Средство для профилактики и лечения диссомний и десинхронозов

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ ДИССОМНИЙ И ДЕСИНХРОНОЗОВ(71) Заявитель Государственное учреждение Научнопроизводственный центр Институт фармакологии и биохимии Национальной академии наук Беларуси(72) Авторы Кравченко Елена Валериевна Дубовик Борис Валентинович Ольгомец Любовь Михайловна Петров Петр Тимофеевич Романовский Дмитрий Иосифович(73) Патентообладатель Государственное учреждение Научно-производственный центр Институт фармакологии и биохимии Национальной академии наук Беларуси(57) 1. Применение пролил-лейцина в качестве средства для профилактики или лечения диссомний и десинхронозов, вызванных психическими расстройствами, переутомлением,гипертонией или возрастными изменениями, и связанных с ними нарушений. 2. Фармацевтическая композиция для профилактики или лечения диссомний и десинхронозов, вызванных психическими расстройствами, переутомлением, гипертонией или возрастными изменениями, и связанных с ними нарушений, содержащая пролил-лейцин в эффективном количестве и фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества. 3. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что предназначена для приема внутрь и выполнена в форме таблетки, капсулы, гранул или порошка. 4. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что предназначена для парентерального введения и выполнена в форме раствора, лиофилизированного порошка,стерильной сухой рассыпки или назальных капель. 5. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме таблетки и имеет следующий состав, г пролил-лейцин 0,0001-1,0 целлюлоза микрокристаллическая 0,015-0,450 лактоза 0,010-0,500 крахмал 0,010-0,450 14451 1 2011.06.30 аэросил 0,001-0,010 поливинилпирролидон 0,004-0,200 магния стеарат 0,0005-0,030. 6. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме твердой желатиновой капсулы, содержащей гранулы следующего состава, г пролил-лейцин 0,0001-1,0 целлюлоза микрокристаллическая 0,015-0,450 лактоза 0,010-0,500 крахмал 0,010-0,450 аэросил 0,001-0,010 поливинилпирролидон 0,004-0,200 магния стеарат 0,0005-0,030. 7. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме мягкой желатиновой капсулы, содержащей следующий состав, г пролил-лейцин 0,0001-1,0 масло растительное 0,001-1,0 лецитин очищенный 0,001-1,0 воск пчелиный 0,001-1,0. 8. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме гранул для приема внутрь следующего состава, г пролил-лейцин 0,0001-1,0 целлюлоза микрокристаллическая 0,015-0,450 лактоза 0,010-0,500 крахмал 0,010-0,450 аэросил 0,001-0,010 поливинилпирролидон 0,004-0,200 магния стеарат 0,0005-0,030. 9. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме порошка для приема внутрь и имеет следующий состав, г пролил-лейцин 0,0001-1,0 лактоза 0,010-5,0. 10. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме раствора для инъекций и имеет следующий состав пролил-лейцин, г 0,0001-1,0-маннит, г 0,005-50,0 вода для инъекций, мл до 1-1000. 11. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме лиофилизированного порошка для инъекций и имеет следующий состав, г пролил-лейцин 0,0001-1,0-маннит 0,005-50,0. 12. Фармацевтическая композиция по п. 2, отличающаяся тем, что выполнена в форме назальных капель и имеет следующий состав, г пролил-лейцин 0,0001-1,0 нипагин 0,005-5,0 вода дистиллированная 1,0-1000,0. Изобретение относится к области медицины (фармакологии, психиатрии, кардиологии) и фармацевтической промышленности и может быть использовано для профилактики и лечения диссомний и десинхронозов, вызванных психическими расстройствами, переутомлением, гипертонией или возрастными изменениями, и связанных с ними нарушений. 2 14451 1 2011.06.30 Использование композиции позволяет повысить эффективность профилактики и лечения десинхронозов, улучшить нарушенные диссомнией функции жизненно важных систем организма, в т.ч. нервной системы и, таким образом, улучшить качество жизни и социальную адаптацию у лиц, страдающих от вышеназванных нарушений. Терапевтически эффективное количество обозначает количество, которое способно обеспечить эффективную профилактику и лечение названных нарушений. Биологические ритмы, выполняющие адаптивную функцию, приурочивают жизнедеятельность к наиболее благоприятному времени суток, обеспечивают четкую смену процессов сон/бодрствование. Стрессирование, невротические состояния, наряду с психическими,эндокринными и соматическими заболеваниями, неправильным образом жизни, сменой часовых поясов, вызывают дезорганизацию биологических ритмов. Сбои биоритмов, недосыпание или низкое качество сна ведут к резким нарушениям со стороны нервной, сердечно-сосудистой, пищеварительной и других систем организма. Медицинское решение проблемы является наиболее эффективным методом помощи больным с нарушениями биологических ритмов активности. Ряд фармакологических препаратов обладают выраженным влиянием в отношении собственных ритмов активности организма. Описано нормализующее действие бензодиазепиновых транквилизаторов на эмоциональный статус и на околосуточные ритмы двигательной активности (ДА). Эти средства влияют на мозговые структуры, заинтересованные в организации эмоционального поведения и биологических ритмов, синхронизируют колебательные процессы в организме, успешно вмешиваются во временную динамику поведенческих и эндокринных ритмов, расстроенных под влиянием стресса. Диазепам (, Болгария, таблетки по 10 мг) (прототип) обладает анксиолитическим, противосудорожным, снотворным, седативным действием. Диазепам ослабляет нарушения биологических ритмов ДА, вызванные стрессом 1. Обладает выраженным побочным действием со стороны нервной системы и органов чувств (ухудшение памяти, сонливость, снижение быстроты реакций и концентрации внимания, амнезия), со стороны сердечно-сосудистой системы и крови, органов желудочно-кишечного тракта и др. Вызывает развитие привыкания, синдрома отмены, синдрома последействия (мышечная слабость, снижение работоспособности) 2. Относится к числу опасных психотропных веществ, требующих специального контроля за их хранением, отпуском и применением. Должен использоваться только под наблюдением врача 2. Диазепам противопоказан при целом ряде заболеваний, в т.ч. при острых заболеваниях печени и почек, выраженной печеночной недостаточности, тяжелой миастении,наркотической или алкогольной зависимости, выраженной дыхательной недостаточности и др. 2. В период лечения диазепамом недопустимо употребление алкогольных напитков 2. Не рекомендуется применять его водителям транспортных средств и людям, деятельность которых требует быстрой психической или физической реакции, а также связана с повышенной концентрацией внимания. Тофизопам - дневной транквилизатор, оказывает анксиолитическое, антистрессорное, психостимулирующее действие. Тофизопам (10 мг/кг) предупреждает вызванные стрессом хронобиологические нарушения 3. Вместе с тем, как и другие бензодиазепины,он оказывает отрицательное влияние на качество сна 2, подавляя медленно-волновой сон. Тофизопам 2 относится к психотропным средствам, оказывает выраженные побочные действия на нервную, дыхательную системы. Тофизопам вызывает синдром отмены,его применение требует наблюдения врача. Прием тофизопама противопоказан при дыхательной недостаточности, ряде психических нарушений и др., он запрещен к применению при активных видах деятельности, требующих концентрации внимания и быстрой реакции 2. Многочисленные исследования последних десятилетий показали позитивное влияние мелатонина на эмоциональную сферу и его ключевую роль в контроле биоритмов. Известно лекарственное средство Мелаксен ( ., США) 2, которое в качестве 3 14451 1 2011.06.30 действующего вещества включает мелатонин и применяется при бессоннице, утомляемости, депрессивном синдроме, десинхронозе. Вместе с тем период полувыведения мелатонина достаточно короткий, что объясняется его быстрым метаболизмом. Препарат противопоказан к применению при хронической почечной недостаточности, аллергических, аутоиммунных заболеваниях, лимфогранулематозе, лейкозе, лимфоме, миеломе,эпилепсии, сахарном диабете и др. Мелатонин вызывает ряд побочных действий, таких как головная боль, тошнота, рвота, диарея, аллергические реакции. Имеются ограничения к его совместному применению со средствами, тормозящими активность центральной нервной системы (ЦНС), с бета-адреноблокаторами (применяемыми при заболеваниях сердечно-сосудистой системы), с нестероидными противовоспалительными средствами ацетилсалициловой кислотой, ибупрофеном и др. Препарат несовместим с ингибиторами моноаминооксидазы (применяемыми в лечении депрессии), глюкокортикоидами, циклоспорином. Мелатонин не рекомендуется применять во время работы водителям транспортных средств и людям, профессия которых связана с повышенной концентрацией внимания 2. В последние десятилетия в клинической практике используют лекарственные средства пептидной природы. Возрос интерес к применению олигопептидов как возможных нейротропных средств, что обусловлено их нейротрансмиттерной, модулирующей и регуляторной активностью в отношении ЦНС. Известны дипептиды, родственные по химической структуре заявляемому соединению, улучшающие состояние больных с нарушениями функций головного мозга. К их числу относятся производные пролин-тирозина, обладающие нейролептической и антидепрессантной активностью и положительным мнемотропным действием, как, например, -капроилпролилтирозин 4. Кроме того, известны-ацилпролилдипептиды, применяющиеся для лечения нарушений умственных способностей, вызванных мозговой травмой, старением, старческим слабоумием, для лечения умственно отсталых детей, ожирения, нарушений ЦНС в результате химической интоксикации, преимущественно вызванной сатурнизмом, серповидно-клеточной анемии, синдрома отмены бензодиазепина, который проявляется в виде агрессивности, тревожности и припадков, а также лечения алкогольной зависимости 5. Один из -ацилпролилдипептидов этиловый эфир -фенилацетилпролилглицина - предложен для применения при вышеназванных расстройствах в виде таблеток 5. -ацилпролилдипептиды, в том числе этиловый эфир -фенилацетилпролилглицина, относятся к малотоксичным соединениям 5. Однако отсутствуют сведения об активности производных пролин-тирозина и ацилпролилдипептидов в отношении биологических ритмов активности (как в норме, так и при их нарушениях). Пролил-лейцин (формула , -, молекулярная формула -112023) имеет молекулярную массу 228.29, регистрационный номер соединения по- 52899-07-7. Ряд фармакологических свойств пролил-лейцина, применяемого до настоящего времени в качестве химического реактива, описан в научной литературе. Известны данные, подтверждающие у заявляемого соединения свойства ингибитора ангиотензинпревращающего фермента (ИАПФ) 6. Соединения этого класса широко используются для лечения артериальной гипертензии (АГ). Имеются данные литературы, посвященные изучению механизмов нейрофармакологического действия заявляемого соединения 7-9, однако не даны рекомендации по его использованию. Замещенный пептид -карбобензокси-пролил-лейцин предложен как средство для ингибирования развития толерантности и зависи 4 14451 1 2011.06.30 мости от морфина 10. Хронофармакологические свойства пролил-лейцина, как и содержащие его фармацевтические композиции, способствующие регуляции биологических ритмов и улучшающие организацию процессов сон/бодрствование у животных и человека, не описаны. Задачей настоящего изобретения является выявление у дипептида пролил-лейцина нового, полезного, ранее неописанного свойства - способности влиять на биологические ритмы активности и на последствия диссомнии, а также направленная разработка лекарственного препарата, содержащего пролил-лейцин и эксципиенты, предназначенного для профилактики и лечения десинхроноза, для регуляции процессов сон-бодрствование,для предотвращения когнитивных и иных нарушений вследствие недосыпания или низкого качества сна. Поставленная задача решается тем, что в направленных фармакологических экспериментах по стандартным методикам выявлена эффективность пролил-лейцина,применяемого в качестве средства для профилактики и лечения нарушений биологических ритмов активности (включая диссомнии, десинхронозы, вызванные психическими расстройствами и переутомлением, гипертонией, возрастными изменениями), а также расстройств, вызванных нарушениями сна, и связанных с ними дисфункций жизненно важных систем организма, в т.ч. центральной нервной системы разработана фармацевтическая композиция, предназначенная для оптимизации биологических ритмов активности, регуляции процессов сон-бодрствование, профилактики и лечения нарушений, вызванных диссомнией, содержащая пролил-лейцин в эффективном количестве, а также вспомогательные вещества для приготовления готовой лекарственной формы, описанные в фармакопеях и разрешенные к медицинскому применению. Техническим результатом, достигаемым при реализации изобретения, является обнаружение способности у известного дипептида нормализовать биологические ритмы активности, улучшать состояние организма после вынужденной бессонницы, выявление возможности его использования в низких дозах в качестве средства для профилактики и лечения нарушений биоритмов и последствий диссомнии, и получение лекарственной формы, характеризующейся низкой токсичностью, обеспечивающей точность дозирования и удобство применения. Фармацевтическая композиция содержит в качестве основного действующего вещества пролил-лейцин в диапазоне доз 0,0001-1,0 г (предпочтительно - 0,0025-0,05 г). Предпочтительно, чтобы обе аминокислоты дипептида являлись -формами. Предпочтительно введение пролил-лейцина в виде пероральной или инъекционной лекарственной формы,поскольку при этих способах введения обеспечивается наибольшая точность дозирования активного вещества. К числу пероральных лекарственных форм, содержащих пролиллейцин, могут относиться таблетки, капсулы (в т.ч. мягкие и твердые), порошки и гранулы для орального применения. Инъекционной лекарственной формой, содержащей пролиллейцин, может быть раствор для инъекций (инфузий), или лиофилизированный порошок для приготовления раствора для инъекций (инфузий), или стерильная сухая рассыпка для приготовления раствора для инъекций (инфузий). Среди других возможных лекарственных форм на основе пролил-лейцина предпочтительны назальные капли, обеспечивающие малоинвазивное вмешательство. При этом фармацевтическая композиция может содержать одно или несколько разрешенных к медицинскому применению вспомогательных веществ (целевых добавок), способных улучшить фармацевтические характеристики заявляемой композиции. К числу предпочтительных вспомогательных веществ относятся целлюлоза микрокристаллическая, лактоза (наиболее предпочтительно - в виде моногидрата), крахмал (в т.ч. модицифированный), аэросил, растительные масла, лецитин, поливинилпирролидон, магния стеарат, воск пчелиный, -маннит. Как и диазепам (прототип), заявляемая композиция нормализует нарушенные стрессом биологические ритмы активности (примеры 1-3). 14451 1 2011.06.30 В отличие от диазепама, заявляемая композиция не обладает выраженным побочным действием в отношении нервной системы и органов чувств (ухудшение памяти, сонливость, снижение быстроты реакций, амнезия), а напротив, значимо улучшает память, обладает определенным активирующим влиянием (примеры 4-9). В отличие от диазепама и тофизопама заявляемая композиция не вызывает развития привыкания, синдрома отмены(пример 10). В отличие от диазепама и тофизопама заявляемая композиция повышает (а не снижает) уровень внимания и способность к быстрому принятию решения в экстремальной ситуации (примеры 4, 5), поэтому может применяться водителям транспортных средств и людям, деятельность которых требует быстрой психической или физической реакции, а также связана с повышенной концентрацией внимания. Заявляемая композиция отличается от диазепама, тофизопама и мелатонина тем, что она обладает свойствами ингибитора АПФ (это может обеспечить дополнительный антигипертензивный и другие лечебные эффекты, присущие этому классу лекарственных средств, у лиц с патологией сердечно-сосудистой системы, сопровождающейся десинхронозом и нарушениями сна). Действующее вещество заявляемой композиции отличается от тофизопама высокой активностью (уровень эффективных доз для лечения десинхроноза в 20 раз ниже). Пример 1. Изучали эффективность пролил-лейцина (здесь и далее использована субстанция производства фирмы -, США, 1130-1) в отношении нарушений циркадианных(околосуточных) ритмов активности, вызванных у линейных спонтанно гипертензивных крыс линиистрессом высокой интенсивности (повторное электроболевое воздействие в условиях высокой неопределенности среды - 2-х часовое прерывистое электрокожное раздражение лап силой тока 0,4 мА через решетку пола, 20 сеансов, 1 сеанс/сут) модель десинхроноза, вызванного сильным хроническим стрессом, у гипертоников. Введение плацебо или пролил-лейцина осуществляли внутрибрюшинно, за 30 мин до электроболевого воздействия (20 введений) последнее введение осуществляли за 30 мин до записи хронограммы. Устранение стресса новизны достигалось предварительным повторным ознакомлением с камерами актометра продолжительностью не менее 1 часа каждое. Опыты проводили на половозрелых аутбредных крысах-,использующихся для моделирования нарушений, связанных с гипертензией (возраст 2-4 месяца, средняя масса 180-350 г.). Крысам группы 1 ничего не применяли (интактные),животным группы 2 вводили плацебо (здесь и далее вода дистиллированная), особям группы 3 инъецировали пролил-лейцин в дозе 0,5 мг/кг. Здесь и ниже при обработке полученных результатов посредством компьютерной программы методом косинор-анализа определяли акрофазу, т.е. астрономическое время максимума функциидля массива хронограмм. У интактных спонтанно гипертензивных крыс(группа 1) акрофаза вертикальной двигательной активности (ВДА) приходится на ночные и утренние часы, что не соответствует норме (у животных без патологии максимальная подвижность отмечается в период после наступления темноты - 1900-2100) и может отражать отмечаемые в клинике нарушения биоритмов у лиц с патологией сердечно-сосудистой системы 11. Применение сильного стресса крысам группы 2 приводит к резкому смещению акрофазы ВДА относительно интактного контроля (на 2 часа 44 мин правее), т.е. к усугублению десинхроноза. Это хорошо согласуется с данными о смещении у стрессированных животных акрофазы на ранние утренние часы 1. У крыс группы 3, которым применяли стрессорное воздействие аналогичной выраженности на фоне длительного введения пролил-лейцина, в отличие от животных групп 1 и 2, акрофаза ВДА приходилась на вечерние часы (1949). На фиг. 1 показано нормализующее влияние пролил-лейцина на кривую биоритмов ВДА (усредненные значения) у половозрелых спонтанно гипертензивных крыс-самцов, нарушенных хроническим электроболевым стрессом. У стрессированных крыс группы 2 отмечается резкое возрастание активности в 740 (показано на фиг. 1 звездочкой) - в 6 14451 1 2011.06.30 светлый период эксперимента, что является четким указанием на дизритмию, поскольку в норме подвижность крыс в светлое время суток низкая. Различия между группами 1 и 2 в этот период являются статистически достоверными (0,05, критерий КрускалаУоллиса). Кроме того, у стрессированных крыс резко повышается активность в период 0100-0400 (показано на фиг. 1 звездочкой), что тоже указывает на десинхроноз - в норме в это время отмечается спад активности. В случае применения пролил-лейцина патологически повышенная подвижность в указанные периоды времени не наблюдается, статистически значимые различия с интактными животными отсутствуют - фиг. 1. Достоверное снижение в ночные часы подвижности крыс относительно контроля на фоне пролиллейцина соответствует физиологичному уменьшению подвижности после подъема, сопровождающего наступление темноты 3. Приведенные данные указывают на способность пролил-лейцина предотвращать нарушения биоритмов, вызванные продолжительным сильным стрессом (например, хроническим болевым синдромом) у субъектов с артериальной гипертензией (АГ). Пример 2. Изучали эффективность пролил-лейцина в отношении нарушений циркадианных ритмов у спонтанно гипертензивных крыс линии , вызванных стрессом низкой интенсивности (инъекционный стресс, спровоцированный внутрибрюшинным введением образцов - модель десинхроноза, вызванного слабым хроническим стрессом у гипертоников). Опыты проводили на половозрелых аутбредных крысах-самцах(возраст - 2-4 месяца, средняя масса 180-350 г.). Крысам группы 1 ничего не применяли (интактные),животным группы 2 вводили плацебо (здесь и далее - вода дистиллированная), особям группы 3 инъецировали пролил-лейцин в дозе 0,5 мг/кг. Образцы вводили внутрибрюшинно, за 30 мин до высадки в камеры актометра (20 введений). Записи хронограмм предшествовало повторное ознакомление с камерами актометра продолжительностью не менее 1 часа каждое (для устранения стресса новизны). В качестве базисного критерия, характеризующего подвижность животных, использовали показатель ВДА. Обеспечение фиксированной продолжительности и смены дня ночи (07.00-19.00 - день, 19.00-07.00 - ночь), регистрация уровня ВДА и обработка хронограммы осуществлялась, как описано в примере 1. Известно, что манипуляции с животными и инвазивная процедура введения (инъекционный стресс) нарушают биоритмы подвижности грызунов 1, вызывая миграцию акрофазы. У интактных спонтанно гипертензивных крыс(группа 1) акрофаза ВДА сдвинута на более поздние часы в сравнении с нормой (у животных без патологии максимальная подвижность приходится на 19.0021.00), что хорошо согласуется с отмечаемыми в клинике нарушениями биоритмов у лиц с патологией сердечно-сосудистой системы 11. У крыс группы 2 инъекционный стресс приводит к миграции акрофазы ВДА (максимум функцииприходится на 1015), что хорошо согласуется с данными о смещении у стрессированных животных акрофазы на утренние часы 1 и свидетельствует об усугублении десинхроноза. У крыс группы 3, которым применяли стрессорное воздействие аналогичной выраженности на фоне длительного введения пролил-лейцина, в отличие от животных групп 1 и 2, акрофаза ВДА отмечается в первый-второй час после высадки(1612). Это может отражать активацию дипептидом исследовательско-ориентировочной реакции, вызванной помещением крысы в камеру актометра, при этом отсутствует патологически повышенная активность в поздние ночные и в утренние часы. На фиг. 2 приведены хронограммы ВДА животных групп 1-3 - представлены данные о влиянии внутрибрюшинного введения пролил-лейцина на ВДА у половозрелых спонтанно гипертензивных крыс-самцов , нарушенные стрессом умеренной интенсивности(инъекционный стресс). Статистически значимые различия с контролем отмечены у спонтанно гипертензивных стрессированных крыс, получавших растворитель, в 4-х точках хронограммы. Пик активности у этих животных смещен на 1040 (помечено звездоч 7 14451 1 2011.06.30 кой) - на светлый период эксперимента, что является четким маркером сбоя биоритмов,поскольку в норме подвижность крыс в светлое время суток является минимальной. Применение пролил-лейцина препятствует развитию десинхроноза, что проявляется отсутствием статистически значимых различий с интактными животными - фиг. 2. Выраженное повышение ВДА у крыс группы 3 отмечено в 1640 (исследовательско-ориентировочная реакция, вызванная высадкой в бокс актометра), а также - в 2040 (возрастание подвижности, совпадающее по времени с нормальными ритмами активности). Приведенные данные свидетельствуют о способности пролил-лейцина предотвращать нарушения биоритмов, вызванные продолжительным низкоинтенсивным стрессом у субъектов с АГ. Пример 3. Изучали эффективность пролил-лейцина в отношении нарушений циркадианных ритмов мышейпосле острого стресса (6-минутное подвешивание за хвост -, ) - модель десинхроноза, вызванного однократным сильным стрессирующим воздействием. Опыты проводили на половозрелых аутбредных мышах-самцах(возраст - 3-4 месяца, масса тела - 30-40 г.). Актометрию осуществляли в условиях размещения мышей поодиночке в камерах размером 322219 см с подстилкой, кормушкой,поилкой (условия, имитирующие домашнюю клетку, соответствующие низкому уровню опасности). За 120 мин до помещения в камеру актометра осуществляли процедуру подвешивания за хвост животных всех групп, исключая особей группы 1, которые, кроме того,не подвергались стрессирующей процедуре внутрибрюшинного введения. Мышам группы 2 вводили плацебо, животным групп 3-5 - пролил-лейцин в дозах 0,1 мг/кг, 0,5 мг/кг и 5,0 мг/кг, внутрибрюшинно, на протяжении 4-х последовательных дней, последний раз непосредственно перед стрессированием в . В качестве базисного критерия, характеризующего подвижность животных, использовали показатель ВДА. Обеспечение фиксированной продолжительности и смены дня ночи (07.00-19.00 - день, 19.00-07.00 - ночь), регистрация уровня ВДА и обработка хронограммы осуществлялась, как описано в примере 1. Известно, что в норме исследовательско-ориентировочная активность первых часов сменяется снижением активности, с последующим пиковым возрастанием ВДА в 1900-2100 и повторным продолжительным уменьшением ВДА. Повышение активности в поздние ночные, в ранние утренние часы (0200-0600) или в светлое время (0700-1900) является признаком десинхроноза 1. В связи с этим отсутствие значимого снижения активности в ночные, утренние и дневные часы могут расцениваться как дизритмия. Для каждой группы определяли статистическую значимость различий ВДА в каждый из часов актометрии в сравнении с исходным уровнем ВДА (1-й час актометрии) по критерию Фридмана. Акрофаза циркадианного ритма ВДА нестрессированных мышей приходилась на вечерние часы (группа 1 ВДА равна 1947). Стресс, вызванный подвешиванием за хвост,вызывал смещение акрофазы на 1 час вправо (группа 2 ВДА - 2046), тогда как заявляемое соединение в дозе 0,5 мг/кг способствовало нормализации акрофазы ритмической активности (группа 4 ВДА - 1923). При введении пролил-лейцина в дозах 0,1 и 5,0 мг/кг отмечалось еще более выраженное смещение акрофазы влево (группа 3 ВДА - 1817,группа 5 ВДА - 1813). У нестрессированных животных на протяжении 75 от общей продолжительности актометрии (200-1300, 1600-1800, 2000 - 2200) отмечалось достоверное снижение ВДА в сравнении с исходным уровнем, преимущественно в ночные, утренние и дневные часы табл. 1. У особей группы 2 стресс, сопровождавшийся введением плацебо, вызывал резкие сдвиги цикла сон-бодрствование, что проявлялось отсутствием статистически значимого снижения подвижности на протяжении большей части суток только 16,7 времени животные провели в состоянии покоя - табл. 1. Введение пролил-лейцина вело к росту продолжительности периода с достоверно более низкой активностью, чем исходно 8 14451 1 2011.06.30 зарегистрированная, до 29,2- 50,0 , т.е. приближение его к уровню контроля - табл. 1. Предотвращение миграции акрофазы вправо и стабилизация кривой суточной ВДА со сглаживанием утренней и дневной (патологически повышенной на фоне стресса) подвижности свидетельствует о способности пролил-лейцина нормализовать биоритмы, нарушенные острым стрессом. Пример 4. Изучали эффективность пролил-лейцина в отношении нарушений адапивного поведения и высших интегративных функций мозга у спонтанно гипертензивных крыс линии, вызванных депривацией (лишением) парадоксальной фазы сна (ДПФС). Эта модель соответствует нарушениям адаптации и мыслительных способностей у лиц с АГ на фоне недосыпания или расстройств сна, которые, как правило, сопутствуют АГ 11. Адаптивное поведение крыс исследовали с помощью теста экстраполяционного избавления 12. Крыс поодиночке помещали внутрь цилиндра, погруженного вертикально в воду на глубину 1-2,5 см. Задача животного состояла в том, чтобы найти выход из стрессирующей ситуации, поднырнув под нижний край цилиндра. Наблюдение вели на протяжении 120 с регистрировали латентный период первой попытки избавления (ЛП 1 поп) число безуспешных попыток избавления время подныривания под край цилиндра(ЛПподн) число животных, быстро (не более чем за 40 с) решивших задачу избавления. Метод ДПФС по. (1964) заключается в помещении крыс на малые площадки диаметром 6-6,5 см, окруженные водой, на которых животные могут свободно сидеть. Во время бодрствования, дремоты и медленноволнового сна у крыс сохраняется напряжение мышц, что позволяет животным удерживаться на площадках. Во время парадоксальной фазы сна мышцы расслабляются, и животные падают в воду, таким образом достигается избирательная ДПФС. Показано, что этим способом достигается в среднем 85 ДПФС, в то время как медленноволновый сон уменьшается лишь на 40-50 . В условиях этой модели в результате иммобилизации, изоляции, падений в воду и охлаждения у животного возникает сильный стресс, которому сопутствуют выраженные поведенческие нарушения. Традиционно методика используется как модель диссомнии при невротических расстройствах различной тяжести. Опыты проводили на половозрелых инбредных спонтанно гипертензивных крысахсамцах(возраст - 2 месяца, масса тела - 210,16,6 г.). Оценку адаптивного поведения в ТЭИ проводили через 40 мин после ДПФС. Крысам группы 1 ничего не вводили (интактный контроль), они не подвергались ДПФС накануне ТЭИ. Крысам группы 2 применяли плацебо, крысам группы 3 - пролил-лейцин (0,5 мг/кг). Введение осуществляли внутрибрюшинно, однократно, за 30-40 мин до тестирования в ТЭИ. Пролил-лейцин активировал поведение животных, что проявилось снижением завышенного при ДПФС показателя ЛП 1 поп до уровня контроля - табл. 2. У крыс группы 2(введение плацебо после ДПФС) число безуспешных попыток было значимо (0,05, критерий Крускала-Уоллиса) выше в сравнении с интактным контролем применение заявляемого соединения крысам группы 3 в те же сроки препятствовало достоверному возрастанию этого показателя - табл. 2. Латентный период подныривания (ЛПподн.) у крыс группы 1 был достоверно ниже времени решения экстраполяционной задачи крысами группы 2 (ДПФС, плацебо), однако значимо не отличался от ЛПподн У крыс группы 3(ДПФС, пролил-лейцин). Число животных, сумевших поднырнуть под край цилиндра не более чем за 40 сек, в группах сравнения составило в группе 1-15 из 15, в группе 2-5 из 9,в группе 3-6 из 8 различия с интактным контролем были достоверны только для особей группы 2 (0,012, точный критерий Фишера) - табл. 2. Таким образом, ДПФС приводит к достоверным нарушениям экстраполяционного поведения спонтанно гипертензивных крысв сравнении с интактным контролем. Применение после ДПФС пролил-лейцина предотвращает отрицательное влияние нарушений сна - статистически значимые изменения в сравнении с контрольной группой отсутствуют. 9 14451 1 2011.06.30 Это говорит о способности у заявляемого средства устранять нарушения адаптивного поведения и способности к экстраполяции у субъектов с АГ на фоне нарушений сна или недосыпания. Полученные данные указывают на существенные преимущества заявляемого дипептида в сравнении с прототипом (диазепамом), вызывающим ухудшение памяти,сонливость, снижение быстроты реакций и концентрации внимания, амнезию 2. Пример 5. Изучали влияние пролил-лейцина на процессы обучения и памяти у спонтанно гипертензивных крыс линии , а именно на воспроизведение навыка избавления из стрессирующей ситуации, выработанного на фоне ДПФС. Быстрое повторное решение задачи избавления объясняется хорошим запоминанием и последующим использованием информации о рациональном поведении в экстремальной ситуации. ДПФС снижает способность к приобретению информации и нарушает мнестические функции при выработке навыка подныривания (антероградная амнезия). Описываемый эксперимент позволяет моделировать вызванные лишением сна нарушения памяти и обучаемости при повторном решении задачи субъектами с АГ. Выработку навыка подныривания в ТЭИ (см. Пример 4) осуществляли через 40 мин после ДПФС (пример 4). После подныривания животное должно было выбраться на сетчатый трап, прикрепленный у внутреннего края бассейна. Спустя неделю повторно оценивали поведение крыс при решении ими той же задачи. В эксперименте использовали половозрелых инбредных спонтанно гипертензивных крыс-самцов(возраст - 2 месяца, масса тела - 210,16,6 г.). Крысы группы 1 не подвергались ДПФС накануне 1-го тестирования в ТЭИ, им ничего не вводили как при выработке, так и при воспроизведении навыка избавления из стресс-ситуации (контроль). Животные группы 2 и группы 3 первый раз решали экстраполяционнную задачу на фоне 24-часовой ДПФС. Крысам группы 2 применяли плацебо,крысам группы 3 - пролил-лейцин (0,5 мг/кг). Введение осуществляли внутрибрюшинно,5-кратно, в режиме 5 дней в неделю, 1-е и 5-е введение проводили за 30-40 мин до выработки и воспроизведения навыка избавления. Определяли число животных (в процентах от общего числа в группе) поднырнувших менее чем за 10 с и/или вышедших на сетку менее чем за 30 с. На фиг. 3. представлены данные об улучшении пролил-лейцином способности к повторному решению задачи избавления. При втором предъявлении экспериментальной задачи выявлены существенные различия в поведении животных, у которых навык подныривания вырабатывали без ДПФС (группа 1) и крыс, у которых лишение сна сочеталось с введением плацебо (группа 2). Так, 85,7 особей группы 1 оказались способны поднырнуть менее чем за 10 с и выйти на сетку менее чем за 30 с с момента помещения их в цилиндр ЛПподн У них составил 8,02,5 сек. Среди животных группы 2 не было особей,поднырнувших менее чем за 10 с (0 ), различия с интактным контролем статистически достоверны,0,012, точный критерий Фишера - фиг. 3. Число животных, вышедших на сетчатый трап менее чем за 30 с с момента помещения их в цилиндр, составило 33,3 ,т.е. в 2,6 раз меньше, чем в группе 1. Время подныривания у спонтанно гипертензивных крыс группы 2 было равно 19,85,1 с (0,05, критерий Крускала-Уоллиса). Это говорит о статистически значимом нарушении в условиях используемой модельной патологии высших интегративных функций мозга. У крыс, получавших пролил-лейцин, соответствующий дефицит когнитивных функций не выявлялся. 60 особей группы 1 оказались способны поднырнуть менее чем за 10 с и выйти на сетку менее чем за 30 с от начала тестирования. ЛПподн у крыс группы 3 составил 10,23,1 с, достоверные различия с интактными животными отсутствовали. Таким образом, пролил-лейцин предотвращает нарушения памяти и способности к обучению при повторном решении задачи субъектами с АГ на фоне нарушений сна или недосыпания. Полученные данные указывают на существенные преимущества заявляемо 10 14451 1 2011.06.30 го дипептида в сравнении с прототипом (диазепамом), вызывающим ухудшение памяти,сонливость, снижение быстроты реакций и концентрации внимания, амнезию 2. Пример 6. Проводили оценку влияния пролил-лейцина на нарушения неассоциативного обучения (габитуация) у спонтанно гипертензивных крыс линии , вызванные ДПФС - модель когнитивной патологии (расстройства направленного внимания и памяти на текущие события) при диссомнии у лиц с АГ. Опыты проводили на половозрелых спонтанно гипертензивных инбредных крысахсамцах(возраст - 2 месяца, масса тела - 210,16,6 г.). Крыс помещали в камеры актометра(Италия) поодиночке, регистрировали показатели горизонтальной двигательной активности (ГДА) за 3 минуты наблюдения. Крысы группы 1 (контроль) не подвергались ДПФС накануне габитуации, им ничего не вводили. У крыс группы 2 и 3 оценку подвижности проводили через 45 мин после ДПФС. Животным группы 2 вводили плацебо, особям группы 3 - пролил-лейцин (0,5 мг/кг), внутрибрюшинно, однократно, за 45 мин до тестирования способности к неассоциативному обучению. У животных без нарушений сна привыкание к окружающей обстановке проявляется постепенным снижением подвижности в горизонтальной плоскости (ГДА). Крысы помнят, что уже обследовали бокс актометра в 1-ю минуту пребывания в нем и совершают меньше движений при последующем обследовании установки. Это проявляется уменьшением ГДА, снижением разницы между показателями ГДА в 1-ю (ДА) и последующие(ДА) мин регистрации и уменьшением коэффициента привыкания , определяемого по формуле ДА,(1) ДА 1 где ДА 1 - усредненные значения ГДА животных в 1-ю минуту регистрации ДА - тот же показатель в каждую последующую минуту регистрации- порядковый номер минуты наблюдения. Чем меньше абсолютное значение коэффициента , тем глубже процесс привыкания (лучше неассоциативное обучение). У интактных крыс отмечено постепенное снижение ГДА различия между показателями ГДА в 1-ю (ДАО и 3-ю (ДА 3) мин регистрации статистически значимы (0,046,критерий Уилкоксона) коэффициентравен 0,42 разница ДА 1-ДА 3 составляет 58,9 усл. ед. (табл. 3). ДПФС ведет к нарушениям направленного внимания и ультракраткосрочной памяти габитуации, что проявляется исчезновением статистически значимых различий между уровнем подвижности в 1-ю и 3-ю мин наблюдения (0,05, критерий Уилкоксона) коэффициентприближается к 1,0 показатель ДА 1-ДА 3 равен 1,3 усл.ед., что достоверно ниже уровня контроля. Однократное введение пролил-лейцина после ДПФС,накануне актометрии, препятствует статистически значимому нарушению габитуации уровень ДА 1-ДА 3 достигает значения 20,4 усл. ед., что достоверно не отличается от контроля отмечается нормализация коэффициента(до 0,47) - см. табл. 3. Таким образом,пролил-лейцин предотвращает возникновение значимых когнитивных нарушений (расстройства направленного внимания и памяти на текущие события) у субъектов с АГ на фоне нарушений сна или недосыпания. Это является важным преимуществом заявляемого дипептида в сравнении с прототипом (диазепамом), вызывающим ухудшение памяти,сонливость, снижение концентрации внимания, амнезию 2. Пример 7. Проводили оценку влияния пролил-лейцина на нарушения долговременной памяти габитуации, вызванные ДПФС - модель когнитивной патологии (расстройства направленного внимания и долговременной памяти) при диссомнии у лиц с АГ. Опыты проводили на половозрелых инбредных спонтанно гипертензивных крысахсамцах(возраст - 2 месяца, масса тела - 210,16,6 г.). Сопоставляли показатели ГДА 11 14451 1 2011.06.30 и ВДА при первой и повторной высадке в камеру актометра. При этом 1-я высадка осуществлялась через 45 мин после ДПФС, а 2-я - неделей позже ДПФС и первого обследования животными бокса. Актометрию в обоих случаях проводили, как описано выше(пример 6). Крысы группы 1 не подвергались ДПФС накануне 1-го пребывания в камере актометра, им ничего не вводили как перед первым, так и перед повторным тестированием (контроль). Животные группы 2 и группы 3 первый раз были высажены в бокс актометра на фоне 24-часовой ДПФС. Крысам группы 2 применяли плацебо, крысам группы 3- пролил-лейцин (0,5 мг/кг) введение осуществляли внутрибрюшинно, 5-кратно, в режиме 5 дней в неделю, 1-е и 5-е введение проводили за 45 мин до 1-й и 2-й высадки в камеры соответственно. Анализируемые показатели и обработка данных соответствует описанным в примере 6. При этом коэффициент привыканияопределяли по формуле ДА 2,(1) ДА 1 где ДА 1 - усредненные значения ГДА животных при 1-й высадке ДА 2 - тот же показатель при повторной высадке. Интактные крысы при 2-й высадке помнят, что уже находились в камере, и совершают меньше движений при повторном обследовании установки (долговременная память габитуации). Это проявляется выраженным снижением уровня ГДА и ВДА при 2-й высадке относительно значений тех же показателей при 1-м помещении в бокс. Различия между показателями в 1-ю мин регистрации при 1-й и 2-й высадках в группе 1 статистически значимы (0,05, критерий Уилкоксона) значения коэффициентаравны 0,3 и 0,27 разница ДА 1-ДА 2 в контроле для ГДА составляет 71,4, для ВДА - 45,7 усл. ед. (табл. 4). ДПФС ведет к нарушениям долговременной памяти габитуации - различия между уровнем подвижности в 1-ю мин наблюдения при 1-м и повторном ознакомлении с камерой статистически незначимы (0,05, критерий Уилкоксона) коэффициент К превышает 1,0(- 25,2 усл. ед. для ГДА и - 15,0 усл. ед. для ВДА) и опускается достоверно ниже уровня контроля (0,05, критерий Крускала-Уоллиса) (табл. 4). Возрастание подвижности во 2-м сеансе регистрации в сравнении с 1-м свидетельствует о нарушении неассоциативного обучения на фоне ДПФС вследствие дефицита внимания и развития антероградной амнезии. Однократное введение пролил-лейцина после ДПФС, накануне первого ознакомления с боксом, улучшает запоминание обстановки крысами и препятствует статистически значимому нарушению долговременной габитуации - показатель ДА 1-ДА 2 имеет положительные значения и достигает для ГДА значения 22,4 усл. ед., для ВДА - 15,6 усл. ед., что достоверно не отличается от контроля (табл. 4). Следовательно, заявляемый дипептид препятствует нарушениям долговременной памяти, вызванным ДПФС у спонтанно гипертензивных крыс. Таким образом, пролил-лейцин предотвращает возникновение значимых когнитивных нарушений (расстройства направленного внимания и долговременной памяти) у субъектов с АГ на фоне нарушений сна или недосыпания. Это является важным преимуществом заявляемого дипептида в сравнении с прототипом (диазепамом), вызывающим ухудшение памяти, сонливость, снижение концентрации внимания, амнезию 2. Пример 8. Было изучено влияние высоких доз пролил-лейцина на поведение белых половозрелых нелинейных мышей-самцови их двигательную активность, а также острая токсичность дипептида. Животным основных групп вводили дипептид внутрибрюшинно в дозах, 10-кратно (5,0 мг/кг) и 100-кратно (50,0 мг/кг) превышающих терапевтическую. Мышам контрольных групп применяли плацебо. Установлено, что разовое введение пролил-лейцина в дозе, 10-кратно превосходящей терапевтическую, не вызывает гибели белых нелинейных мышей-самцов, не нарушает 12 14451 1 2011.06.30 общего состояния и не ведет к изменению массы тела, не отражается на показателях двигательной активности за 5 минут, не влияет на поведенческие реакции при зоосоциальных взаимодействиях (в условиях групповой актометрии). Подострое 4-х кратное введение дипептида в той же дозе не приводит к гибели животных, не влияет на ГДА и ВДА за 24 часа, не вызывает депрессивно-подобных реакций ви не изменяет порога болевой чувствительности у мышей в тесте -. Однократное внутрибрюшинное введение пролил-лейцина в дозе, 100-кратно превосходящей терапевтическую дозу, не вызывает гибели животных, не влияет на массу тела, не приводит к существенному изменению двигательной активности за 5 минут, 60 минут и за 24 часа, не влечет за собой патологических изменений в общем состоянии мышей. Статистически достоверных различий между группами сравнения ни по одному из изученных критериев не обнаружено,что свидетельствует о низкой токсичности пролил-лейцина и о его хорошей переносимости при введении в дозах, 10-кратно и 100-кратно превосходящих терапевтическую. Отсутствие угнетающего влияния на двигательную активность, прочих выраженных побочных эффектов со стороны нервной системы и других жизненно важных систем организма даже при применении в дозах, 10-ти и 100-кратно превосходящих терапевтическую (0,5 мг/кг), является важным преимуществом заявляемого дипептида по сравнению с прототипом (диазепамом 2). Пример 9. С целью изучения потенциальных побочных эффектов заявляемого дипептида при длительном введении оценено влияние пролил-лейцина (19 или 26 инъекций, внутрибрюшинно, 1 инъекция в сутки, 5-7 дней в неделю) в терапевтической дозе (0,5 мг/кг) на поведение и общее состояние неполовозрелых крыс-самцов линии . Животным контрольной группы применяли плацебо. Оценка потенциального токсического действия дипептида проведена с использованием критериев изменения внешнего вида и шерстного покрова животных, диарея, нарушение реакции на тактильные раздражители, одышка, слюнотечение, гипотермия, снотворное действие, стереотипия, тремор и судороги, расстройства координации движений (атаксия). Установлено, что субхроническое внутрибрюшинное введение пролил-лейцина не вызывает изменений со стороны центральной и периферической нервной системы, ухудшения общего состояния и гибели животных. Отсутствие побочных явлений со стороны нервной системы (например, сонливости, нарушения координации движений) при длительном применении является преимуществом заявляемого дипептида в сравнении с прототипом (диазепамом 2). Пример 10. Возможность возникновения абстинентного синдрома на фоне пролил-лейцина оценивали в условиях острой отмены после его субхронического введения неполовозрелым крысам-самцам линиив терапевтической дозе (0,5 мг/кг, 16 или 19 инъекций, внутрибрюшинно, 1 инъекция в сутки, 5-7 дней в неделю). Животным контрольной группы применяли в те же сроки плацебо. Общепринятым тестом, с помощью которого определяют возможность развития абстинентного синдрома после отмены испытуемого вещества, является тест -. Методика заключается в термическом раздражении кожи хвоста крыс с помощью сфокусированного теплового пучка с регистрацией латентного периода рефлекторного двигательного ответа. Латентный период отдергивания хвоста у неполовозрелых крыссамцов линииопределяли спустя 2 суток после 16-го введения плацебо или пролиллейцина (0,5 мг/кг, 1 инъекция в сутки, 5-7 дней в неделю). Абстинентный синдром характеризуется резко выраженным увеличением болевой чувствительности, которая, как правило,превышает таковую у интактных животных. Отмена пролил-лейцина после 16-кратного введения не приводит к снижению латентного периода отдергивания хвоста соответству 13 14451 1 2011.06.30 ющие показатели на фоне введения пролил-лейцина и плацебо значимо не отличаются(5,20,62 баллов и 4,60,45 баллов), что свидетельствует об отсутствии абстиненции. Другим общепринятым тестом, позволяющим оценить возникновение абстинентного синдрома, является реакция вздрагивания. Крысамосновной и контрольной групп спустя 1 сутки после 19-го введения пролил-лейцина или плацебо предъявляли 5 громких звуковых стимулов. Реакцию оценивали в баллах 0 баллов - видимое отсутствие реакции,1 - замирание, 2 - вздрагивание, 3 - прыжок. Усиление реакции вздрагивания является компонентом синдрома отмены. Показано, что отмена пролил-лейцина не вызывает усиления указанной реакции. Средние значения оценки этого критерия статистически значимо не отличаются в основной и контрольной группах (1,60,14 баллов и 1,730,12 баллов соответственно). У неполовозрелых крыс-самцов линииисходно и спустя 1 сутки после заключительной инъекции пролил-лейцина (всего проведено 19 введений в дозе 0,5 мг/кг, внутрибрюшинно, 1 инъекция в сутки, 5-7 дней в неделю) или плацебо (вводимого в том же режиме) определяли массу тела. Средние значения прироста массы тела в основной группе составили 86,6 г, в контрольной группе - 83,7 г. Статистически достоверных различий между группами ни на одном из этапов эксперимента не обнаружено, что свидетельствует о хорошей переносимости введения и отмены пролил-лейцина. Таким образом, в отличие от прототипа (диазепам 2) пролил-лейцин не вызывает абстинентного синдрома, вызываемого привыканием к вводимому соединению. Пример 11. Пероральная лекарственная форма в виде таблеток пролил-лейцин 0,025 г лактоза 0,160 г микрокристаллическая целлюлоза 0,070 г крахмал кукурузный 0,030 г поливинилпирролидон 0,010 г аэросил 0,0023 г магния стеарат 0,0027 г. Таблетки, содержащие пролил-лейцин, могут быть получены из композиций данного изобретения любым подходящим способом получения таблеток (например, методом прямого прессования или путем таблетирования с предварительным влажным или сухим гранулированием). Лекарственную форму в виде таблеток предпочтительно получать путем влажного гранулирования, что в последнем случае включает операции просеивание и смешивание порошков, увлажнение порошков раствором связывающих веществ и их перемешивание, гранулирование влажной массы, сушка влажных гранул, обработка сухих гранул, таблетирование, фасовка и упаковка. Берут 0,025 г пролил-лейцина, 0,160 г лактозы, 0,040 г микрокристаллической целлюлозы, 0,030 г кукурузного крахмала, просеивают, загружают в чистый сухой смеситель,перемешивают 10-15 минут и увлажняют при перемешивании 10 раствором ранее просеянного поливинилпирролидона (0,010 г). Наиболее предпочтительным является использование лактозы в виде моногидрата. Увлаженную смесь гранулируют, влажные гранулы раскладывают на лотки слоем 1,5-2 см и сушат (предпочтительно в сушилке с псевдоожиженным слоем) при температуре 603 С в течение 10-12 часов, периодически помешивая,до остаточной влажности 3,00,5 . 0,030 г микрокристаллической целлюлозы, 0,0023 г аэросила и 0,0027 г магния стеарата просеивают, добавляют к сухому грануляту и перемешивают в течение 10-15 мин. Прессуют полученную смесь для получения таблеток(например, с использованием пресса для формования таблеток). Каждая таблетка весит 300 мг и содержит 25 мг пролил-лейцина. Пример 12. Пероральная лекарственная форма в виде твердых желатиновых капсул 14 14451 1 2011.06.30 пролил-лейцин 0,010 г лактоза 0,060 г микрокристаллическая целлюлоза 0,030 г крахмал кукурузный 0,010 г поливинилпирролидон 0,004 г аэросил 0,001 г магния стеарат 0,001 г. Твердые желатиновые капсулы, содержащие пролил-лейцин, могут быть получены из композиций данного изобретения любым подходящим способом. Для лекарственной формы в виде твердых желатиновых капсул используют гранулят, получаемый аналогично способу, описанному в примере 11. Полученный гранулят (0,116 г) с содержанием 10 мг пролил-лейцина капсулируют в твердые желатиновые капсулы. Пример 13. Пероральная лекарственная форма в виде мягких желатиновых капсул пролил-лейцин 0,015 г масло ростительное 0,1 г лецитин очищенный 0,1 г воск пчелиный 0,1 г. Мягкие желатиновые капсулы, содержащие пролил-лейцин, могут быть получены из композиций данного изобретения любым подходящим способом, с использованием любого подходящего эксципиента, например с использованием растительного масла (подсолнечное, соевое, кукурузное и др.), лецитина, триглециридов, глицерина, животных жиров,воска и др. Для получения лекарственной формы в виде мягких желатиновых капсул приготовляют раствор из 100 мг масла растительного, 100 мг лицетина очищенного, с добавлением 100 мг воска пчелиного. 15 мг пролил-лейцина равномерно распределяют в этом растворе. Полученную суспензию вводят традиционно применяемым способом в мягкие желатиновые капсулы, по 315 мг на 1 капсулу. Пример 14. Пероральная лекарственная форма в виде гранул для приема внутрь пролил-лейцин 0,005 г лактоза 0,060 г микрокристаллическая целлюлоза 0,030 г крахмал кукурузный 0,010 г поливинилпирролидон 0,004 г аэросил 0,001 г магния стеарат 0,001 г. Гранулы для приема внутрь, содержащие пролил-лейцин, могут быть получены из композиций данного изобретения любым подходящим способом. Для лекарственной формы в виде гранул для приема внутрь используют гранулят, получаемый аналогично способу, описанному в примере 11. Полученный гранулят (0, 111 г) с содержанием 5 мг пролил-лейцина фасуют в пакеты. Пример 15. Пероральная лекарственная форма в виде порошка для приема внутрь пролил-лейцин 0,015 г лактоза 0,185 г. Проводят измельчение исходных материалов, разделяют частицы порошка по размерам, смешивают 0,015 г пролил-лейцина и 0,185 г лактозы, проводят фасовку в пакеты. Пример 16. Инъекционная лекарственная форма в виде раствора для инфузий пролил-лейцин 0,03 г 15-маннит 5,0 г вода для инъекций до 100 мл. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха, водоподготовку подготовку флаконов или пластиковых пакетов к наполнению. Подготавливают, взвешивают и растворяют в воде для инъекций 0,03 г пролил-лейцина и 5,0 г маннита. Полученный раствор фильтруют, проводят розлив во флаконы или пластиковые пакеты, укупоривают или запаивают, стерилизуют. Пример 17. Инъекционная лекарственная форма в виде раствора для инъекций пролил-лейцин 0,005 г-маннит 0,05 г вода для инъекций до 5 мл. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха, водоподготовку моют и стерилизуют ампулы. Подготавливают, взвешивают и растворяют в воде для инъекций 0,005 г пролил-лейцина и 0,05 г маннита. Полученный раствор фильтруют, ампулируют, стерилизуют. Пример 18. Сублимационно высушенная инъекционная лекарственная форма (для приготовления раствора для инъекций) пролил-лейцин 0,005 г-маннит 0,08 г. Порошок лиофилизированный для приготовления раствора для инъекций готовят следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха. Получают воду для инъекций, проводят мойку и стерилизацию ампул или флаконов. Подготавливают, взвешивают и растворяют в воде для инъекций (проводя стерильную фильтрацию) 0,005 г пролил-лейцина и 0,08 г маннита. Наполняют ампулы или флаконы полученным раствором, замораживают, проводят сублимацию. Осуществляют запайку ампул или укупорку флаконов с готовой продукцией. Раствор для инъекций готовят непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в упаковке (5 мл воды для инъекций). Пример 19. Сублимационно высушенная инъекционная лекарственная форма (для приготовления раствора для инфузий) пролил-лейцин 0,03 г-маннит 5,0 г. Порошок лиофилизированный для приготовления раствора для инфузий получают следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха. Получают воду для инъекций, проводят мойку и стерилизацию флаконов. Подготавливают,взвешивают и растворяют в воде для инъекций (проводя стерильную фильтрацию) 0,003 г пролил-лейцина и 5,0 г маннита. Наполняют флаконы полученным раствором, замораживают, проводят сублимацию. Осуществляют укупорку флаконов с готовой продукцией. Раствор для инфузий готовят непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в упаковке (100 мл воды для инъекций). Пример 20. Инъекционная лекарственная форма в виде порошка (сухая стерильная рассыпка) для приготовления раствора для инъекций пролил-лейцин 0,005 г-маннит 0,05 г. Порошок для приготовления раствора для инъекций (стерильная рассыпка) получают следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха 16 14451 1 2011.06.30 подготовку флаконов к наполнению. Подготавливают, взвешивают и помещают во флаконы (с соблюдением требований стерильности) 0,005 г пролил-лейцина и 0,05 г маннита,укупоривают флаконы с готовой продукцией. Раствор для инъекций готовят непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в упаковке (5 мл воды для инъекций). Пример 21. Инъекционная лекарственная форма в виде порошка (сухая стерильная рассыпка) для приготовления раствора для инфузий пролил-лейцин 0,03 г-маннит 5,0 г. Порошок для приготовления раствора для инфузий (стерильная рассыпка) получают следующим образом. Проводят подготовку помещения, оборудования, очистку воздуха мойку и стерилизацию флаконов. Подготавливают, взвешивают и помещают во флаконы(с соблюдением требований стерильности) 0,03 г пролил-лейцина и 5,0 г маннита. Помещают во флаконы пролил-лейцин и маннит с соблюдением требований стерильности,укупоривают флаконы с готовой продукцией. Раствор для инфузий готовят непосредственно перед применением с использованием стерильного растворителя, прилагаемого в упаковке (100 мл воды для инъекций). Пример 22. Лекарственная форма в виде назальных капель пролил-лейцин 1,0 г нипагин 0,1 г вода дистиллированная остальное. Подготавливают, взвешивают 1,0 г пролил-лейцина, 0,1 г нипагина. Подготавливают необходимое количество воды дистиллированной. Раствор пролил-лейцина готовят весообъемным способом с добавлением нипагина, используя в качестве растворителя воду для инъекций. Все описанные в примерах 11-22 лекарственные формы должны удовлетворять требованиям Государственной Фармакопеи Республики Беларусь 13. В примерах описаны наиболее применяемые на практике варианты фармацевтических композиций, однако заявляемый дипептид в дозировках 0,0001-1,0 г может быть включен и в другие фармацевтические композиции (не ограничиваясь приведенными примерами), описанные в Государственной Фармакопее Республики Беларусь 13. Показаниями для применения фармацевтической композиции, содержащей пролиллейцин, являются профилактика и лечение диссомний и десинхронозов, вызванных психическими расстройствами, переутомлением, гипертонией или возрастными изменениями,и связанных с ними нарушений, в т.ч. дисфункций нервной системы (включая расстройства обучения, памяти, способности к принятию решения и экстраполяции, снижение концентрации внимания). Лекарственные формы, содержащие пролил-лейцин, применяют 1-3 раза в сутки в течение 1-3 недель, при необходимости до 1-6 месяцев. Основываясь на имеющихся данных, для лечения вышеназванных расстройств могут применяться и другие пролилдипептиды, содержащие в своей структуре остаток природной аминокислоты пролина совместно с остатком второй аминокислоты. Учитывая, что дипептиды на основе -производных аминокислот обладают биологической активностью,возможно применение фармацевтической композиции, содержащей в качестве основного вещества пролилдипептиды, состоящие из остатка пролина и второй аминокислоты как в форме -, так и -стереоизомеров. Способ лечения такой композицией, ее состав и способы получения могут быть аналогичны таковым для композиции, содержащей пролиллейцин и разрешенные к медицинскому применению вспомогательные вещества. 17 14451 1 2011.06.30 Таблица 1 Влияние пролил-лейцина (0,1-5,0 мг/кг) на биоритмы вертикальной двигательной активности у мышей , нарушенные острым стрессом Характеристики околосуточных биоритмов активности Группа/условия проведения эксПродолжительность периода с низким уровнем активности Акроперимента, доза вот общей продолжиАстрономическое время, час фаза,(200,300,400,500, 600,700,800,Группа 1 (интакт 900,1000,1100,1947 75,0 ные) 1200,1300,1600,1700,1800,2000,2100,2200) Группа 2 (стрессированные, пла- 2046 4 часа (500,700,1000,1900) 16,7 цебо) 12 часов Группа 3 (стрес(000,200,300,400,600, 700,800,сированные, про- 1817 50,0 900,1000,1100,лил-лейцин 0,1) 1800,1900) Группа 4 (стрес 8 часов сированные, про- 1923 (100,200,400,500, 700,800,900,33,3 лил-лейцин 0,5) 1700) Группа 5 (стрес 7 часов сированные, про- 1813 (700,800,900,1000, 1100,1700,29,2 лил-лейцин 5,0) 1800) Примечания- период времени, на протяжении которого различия статистически достоверны по сравнению с исходным уровнем в той же группе (критерий Фридмана) пролил-лейцин вводили внутрибрюшинно, 4-кратно. Таблица 2 Влияние пролил-лейцина (0,5 мг/кг) на экстраполяционное поведение крыс ,нарушенное депривацией парадоксальной фазы сна (ДПФС) Данные оценки когнитивных функций Группа/ условия проведения Число безЧисло крыс с эксперимента, доза (мг/кг) успешных ЛП 1 поп ЛПподн., с ЛПподн. до 40 с попыток 15/15 Группа 1 (интактные) 4,10,7 3,30,5 12,52,2 1005/9 Группа 2 (ДПФС, плацебо) 9,21,8 5,11,6 40,112,1 55,6 Группа 3 (ДПФС, пролил 6/8 7,42,2 2,30,5 34,013,4 лейцин, 0,5) 75 Примечания ЛП 1 поп - латентный период первой попытки избавления ЛПподн. - время подныривания под край цилиндра- различия между группами 1 и 2 статистически достоверны, критерий Крускала-Уоллиса, с - анализом по критерию Данна- различия между группами 1 и 2 статистически достоверны, точный критерий Фишера пролиллейцин вводили внутрибрюшинно, однократно. 18 14451 1 2011.06.30 Таблица 3 Влияние пролил-лейцина на краткосрочную память габитуации у крыс ,нарушенную депривацией парадоксальной фазы сна (ДПФС) Группа/ условия проведения ДА 1 ДА 3 ДА 1-ДА 3 эксперимента, доза (мг/кг) Группа 1 (интактные) 43,310,6 102,114,9 0,42 58,915,1 20,046 Группа 2 (ДПФС, плацебо) 1,318,4 33,03,9 31,74,7 0,96 Р 10,043 Группа 3 (ДПФС, пролил 38,815 18,45,3 0,47 20,438,9 лейцин, 0,5) Примечания ДА 1 - усредненные значения ГДА животных в 1-ю минуту регистрации ДА 3 - тот же показатель в 3-ю минуту регистрации Р 1 - различия между группами 1 и 2 статистически достоверны, критерий Крускала-Уоллиса, с - анализом по критерию Данна Р 2 - различия с 1-й минутой статистически достоверны, критерий КрускалаУоллиса, с - анализом по критерию Данна- коэффициент привыкания пролиллейцин вводили внутрибрюшинно, однократно. Таблица 4 Влияние пролил-лейцина на долговременную память габитуации у взрослых крыс-самцов линии , нарушенную ДПФС Группа/ доза, мг/кг ДА 1 ДА 2 ДА 1-ДА 2 ГДА Группа 1 (интактные) 30,79,6 102,114,9 0,3 71,418,8 20,046 Группа 2 (ДПФС,-25,213,4 33,03,9 58,212,7 1,76 плацебо) 10,05 Группа 3 (ДПФС,38,815 16,42,9 0,42 22,415,5 пролил-лейцин, 0,5) ВДА Группа 1 (интактные) 17,17,3 62,99 0,27 45,78,4 20,016 Группа 2 (ДПФС,-15,08,5 27,54,6 42,511 1,55 плацебо) 10,05 Группа 3 (ДПФС,34,618,9 196,8 0,55 15,615,9 пролил -лейцин, 0,5) Примечания 1 - различия между группами 1 и 2 статистически достоверны, критерий Крускала-Уоллиса, с - анализом по критерию Данна 2 - различия с 1-й минутой статистически достоверны, критерий Крускала-Уоллиса, с - анализом по критерию Данна- коэффициент привыкания пролил-лейцин вводили внутрибрюшинно, 5-кратно. 14451 1 2011.06.30 Источники информации 1. Арушанян Э.Б., Бейер Э.В. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1998. - Т. 61.6. - С. 13-16. 2. Регистр лекарственных средств России // Аптекарь. - 2007. -9. - С. 970. 3. Арушанян Э.Б., Попов А.В. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 2006. - Т. 69.2. - С. 14-17. 4. Патент 2119496 С 1, МПК 607 5/078,07 207/16,61 38/05. 5. Заявка на изобретение 2005 138 344 А, МПК 61 31/00, 2007. 6..-.,.-. // ... . - 2002. - . 35. -2. - . 239243. 7.. // . . . - 1983. - . 18. -3. - . 345-349. 8.. // . - 1985. - . 24. -5. - . 413-419. 9.. // . . . - 1984. - . 21. -3. - . 345-348. 10.4416871, 1983. 11. Садовникова И.И. // Русский мед. журнал. - 2006. - Т. 14. -10. - С. 770-773. 12. Савченко Н.М., Островская Р.У., Буров Ю.В. // Журн. экспериментальной биол. и мед. - 1988. -8. - С. 170-172. 13. Государственная Фармакопея Республики Беларусь (1 издание). Ред. Г.В.Годовальников, А.А.Шеряков. - Минск, 2006. Фиг. 3 Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 21