Способ прогнозирования нарушения адаптационного периода у доношенного новорожденного

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ НАРУШЕНИЯ АДАПТАЦИОННОГО ПЕРИОДА У ДОНОШЕННОГО НОВОРОЖДЕННОГО(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Парамонова Нэлла Сергеевна Гурина Людмила Николаевна(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(57) Способ прогнозирования нарушения адаптационного периода у доношенного новорожденного, заключающийся в том, что в сыворотке пуповинной крови определяют спектрофотометрически активность эластазоподобных протеаз с использованием в качестве субстрата протеаз нитрофенилового эфира -бутилоксикарбонилаланина и при получении значения более 0,35 м/мкл прогнозируют высокую вероятность нарушения адаптационного периода у доношенного новорожденного. Изобретение относится к области медицины, а именно к неонатологии, и может использоваться для прогнозирования течения адаптационного периода у доношенных новорожденных. Срыв адаптационного периода проявляется дыхательными расстройствами, угнетением или возбуждением центральной нервной системы, гипербилирубинемией. В доступной нам литературе отсутствуют сведения о состоянии протеолитической системы у детей в периоде ранней адаптации и нами не обнаружены способы прогнозирования течения адаптационного периода у новорожденных. Задача изобретения - обеспечение возможности прогнозирования течения адаптационного периода у младенцев в целях проведения качественной и своевременной диагностики и профилактики нарушений физиологически протекающей адаптации. Указанная задача решается путем определения в сыворотке пуповинной крови спектрофотометрическим методом активности эластазоподобных протеаз с использованием в качестве субстрата протеаз нитрофенилового эфира -бутилоксикарбонилаланина, и при получении значения более 0,35 мЕ/мкл прогнозируют высокую вероятность нарушения адаптационного периода у доношенного новорожденного. Способ осуществляют следующим образом. Из материнского конца пуповины после ее пересечения забирают 3-5 мл крови. Забранную кровь центрифугируют при 15356 1 2012.02.28 1500 об./мин. в течение 10 мин при температуре 23 С. Сыворотка крови может храниться в течение суток при - 4 С. При - 20 С сыворотка крови стабильна в течение 3-х месяцев. При двукратном и более замораживании и размораживании показатели протеолиза в различных образцах очень варьируют, поэтому такое исследование недопустимо. Затем энзиматическим методом определяют общую протеолитическую активность сыворотки крови, 90 которой составляет эластаза., . . . 1972. - . 268. - . 257-260. Данный метод основан на взаимодействии эластазоподобных протеаз (эластаза нейтрофилов, сериновая протеаза, тиоловая протеаза (катепсин ), сериновые эластазы моноцитов и тромбоцитов, металлопротеаза макрофагов) с субстратом БАНЭ (нитрофениловый эфир -бутилоксикарбонилаланина). В результате этой реакции образуется -нитрофенол, количество которого пропорционально активности эластазоподобных протеаз. В кювету общим объемом 3,0 мл, содержащую 2,85 мл 0,05 фосфатного буфера ( 6,5) и 0,05 мл исследуемой биологической жидкости (сыворотка крови), вносят 0,1 мл 0,01 раствора БАНЭ (начало реакции). Кювету инкубируют при температуре 25 С в течение 60 с. После инкубации на протяжении 120 с фиксируют изменение оптической плотности раствора на спектрофотометрепри длине волны 347 нм. Активность эластазоподобных протеаз выражают в наномолях гидролизованного БАНЭ за 1 мин на 1,0 мл биологической жидкости и вычисляют по формуле дельта 3,0 мл,5,5 1030,05 мл где дельта- прирост -нитрофенола за 2 мин- коэффициент молярной экстинции БАНЭ 5,5103 Ммг 3,0 мл - объем кюветы 0,05 мл - объем исследуемой жидкости.- активность эластазоподобных протеаз, выражается в мЕ/мкл (нмоль/мин/млмЕ/мкл). При уровне эластазоподобной активности сыворотки крови более 0,35 мЕ/мкл прогнозируют высокую вероятность нарушения адаптационного периода новорожденного ребенка, проявляющуюся дыхательными расстройствами, угнетением или возбуждением центральной нервной системы, гипербилирубинемией. Полученные результаты обработаны с помощью методов непараметрической статистики с использованием стандартных компьютерных программ 6,0,. Рассчитывались медиана, 25 и 75 процентили (, 25 , 75 ). Сравнение групп осуществляли с помощью критерия Манна-Уитни. При помощи метода четырехпольных таблиц рассчитывались основные операционные характеристики теста определения эластазоподобной активности сыворотки крови чувствительность, специфичность. Для доказательства заявляемого способа проведено исследование активности протеолитических ферментов в сыворотке пуповинной крови у 69 доношенных младенцев, которые были разделены на 4 группы. Основную группу сформировали из 59 доношенных детей, у которых имелись различные нарушения адаптационного периода. Группу сравнения составили 10 детей, период адаптации у которых протекал без особенностей. Пуповинная кровь забиралась из материнского конца пуповины после ее пересечения в объеме 3 мл. Активность эластазоподобных протеаз сыворотки крови у доношенных детей основных групп и группы сравнения представлена в таблице. 15356 1 2012.02.28 Значения уровня эластазоподобной активности сыворотки пуповинной крови(мЕ/мкл) у доношенных новорожденных основных групп и группы сравнения Признаки дыхательных расстройств (9) 0,001 Синдром угнетения или возбуждения нервно 0,001 рефлекторной возбудимости (36) Гипербилирубинемия (14) 0,600 (0,512-0,741) 0,001 Группа сравнения (10) 0,223 (0,163-0,298) При уровне эластазоподобной активности сыворотки крови более 0,35 мЕ/мкл диагностическая чувствительность теста составляет 88 , диагностическая специфичность- 98 . Приводим примеры, подтверждающие возможность осуществления способа. Пример 1. Доношенный мальчик от первой беременности, первых срочных родов в сроке беременности 39 недель с массой тела 3350 г, длиной тела 55 см, окружностью головы 35 см,груди 34 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Беременность и роды протекали без особенностей. Протеолитическая активность сыворотки пуповинной крови была 0,23 мЕ/мкл. Ребенок из родильного зала переведен в физиологическое отделение. Период адаптации протекал без особенностей, в возрасте 5 дней жизни с положительной динамикой массы тела ребенок выписан домой. Пример 2. Доношенный мальчик от первой беременности, первых срочных родов в сроке беременности 39 недель с массой тела 3500 г, длиной тела 54 см, окружностью головы 35 см,груди 33 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Беременность и роды протекали без особенностей. Протеолитическая активность сыворотки пуповинной крови была 0,47 мЕ/мкл, спрогнозирован высокий риск нарушений адаптационного периода. Ребенок из родильного зала переведен в физиологическое отделение. Через 5 часов после рождения состояние ребенка ухудшилось и расценено как средней степени тяжести плач болезненный, монотонный. Объективно кожные покровы бледно-розовые, акроцианоз. Мышечный тонус и рефлексы периода новорожденности снижены. Температура аксилярная и ректальная - нормотермия. Младенец нуждался в дальнейшем лечении и наблюдении. Пример 3. Доношенная девочка от первой беременности, первых срочных родов в сроке беременности 39 недель с массой тела 3200 г, длиной тела 52 см, окружностью головы 34 см,груди 33 см, с оценкой по шкале Апгар 8/9 баллов. Беременность и роды протекали без особенностей. Протеолитическая активность сыворотки пуповинной крови была 0,88 мЕ/мкл, спрогнозирован высокий риск нарушений адаптационного периода. Ребенок из родильного зала переведен в физиологическое отделение. Через шесть часов после рождения состояние ребенка ухудшилось стала постанывать. Объективно кожные покровы бледно-розового цвета с выраженным пероральным и акроцианозом. Дыхание стонущее, аритмичное, с участием вспомогательной мускулатуры в акте дыхания. Над легкими равномерно ослабленное дыхание, с единичными крепитирующими хрипами в межлопаточной области. Девочка нуждалась в оказании экстренной медицинской помощи. Таким образом, заявляемый способ прогнозирования течения адаптационного периода у доношенных новорожденных позволяет сформировать группы риска среди младенцев по дыхательным нарушениям, перинатальному поражению центральной нервной системы,ранней гипербилирубинемии. Такие дети нуждаются в динамическом клиническом, лабо 3 15356 1 2012.02.28 раторном и инструментальном наблюдении для проведения своевременной профилактики и лечения. Данный способ может быть применен в работе перинатальных центров различного уровня для своевременного прогнозирования течения адаптационного периода у доношенных младенцев с целью предупреждения срыва периода адаптации, что будет способствовать снижению заболеваемости новорожденных. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4