Способ выявления цитогенетических нарушений в нестимулированных лимфоцитах периферической крови детей, длительно проживающих на радиационно-загрязненных территориях

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИХ НАРУШЕНИЙ В НЕСТИМУЛИРОВАННЫХ ЛИМФОЦИТАХ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ДЕТЕЙ, ДЛИТЕЛЬНО ПРОЖИВАЮЩИХ НА РАДИАЦИОННО-ЗАГРЯЗНЕННЫХ ТЕРРИТОРИЯХ(71) Заявитель Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии(73) Патентообладатель Научно-исследовательский клинический институт радиационной медицины и эндокринологии(57) Способ выявления цитогенетических нарушений в нестимулированных лимфоцитах периферической крови детей, длительно проживающих на радиационно-загрязненных территориях, путем микроядерного анализа лимфоцитов периферической крови, отличающийся тем, что в мазках капиллярной крови, окрашенной по Романовскому, выявляют моно- и полиядерные лимфоциты с одним и более микроядрами, представляющими собой ядерные образования, расположенные на расстоянии от ядра, не превышающем 1/3 его размера, и при их наличии судят о цитогенетических нарушениях.(56) Пилинская М.А. и др. Влияние радиоэкологической обстановки на частоту хромосомных аберраций у детей, проживающих в районах выпадения радиоактивных осадков после аварии на ЧАЭС. Радиобиологические последствия аварии на ЧАЭС. - Мн. 1991. - С. 103.12926, 1997.2652 , 1997.2653 , 1997.2654 , 1997.2655 , 1997.2656 , 1997.950995 , 1997.950996 , 1997.960026 , 1997. Изобретение относится к медицинской генетике, к разделу лабораторной диагностики. Наиболее известен способ выявления цитогенетических нарушений в культуре лимфоцитов периферической крови детей, связанных с радиационным фактором, и заключающийся в выявлении хромосомных аберраций в культуре лимфоцитов периферической крови 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако способ-прототип не позволяет проводить скрининговые обследования у детей, связанных с радиационным фактором, в виду своей дороговизны (20 - одно обследование) и длительности проведения одного анализа (5-6 дней). Задачей заявляемого изобретения является создание способа, позволяющего сократить время скрининга. 4307 1 Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ выявления цитогенетических нарушений в нестимулированных лимфоцитах периферической крови детей, длительно проживающих на радиационно-загрязненных территориях, путем микроядерного анализа лимфоцитов периферической крови,когда в мазках капиллярной крови, окрашенной по Романовскому, выявляют моно- и полиядерные лимфоциты с одним и более микроядрами, представляющими собой ядерные образования, расположенные на расстоянии от ядра, не превышающем 1/3 его размера, и при их наличии судят о цитогенетических нарушениях. На основании проведенных цитогенетических исследований на популяции детей из 300 человек в возрасте от 1 года до 15 лет, из них 106 детей вошли в контрольную группу, установлено, что в нестимулированных лимфоцитах периферической крови детей, длительно проживающих на радиационно-загрязненных территориях, встречаются лимфоциты как моноядерные, так и полиядерные, содержащие 2, 3, 4 и более микроядра, отсутствующие в контрольных группах детей. Как известно, микроядра формируются из фрагментов хромосом и в меньшей степени из отставших в анафазе целых хромосом, которые не включились в ядра дочерних клеток. Выявлено, что в течение семилетнего мониторинга у детей, проживающих на территориях с большей плотностью загрязнения, количество лимфоцитов с микроядрами достоверно больше, особенно у детей 7-15 лет, родившихся до аварии на ЧАЭС. Поэтому в указанных группах тест определения микроядер в нестимулированных лимфоцитах периферической крови взят как эквивалент оценки хромосомных аберраций, индуцированных комплексом радиоэкологических факторов среды на кроветворные клетки детей, длительно проживающих на территориях, загрязненных радионуклидами. Пример выполнения. Обследована группа детей, проживающих в Гомельской области на территориях с плотностью загрязнения от 5 до 15 Ки/км 2 и от 15 до 45 Ки/км 2, у которых выявлены лимфоциты с микроядрами в мазке периферической крови, взятой из пальца и окрашенной по Романовскому. Маша Г. 10 лет - цитогенетический анализ мазков периферической крови позволил выявить 3,10,6 моноядерных лимфоцитов с одним микроядром и 1,10,2 моноядерных лимфоцитов с двумя микроядрами 1,10,2 двуядерных лимфоцитов с одним микроядром и 1,10,2 трехъядерных лимфоцитов с одним микроядром. Заключение радиационно-индуцированное цитогенетическое нарушение. Миша Т. 12 лет - 8,01,4 моноядерных лимфоцитов с одним микроядром и 1,10,3 моноядерных лимфоцитов с двумя микроядрами 1,00,2 двуядерных лимфоцитов с одним микроядром и 0,10,02 трехъядерных лимфоцитов с одним микроядром. Заключение радиационно-индуцированное цитогенетическое нарушение. Света В. 5 лет - 2,20,4 моноядерных лимфоцитов с одним микроядром 2,00,4 двуядерных лимфоцитов с одним микроядром. Заключение радиационно-индуцированное цитогенетическое нарушение. Денис Г. 1 год - 1,70,3 моноядерных лимфоцитов с одним микроядром 1,20,2 двуядерных лимфоцитов с одним микроядром. Заключение радиационно-индуцированное цитогенетическое нарушение. Игорь Н. 7 лет - 10,02,4 моноядерных лимфоцитов с одним микроядром 5,11,0 моноядерных лимфоцитов с двумя микроядрами 1,60,3 моноядерных лимфоцитов с тремя микроядрами 6,51,1 двуядерных лимфоцитов с одним микроядром 2,10,5 двуядерных лимфоцитов с двумя микроядрами 1,60,3 двуядерных лимфоцитов с тремя микроядрами 1,50,3 трехъядерных лимфоцитов с одним микроядром. Заключение радиационно-индуцированное цитогенетическое нарушение. Для подтверждения инкорпорации организма радионуклидами у этих детей был проведен спектральный анализ крови и мочи, который выявил наличие искусственных радионуклидов в организме в крови - цезий 144, цезий-137, цирконий-95, сурьма-125, серебро-110, активность которой составила 3,8 х 10-9-4,8 х 10-8 /л. Суммарная радиоактивность у этих детей, определявшаяся с помощью счетчика СРП, составила от 120 до 3060 мкР/ч и по цезию-137, с помощью счетчика СИЧ - от 0,01 до 1,66 мкК/организм. В моче, кроме перечисленных радиоизотопов, обнаружены йод-125, углерод-14, рутений-106, церий-144, цинк-65. В данном случае выявление микроядер обусловлено радиационным воздействием, возникновение которых связано с цитогенетическим нарушением. Следовательно, имеется радиационно-индуцированное поражение лимфоцитов периферической крови, в виду нарушения хромосомного материала ядра. Таким образом, по сравнению с прототипом, заявляемый способ обладает следующим преимуществом позволяет быстро выявлять микроядра как один из маркеров цитогенетических нарушений, связанных с радиационным фактором. 4307 1 Источники информации 1. Пилинская М.А. Дыбский С.С. Дыбская Е.Б. Влияние радиоэкологической обстановки на частоту хромосомных аберраций у детей, проживающих в районах выпадения радиоактивных осадков после аварии на ЧАЭС/ В кн. Радиобиологические последствия аварии на ЧАЭС. - Минск, 1991. - С. 103. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66.