Инактивированная вакцина для профилактики бешенства у животного

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ИНАКТИВИРОВАННАЯ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ БЕШЕНСТВА У ЖИВОТНОГО(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(72) Авторы Ковалев Николай Андреевич Уласович Павел Иосифович Усеня Михаил Михайлович Бучукури Джемал Владимирович(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н. Вышелесского(57) Инактивированная вакцина для профилактики бешенства у животного, отличающаяся тем, что представляет собой культуральную жидкость, содержащую штаммКМИЭВ-19 с инфекционной активностью 6,1-6,550/мл, смешанную в соотношении 11 со средой, содержащей, мас.пептон 8,0-9,0 лактозу 2,3-2,5 физиологический раствор остальное,причем перед смешиванием в культуральную жидкость внесены 0,01-0,05 -ный раствор теотропина до инактивации вируса и затем рифампицин до концентрации 6-8 мас. . Изобретение относится к области вирусологии и может быть использовано в биологической промышленности для изготовления препарата и в ветеринарии для профилактики бешенства среди животных. В современной ветеринарной практике известен ряд инактивированных антирабических вакцин вакцина с использованием штамма Внуково-32, выращенного в культуре клеток ВНК-21 с использованием питательной среды Игла и инактиванта -пропиолактона, которая применяется для иммунизации людей, а также для иммунизации животных 1 вакцина с использованием штамма вируса бешенства Щелково-51, выращенного в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, клон. 13 на среде Игла и инактивированного 12751 1 2009.12.30 вакцина с использованием штамма вируса бешенства ТС-80, выращенного в суспензии клеток ПС или ВНК-21 с использованием питательной среды Игла-МЭМ и инактивированного сернокислой медью или теотропином А-24 3. Недостатками указанных вакцин являются отсутствие в их составе ингибиторов вируса в живом организме и, вследствие этого, недостаточная эффективность при постэкспозиционной профилактике бешенства у инфицированных животных. Известна вакцина для профилактики животных против бешенства, включающая фиксированный вирус бешенства в среде культивирования и защитную среду, причем в качестве фиксированного вируса бешенства в среде культивирования используют штамм 71 - БелНИИЭВ-ВГНКИ с титром 4,45-6,050/мл в среде с гидролизатом лактальбумина на растворе Хенкса и нормальной сывороткой крови крупного рогатого скота, а в качестве защитной среды - пектин яблочный и молоко сухое обезжиренное при следующем соотношении компонентов, . Штамм 71 - БелНИИЭВ-ВГНКИ с гидролизатом лактальбумина на растворе Хенкса и нормальной сывороткой крови крупного рогатого скота - 45,0-59,0 пектин яблочный - 2,0-2,5 молоко сухое обезжиренное - остальное 4. Эта вакцина имеет недостаток, заключающийся в том, что вакцина обладает сравнительно низкой иммуногенностью, т.к. ее титр равен 4,45-6,0 М 50/мл. Задачей изобретения является конструирование многофункциональной инактивированной антирабической вакцины с повышенной иммуногенностью, ареактогенной, технологически экономичной и безвредной для животных и удешевление, упрощение способа ее изготовления. Поставленная задача достигается тем, что инактивированная вакцина для профилактики бешенства у животного представляет собой культуральную жидкость, содержащую штаммКМИЭВ-19 с инфекционной активностью 6,1-6,5 мл, смешанную в соотношении 11 со средой, содержащей, мас.пептон 8,0-9,0 лактозу 2,3-2,5 физиологический раствор остальное,перед смешиванием в культуральную жидкость внесены 0,01-0,05 -ный раствор теотропина для инактивации вируса и затем рифампицин до концентрации 6-8 мас. . Таким образом, достигается поставленная задача, т.к. штаммКМИЭВ 19 в культуре клеток ПК, ПЭС, ПСХ и КПЗ вирус размножается, не вызывая цитопатического эффекта, в период с 4 по 12 день инкубирования, наибольшее накопление его отмечается на 5-6 день. Титр вируса 6,1-6,5 ЛД 50/мл. Состав поддерживающей среды (199,Игла, ГЛХ) не оказывает существенного влияния на накопление вируса в культуре клеток,поэтому можно использовать более простую среду ГЛХ с 5 сыворотки крупного рогатого скота. Специфическая безвредность. Безвреден для рыжих лисиц, волков и енотовидных собак. Инфекционность штамма для животных при введении в мозг. Введение вируса в мозг кроликам - 0,2 мл и мышам - 0,03 мл вызывает заболевание бешенством на 7-9 день после заражения. Иммуногенные свойства. Формирует устойчивый иммунитет у диких плотоядных к летальной дозе уличного вируса бешенства при заражении в мышцу бедра. Иммунное состояние у этих животных наблюдается на 25-30 день после орального введения им 150-200 10000-100000 ЛД 50. Штамм сохраняется в лиофилизированном состоянии при температуре минус 40 в течение 4-5 лет. Для культивирования вируса используются 0,5 гидролизата лактальбумина и 5 сыворотки крупного рогатого скота. Смена среды производится каждые 3-4 сутки при 2 12751 1 2009.12.30 температуре 37 С. Для заражения культуры клеток вирус используется в дозах 0,06-0,08 ЛД 50/клетка. Полученный штамм используется для изготовления вакцины против бешенства животных. Пример конкретного выполнения заявляемого изобретения. Выращивание вируса бешенства штамм- КМИЭВ-19 проводят в культуре клетокв концентрации 0,05-0,25 млн кл/мл с одновременным внесением вируса в количестве 0,01-0,2 М 50/клетку в питательной среде Игла МЭМ при 37 С и рН среды 7,2-7,4 в стационарных или роллерных флаконах при 37 С. Время культивирования 3-4 суток. Инфекционная активность вируса бешенства к этому времени составляет 6,1-6,550/мл, антигенная активность вакцинного сырья в реакции ИФА 190 - 1280. Полученное вакцинное сырье инактивируют 0,01-0,05 -ным теотропином А-24 при 37 С в течение 31-35 ч, затем вносят предварительно растворенный на вирусной взвеси ингибитор вируса бешенства рифампицин (для инъекций) до конечной концентрации 6,0-8,0 в жидкость содержащий инактивированный вирус и добавляют 50 среды высушивания,состоящей из 8,0-9,0 пептона, 2,3-2,5 лактозы, 90,5-89,0- физиологический раствор, и подвергают лиофилизации. Сравнительная характеристика предлагаемой вакцины Состав вакцины и этапы полуПредлагаемая вакцина Прототип чения Штамм вирусаКМИЭВ-19 71 БелНИИЭВ-ВГНКИ Титр 6,1-6,5 50/мл Титр 4,5-6,0 М 50/мл Культура клеток ФЭК, ПК Среда культивирования Игла МЭМ Игла Ингибитор вируса Рифампицин (для инъекций) нет 6,0-8,0 Среда высушивания Пептон 10,0 Пептон 8,0-9,0 лактоза 2,5 лактоза 2,3-2,5 желатин 1,25 ,физраствор 39,0-90,5 физраствор 86,25 Посадочная концентрация кк 0,2-0,25 млн кл/мл 0,3-0,4 млн кл/мл Инфекционная активность титр 5,5-6,5 4,5-6,0 вируса 50/мл Иммуногенность 1,2-1,4 0,8-1,1 Инактивант Теотропин А 24 0,01-0,05 нет вес.Условия и время инактивации 37 С в течение 31-35 ч нет Предлагаемая вакцина и способ ее изготовления по сравнению с прототипом имеет следующие преимущества 1. Титр вируса бешенства в вакцинном сырье повышается с 4,550/мл до 6,1-6,550/мл, а иммуногенность вакцины с 0,8, до 1,4-МЕ. 2. Вакцина не вызывает у животных аллергических реакций. 3. Сокращается время получения вирусного сырья на 1-2 суток за счет одновременного внесения клеток и вируса в емкости для культивирования. 4. Уменьшается расход питательной среды за счет исключения этапа смены среды. Уменьшается прививочная доза вакцины с 5,0 см 3 до 2,0-4,0 см 3 за счет повышения ее иммуногенности. 3 12751 1 2009.12.30 5. Сокращается время инактивации вирусного сырья с 48 до 31-35 часов. 6. Уменьшается расход материалов при сушке вакцины за счет исключения из состава стабилизирующей среды желатина. 7. Повышается растворимость вакцины, что позволяет сэкономить время ее приготовления перед применением. 8. Инактивированный вирус вызывает образование антирабического иммунитета, а рифампицин ингибирует размножение вируса бешенства в организме. Источники информации 1.., -32. //., . - 1996. - . 310-313. 2. Патент 955577, 1994. 3. Вишняков И.Ф., Никитин И.В., Недосеков В.В. Инактивированная культуральная вакцина против бешенства // Ветеринария. - 1998. -1. - С. 22-24. 4. А.с. СССР 1120701, МПК С 12 7/00 (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4