Трансгенное растение кукурузы с высоким содержанием лизина и способы его детектирования

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что семя первого родительского растения кукурузы, содержащего ДНК Явления 131038, представляет собой семя, образец которого депонирован в АТСС под номером РТА-5623.3. Пара молекул ДНК-праймеров, способная при совместном использовании в реакции амплификации ДНК приводить к продуцированию диагностического ампликона Явления ЬУО 38 кукурузы, репрезентативный образец семени которой, содержащий последовательность ЗЕО П) МО 5, депонирован в АТСС под номером РТА-5623, при этом одна из укаванных молекул ДНК-праймеров содержит по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов в последовательности от 1 до 1781 нуклеотида БЕО П) ЫО 1, а вторая - 18 смежных нуклеотидов в последовательности от 1782 до 1961 нуклеотида БЕС) Ш ЫО 1.4. Пара молекул ДНК-праймеров по п. 3, отличающаяся тем, что одна молекула ДНК-праймера представляет собой последовательность БЕО П) МО 3, а вторая - ЗЕО П) ЫО 4.5. Пара молекул ДНК-праймеров, способная при совместном использовании в реак ции амплификации ДНК приводить к продуцированию диагностического ампликона Яв- япения ЬУ 038 кукурузы, репрезентативный образец семени которой, содержащий последовательность ЗЕО П) ЫО 11, депонирован в АТСС под номером РТА-5623, при этом одна из указанных молекул содержит по меньшей мере 18 смежных нуклеотидов в последовательности от 1 до 200 нуклеотида ЗЕО Ш ЫО 2, а вторая - 18 смежных нуклеотидов в последовательности от 201 до 867 нуклеотида БЕС) П) ЫО 2.6. Способ определения присутствия ДНК Явления ЬУОЗЗ в образце ткани кукурузы,репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623,при котором осуществляют следующие стадии(а) получение ДНК из образца ткани кукурузы(б) приведение указанной ДНК в контакт с парой молекул ДНК-праймеров по п. 3(в) амплификацию ДНК при помощи указанной пары праймеров, приводящей к образованию молекулы ДНК-ампликона, содержащей по меньшей мере пару нуклеотидов 1781-1782 в последовательности ЗЕО П) ЫО 1, и7. Стабильно трансформированное растение кукурузы, которое при определении способом по п. 6 продуцирует ДНК-ампликон Явления ЪУОЗЗ кукурузы, репрезентативный образец семени которой, содержащий последовательность ЗЕО П) МО 5, депонирован в АТСС под номером РТА-5623.8. Способ определения присутствия ДНК Явления ЬУОЗЗ в образце ткани кукурузы,при котором осуществляют следующие стадии(а) получение ДНК из образца ткани кукурузы(б) приведение указанной ДНК в контакт с парой молекул ДНК-праймеров по п. 5(в) амплификацию ДНК при помощи указанной пары молекул ДНК-праймеров, приводящей к образованию молекулы ДНК-ампликона, содержащей по меньшей мере пару нуклеотидов 200-201 в последовательности БЕС) Ш МО 2, И9. Стабильно трансформированное растение кукурузы, которое при определении способом по п. 8 продуцирует ДНК-ампликон Явления ЬУОЗЗ кукурузы, репрезентативный образец семени которой, содержащий последовательность БЕО П) МО 11, депонирован в АТСС под номером РТА-5623.10. Набор для детектирования ДНК Явления ЬУОЗЗ кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623, включающий(б) зонд, содержащий последовательность БЕС) Ш ЫО 5, БЕО П) МО 6 или БЕО П) МО 11, который функционирует в качестве праймера или зонда в способе, разработанном для детектирования ДНК Явления ЬУОЗЗ кукурузы.11. Кукурузная мука, содержащая последовательность БЕО П) ЫО 5 или ЗЕО П) ЫО 11, полученная из семян, содержащих ДНК Явления ЬУ 038 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.12. Кукурузная мука, способная образовывать ДНК-ампликон Явления ЬУ 038 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА 5623.13. Кукурузный эндосперм, содержащий последовательность БЕС) П) ЫО 5 или БЕО П) ЫО 11, полученный из семян, содержащих ДНК Явления ЬУОЗЗ кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.14. Кукурузный эндосперм, способный продуцировать ДНК-ампликон Явления ЬУО 38 кукурузы, репрезентативный образец семени которой, содержащий последовательность ЗЕО П) МО 1, 2, 5, 6 или 11, депонирован в АТСС под номером РТА-5623.15. Трансгенное растение кукурузы, содержащее ДНК Явления ЬУОЗ 8, полученное из семени, содержащего ДНК Явления 151038, репрезентативный образец которого депонирован в АТСС под номером РТА-5623.16. Трансгенное растение кукурузы по п. 15, отличающееся тем, что дополнительно включает свое потомство, причем потомство способно продуцировать ДНК-ампликон, содержащий последовательность ЗЕО 11) МО 1, 2, 5, 6 или 11.17. Трансгенное растение кукурузы по п. 15, отличающееся тем, что геном указанного растения содержит молекулу ДНК, представляющую собой последовательность БЕО Ш 11 О 1, 2, 5, 6 или 11.18. Семя трансгенного растения кукурузы по п. 15, содержащее ДНК Явления ЬУОЗ 8,депонированное в АТСС под номером РТА-5623.19. Трансгенное растение кукурузы по п. 15 или его часть, представляющая собой пыльцу, семяпочку, семя, корень или лист, содержащие последовательность ЗЕО П) МО 7, фланкируемую парами нуклеотидов в последовательности от 1 до 1781 нуклеотида ЗЕО П) ЫО 1 и парами нуклеотидов в последовательности от 201 до 867 нуклеотида БЕО ПЭ ЫО 2.20. Выделенная молекула ДНК, содержащая последовательность ЗЕО Ш ЫО 1, пригодная в качестве зонда для детектирования ДНК Явления ЬУ 038 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.21. Выделенная молекула ДНК, содержащая последовательность БЕО Н) ЫО 2, пригодная в качестве зонда для детектирования ДНК Явления 131038 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.22. Выделенная молекула ДНК, содержащая последовательность БЕС) П) МО 5, пригодная в качестве зонда для детектирования ДНК Явления ЬУО 38 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.23. Выделенная молекула ДНК, содержащая последовательность ЗЕО П) МО 6, пригодная в качестве зонда для детектирования ДНК Явления ЬУО 38 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.24. Выделенная молекула ДНК, содержащая последовательность ЗЕО П) МО 11, пригодная в качестве зонда для детектирования ДНК Явления ЬУО 38 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.25. Ампликон, содержащий молекулу ДНК, последовательность которой выбрана из группы ЗЕО П) МО 1, 2, 5, 6 и 11, пригодный в качестве зонда для детектирования ДНК Явления ЬУ 038 кукурузы, репрезентативный образец семени которой депонирован в АТСС под номером РТА-5623.В данной заявке испрашивается приоритет в соответствии с 5 119 (е) статьи 35 Свода Законов США, соответствующий приоритету предварительной заявки США Ш 60/529182, поданной 11Настоящее изобретение относится к области молекулярной биологии растений. В частности, оно относится к трансгенной кукурузе с повышенным содержанием лизина, а также к анализам и способам идентификацииспецифической экзогенной ДНК, обеспечивающей растение ПОВЫШЭННЬПИ СОДЗРЖЭНИЕМ лизина.Кукуруза 2 еа шауэ широко используется в приготовлении корма для животных. Хлебные злаки, т.е. зерно, являются источниками белка, крахмала и жиров для свиней, крупного рогатого скота и домашней птицы. Из десяти аминокислот, которые считаются незаменимыми, лизин, треонин и метионин содержатся в кукурузе в особом дефиците. Недостаток указанных аминокислот, в особенности лизина, требует добавления указанных питательных веществ в кормовое зерно кукурузы или кукурузную муку, причем источником первых часто является соевая мука. Таким образом, было бы чрезвычайно полезно повысить содержание лизина в кукурузных зернах для увеличения питательности кукурузного зерна.Для повышения содержания лизина при помощи молекулярно биологического подхода был идентифицирован и использован нечувствительный к действию механизмов обратной связи вариант по крайней мере одного из ферментов, относящихся к связанным с лизином метаболическим путям, а именно фермент дигидродипиколинатсинтаза (упоминаемый в данной заявке в виде аббревиатуры ВНВРЗ). 1 п у 1 Сго было показано, что изолированный из Е. со 11 бактериальный ген ВНВР 5 в 200 раз менее чувствителен к ингибированию опосредованному повышением уровня лизина, и сверхэкспрессия указанного фермента в табаке посредством трансгеноза приводит к повышению уровня лизина в ткани листьев(61 аз 5 тап е а 1., патент США 5288300). Ра 1 со с соавторами описали трансгенные растения с повышенным содержанием лизина в семенах, а также гены, используемые для получения подобных трансгенных растений (патенты США 5773691 и 6459019 публикация патентной заявки США 2003/0056242, каждая из которых полностью включена в данное описание посредством ссылки). В приведенных сообщениях Еа 1 со с коллегами описали получение нечувствительного к действию механизмов обратной связи ВНВР 5 из Е/со 11 и ВНВРЭ из СохупеЬассе 1 цш (также известного как согаарА) и использование указанного гена для получения трансгенных семян рапса, табака,кукурузы и сои с повышенным содержанием лизина в семенах. Для зерен кукурузы, трансформированных геном согаарА, Ра 1 со с коллегами описали примерно 130 увеличение содержания свободного лизина по сравнению с нетрансформированными зернами.В данном контексте может быть полезно обнаружениеПРИСУТСТВИЯ ЛИбО ОТСУТСТВИЯ специфического трансгена В растении