Экстракционная смесь для извлечения метилксантинов

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ЭКСТРАКЦИОННАЯ СМЕСЬ ДЛЯ ИЗВЛЕЧЕНИЯ МЕТИЛКСАНТИНОВ(71) Заявитель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(72) Авторы Жебентяев Александр Ильич Пивовар Михаил Леонидович(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебский государственный ордена Дружбы народов медицинский университет(57) Экстракционная смесь для извлечения метилксантинов, содержащая хлороформ и спирт, отличающаяся тем, что в качестве спирта содержит н-бутанол или изобутанол при следующем соотношении компонентов, об.хлороформ 67 н-бутанол или изобутанол 33. Изобретение относится к области фармации, а именно к химико-токсикологическому анализу, и может применяться для экстракции теобромина и теофиллина из водных сред и биоматериала. Как известно, теофиллин относится к группе спазмолитиков миотропного действия и широко применяется для профилактики бронхоспазмов. Теобромин также проявляет спазмолитические свойства, но значительно реже применяется в медицинской практике 1. При химико-токсикологическом исследовании биоматериал подвергается пробоподготовке. При использовании метода жидкость-жидкостной экстракции (ЖЖЭ) в качестве экстрагента применяются индивидуальные органические растворители или их смеси. Использование смесей обусловлено их высокой эффективностью (высокие коэффициенты распределения, меньшее экстрагирование примесей и проч.) по сравнению с индивидуальными органическими растворителями 2. Прототипом данного изобретения является экстракционная смесь состава 3 хлороформ 95(по объему) изопропанол 5(по объему). Извлечение метилксантинов из биоматериала обычно осуществляют экстракцией смесью алкилгалогенидов (хлороформ, дихлорметан) со спиртами (изопропанол, метанол) в различных соотношениях. Чаще всего используют смесь хлороформ изопропанол в соот 14446 1 2011.06.30 ношении (по объему) 955 3, 4, 5, 6. Это обусловлено тем, что она хорошо экстрагирует кофеин и ее потери в водной фазе минимальны (за счет низкого содержания изопропанола, который в значительной степени переходит в водную фазу после экстракции). Однако эта экстракционная смесь имеет существенный недостаток - невысокие коэффициенты распределения теобромина и теофиллина. Задача изобретения - разработать состав экстракционной смеси с высокими коэффициентами распределения теобромина и теофиллина. Реализация задачи достигается за счет того, что вместо изопропанола в экстракционной смеси используют н-бутанол или изобутанол. Изобретение поясняется следующими графическими материалами на фиг. 1 изображен график зависимости коэффициентов распределения теобромина и теофиллина от объемного процентан-бутанола в экстракционной смеси хлороформ н-бутанол. На фиг. 2 изображен график зависимости коэффициентов распределения теобромина и теофиллина от объемного процентаизобутанола в смеси хлороформ изобутанол. Для приготовления экстракционных смесей берут хлороформ, н-бутанол и изобутанол,соответствующие квалификации химически чистый (х.ч.) или чистый для анализа (ч.д.а.). Хлороформ предварительно подвергают очистке от стабилизирующей добавки этанола по следующей методике. Хлороформ встряхивают с концентрированной серной кислотой(24), промывают водой, сушат над карбонатом калия (23) и перегоняют 7. Изобутанол и н-бутанол дополнительной очистке не подвергают. Экстракционные смеси готовят путем смешивания хлороформа, н-бутанола или изобутанола в посуде достаточной емкости. Расчет объемов органических растворителей производят исходя из следующей формулысмеси спирта,100 где- процентное содержание (по объему) н-бутанола или изобутанола в смеси спирта объем н-бутанола или изобутанола смеси - объем смеси. Таким образом, для получения 100 мл предлагаемых экстракционных смесей органические растворители смешивают в следующих соотношениях для экстракционной смеси хлороформ н-бутанол (содержание н-бутанола 33 (об/об хлороформ 67 мл н-бутанол 33 мл,для экстракционной смеси хлороформ изобутанол (содержание изобутанола 33(об/об хлороформ 67 мл изобутанол 33 мл. Для установления оптимального соотношения органических растворителей в смеси предварительно были определены коэффициенты распределения теобромина и теофиллина при экстракции из модельных растворов смесями, содержащими различный объемный процент н-бутанола или изобутанола. Равновесную экстракцию при равных объемах водной и органической фаз (по 4 мл) изучали в экстракционных флаконах объемом 10 мл. Температура при определении коэффициентов распределения составляла 201 С. В каждый флакон помещали рассчитанные объемы растворов теобромина или теофиллина и буферного раствора с 5,0. Выбор данного значениясделан из середины диапазона (4-7), рекомендуемого для извлечения теобромина и теофиллина 8. Экстракцию проводили 4 мл смеси органических растворителей во вращающем экстракторе в течение 5 мин. По окончании экстракции флаконы центрифугировали при 3000 об/мин 5 мин для предотвращения образования микроэмульсии в водной фазе. Анализ водной фазы осуществляли УФ-спектрофотометрическим методом (при длине волны 273 нм для теобромина и 272 нм для теофиллина) на регистрирующем спектрофотометре 250. Для расчета концентраций исследуемых веществ 2 14446 1 2011.06.30 в водной фазе предварительно были построены градуировочные графики и рассчитаны молярные коэффициенты поглощения. На основе полученных данных были построены графики зависимости изменения коэффициентов распределения теобромина и теофиллина от содержания спирта в экстракционной смеси (фиг. 1, фиг. 2). В связи с большим различием коэффициентов распределения теобромина и теофиллина на приведенных диаграммах для удобства используется логарифмическая шкала для коэффициентов распределения. Как видно из приведенных диаграмм, оптимальными для экстракции являются смеси хлороформ н-бутанол (содержание н-бутанола 33 (об/об и хлороформ изобутанол (содержание изобутанола 33(об/об. Коэффициенты распределения теобромина и теофиллина при экстракции предлагаемыми экстракционными смесями, смесью-прототипом и индивидуальными органическими растворителями из модельных растворов приведены в таблице. Коэффициенты распределения метилпроизводных ксантина при экстракции смесями органических растворителей (50,05). Вещество Теобромин Теофиллин Экстрагент хлороформ н-бутанол (33 ) 1,4290,011 6,4770,055 хлороформ изобутанол (33 ) 1,4920,021 6,7480,057 хлороформ изопропанол (5 ) 0,7020,005 0,9200,006 хлороформ 0,3630,006 0,2100,011 н-бутанол 0,5820,014 1,8850,019 изобутанол 0,5670,016 1,4490,017 Положительный эффект изобретения заключается в том, что при экстракции предложенными экстракционными смесями коэффициенты распределения теобромина в 2 раза выше, чем у смеси-прототипа и в 4 раза выше, чем у индивидуальных растворителей. При экстракции теофиллина коэффициенты распределения выше в 6 раз по сравнению со смесью-прототипом и в 30 раз выше, чем при экстракции хлороформом. Что позволяет в большей степени извлекать теобромин и теофиллин из водных растворов и биологических объектов. Источники информации 1. Курбат Н.М., Станкевич П.Б. Фармакорецептурный справочник врача. 2-е изд. испр. и доп. - Минск Выш. шк., 2003. - 605 с. 2. Коренман И.М. Экстракция в анализе органических веществ. - М. Химия. - 1977. 200 с. 3..,., , , , ,/ // .. - 1988. - . 10. - . .-. 101-115 (прототип). 4..,.,.,.,., - .,., ./,//. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4