. Лабораторные показатели свидетельствовали о значительном росте амилазы крови с 850,6172,9 до 102002274 Ед/л, 0,001. Отмечен также рост аланинаминотрансферазы с 36,8913,88 до 151,958,86 Ед/л, 0,001 рост щелочной фосфатазы с 22,1621,93 до 194,657,06 Ед/л, 0,001 гемоконцентрация с ростом гемоглобина с 14331,13 до 212,418,38 г/л, 0,001 достоверное снижение антиоксидантной защиты (маркер супероксиддисмутаза) с 7,3571,071 до 5,951,144 Ед/(мг ),0,017. 3 14027 1 2011.02.28 В послеоперационном периоде 2 животных без лечения погибли в течение суток после операции. Остальные животные получали лечение острого панкреатита в составе и объеме, предусмотренном экспериментом. На вторые сутки погибло 7 животных, на 4, 6, 8 сутки - по 1 животному. Остальные животные выжили. При аутопсии погибших животных отмечалось скопление значительного количества геморрагического выпота в брюшной полости, множественные очаги стеатонекроза. Поджелудочная железа резко отечная, черного или серо-черного цвета, с участками размягчения. При морфологическом исследовании в железе определялись обширные зоны деструктивных изменений, кровеносные сосуды с выраженными застойными явлениями, периваскулярным отеком, миграцией лимфоцитов и макрофагов. Значительные дегенеративные изменения также выявлены в паренхиме печени, почек погибших животных. У выживших животных, снятых с эксперимента на 7-30 сутки, при аутопсии наблюдался выраженный спаечный процесс в верхнем этаже брюшной полости и плотный инфильтрат в проекции поджелудочной железы. Поджелудочная железа была уменьшена в размерах, плотная на ощупь, дольчатость сглажена. Таким образом, при использовании предложенного способа моделирования острого панкреатита у экспериментальных животных развивается тяжелая форма острого деструктивного (некротизирующего) панкреатита с развитием окислительного стресса, нарушением микроциркуляции, признаками органных нарушений. Достоинство способа заключается в отсутствии необходимости вскрытия просвета двенадцатиперстной кишки, у всех животных развивается тяжелая форма острого первично асептического деструктивного панкреатита, что во всех случаях подтверждено клиническим наблюдением, биохимическими и морфологическими исследованиями. При меньшей по сравнению с прототипом травматичности и большей простоте выполнения экспериментальной модели всегда можно дифференцировать главный проток поджелудочной железы, выполнить прицельное его канюлирование, предотвратить разрыв протока и всегда добиться развития необходимой протоковой гипертензии. Всегда развивается тяжелая форма острого панкреатита. Для моделирования не требуется дорогостоящих реагентов. Источники информации 1.2244345 1, 2005. 2.2008721 1, 1994. 3. Филипович Н.Е. Диагностика и лечение деструктивных форм острого панкреатита. Автореф. дис.докт. мед. наук. - Минск, 1986. - С. 22-24. Национальный центр интеллектуальной собственности. 4