Циклогексеноновые соединения из антродии камфорной (ANTRODIA CAMPHORATA) и их применение

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ЦИКЛОГЕКСЕНОНОВЫЕ СОЕДИНЕНИЯ ИЗ АНТРОДИИ КАМФОРНОЙ ( ) И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ(71) Заявитель ГОЛДЕН БИОТЕКНОЛОДЖИ КОРПОРЕЙШН(73) Патентообладатель ГОЛДЕН БИОТЕКНОЛОДЖИ КОРПОРЕЙШН(57) 1. Соединение, представляющее собой 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон. 2. Соединение по п. 1, отличающееся тем, что выделено из. 3. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что выделено из экстракта, полученного с помощью органического растворителя. 4. Соединение по п. 3, отличающееся тем, что органический растворитель выбран из группы, включающей спирты, сложные эфиры, алканы и алкилгалоиды. 5. Соединение по п. 4, отличающееся тем, что органическим растворителем является этанол. 6. Соединение по п. 2, отличающееся тем, что выделено из водного экстракта. 7. Соединение по п. 1, проявляющее антиоксидантную активность. 8. Способ подавления роста клеток рака молочной железы, при котором на клетки воздействуют соединением по п. 1. 9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что соединение выделено из. 10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что соединение выделено из экстракта, полученного с помощью органического растворителя. 11. Способ по п. 10, отличающийся тем, что органический растворитель выбран из группы, включающей спирты, сложные эфиры, алканы и алкилгалоиды. 16211 1 2012.08.30 12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что органическим растворителем является этанол. 13. Способ по п. 9, отличающийся тем, что соединение выделено из водного экстракта. 14. Способ по п. 8, отличающийся тем, что клетки рака молочной железы относятся к клеточной линии -7 или 231. 15. Способ подавления роста клеток рака печени, при котором на клетки воздействуют соединением по п. 1. 16. Способ по п. 15, отличающийся тем, что соединение выделено из. 17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что соединение выделено из экстракта, полученного с помощью органического растворителя. 18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что органический растворитель выбран из группы, включающей спирты, сложные эфиры, алканы и алкилгалоиды. 19. Способ по п. 18, отличающийся тем, что органическим растворителем является этанол. 20. Способ по п. 16, отличающийся тем, что соединение выделено из водного экстракта. 21. Способ по п. 15, отличающийся тем, что клетки рака печени относятся к клеточной линии 3 или 2. 22. Способ подавления роста клеток рака простаты, при котором на клетки воздействуют соединением по п. 1. 23. Способ по п. 22, отличающийся тем, что соединение выделено из. 24. Способ по п. 23, отличающийся тем, что соединение выделено из экстракта, полученного с помощью органического растворителя. 25. Способ по п. 24, отличающийся тем, что органический растворитель выбран из группы, включающей спирты, сложные эфиры, алканы и алкилгалоиды. 26. Способ по п. 25, отличающийся тем, что органическим растворителем является этанол. 27. Способ по п. 23, отличающийся тем, что соединение выделено из водного экстракта. 28. Способ по п. 22, отличающийся тем, что клетки рака простаты относятся к клеточной линииили -145. 29. Фармацевтическая композиция для подавления роста опухолевых клеток, выбранных из группы, включающей клетки рака молочной железы, рака печени и рака простаты,содержащая эффективное количество соединения по п. 1 и фармацевтически приемлемый носитель. Настоящее изобретение относится к новому соединению, в частности к экстракту, выделенному и очищенному из, и к его применению в подавлении роста опухоли.(Ниу Чанг-Жи), также называемая Чанг-Жи, Ниу Чанг-Ку,Ред-Чанг, Ред Чанг-Чи, Чанг-Ку, камфорный камерный гриб и так далее, является эндемичным видом на Тайване, растущим на внутренней гнилой сердцевине древесной стенки коричникаХей на высоте над уровнем моря от 450 до 2000 м в горах Тайваня. Плодовое телорастет внутри ствола дерева.Хей распространен главным образом в горных областях Тао-Юань,Нан-Тоу и внесен в перечень редких и ценных пород благодаря малой численности, и его чрезмерная вырубка является противозаконной. Таким образом,в 2 16211 1 2012.08.30 природе становится также редкой. Поскольку скорость роста природнойявляется крайне низкой, а сезон роста проходит с июня по октябрь, то ценаявляется очень высокой. Плодовые телаявляются многолетними, бесчерешковыми, пробковыми или древесными, с различными внешними формами, наподобие тарелки, колокола, копыта или башни. Они являются плоскими на поверхности дерева в начале роста. Затем края на передней границе поднимаются, заворачиваясь в форму тарелок или сталактитов. Верхние поверхностиа являются блестящими, коричневого или темно-коричневого цвета, с незаметными складками, плоскими и тупыми краями. Нижние стороны являются оранжево-красными или частично желтыми, с порами на всей поверхности. В дополнение,издает сильный запах сассафраса (камфорный аромат), становится бледным желто-коричневым после высушивания на солнце и имеет сильный горький вкус. В традиционной тайваньской медицинеобычно применяется для детоксикации, защиты печени, в качестве противоракового средства., как и обычные съедобные и медицинские грибы, богата многочисленными питательными веществами, включая полисахариды (такие как -глюкозан), тритерпеноиды, супероксид-дисмутазу (СОД), аденозин, белки (иммуноглобулины),витамины (такие как витамин , никотиновая кислота), микроэлементы (такие как кальций, фосфор и германий и прочее), нуклеиновую кислоту, агглютинин, аминокислоты,стероиды, лигнины и стабилизаторы кровяного давления (такие как антродиевая кислота) и тому подобное. Полагают, что эти биоактивные ингредиенты проявляют благоприятные эффекты, такие как противоопухолевый, усиление иммунитета, противоаллергический,подавление агглютинации тромбоцитов, противовирусный, противобактериальный, антигипертензивный, снижение уровня глюкозы в крови, снижение холестерина, защита печени и тому подобное. Тритерпеноиды являются наиболее изученным компонентом среди многочисленных композицийа. Тритерпеноиды являются общим наименованием для природных соединений, содержащих 30 атомов углерода с пентациклическими или гексациклическими структурами. Горький вкусобусловлен компонентом из тритерпеноидов. Три новых тритерпеноидов эргостанового типа (антцин , антцин ,антцин ) были выделены. из плодовых тел 1995.. . . . 58365-371. Три новых соединения, названных жанкуевой кислотой , жанкуевой кислотойи жанкуевой кислотой , были экстрагированы из плодовых телэтанолом. 1995., -. . . . 581655-1661. В дополнение. также нашли в плодовых телахтри других новых тритерпеноида, являющихся сесквитерпена лактоном и двумя соединениями, полученными из бифенила, 4,7-диметокси-5-метил-1,3-бензодиоксолом и 2,2,5,5-тетраметокси-3,4,3,4-би-метилендиокси-6,6-диметилбифенилом,, 1995.,. . 39613-616. В 1996 четыре новых тритерпеноида эргостанового типа (антциныии метил антцинатыи ) были выделены. с помощью тех же самых аналитических методов, 1996.. . 41263-267. Два родственных к эргостану стероида, жанкуевые кислотыивместе с тремя ланостасвязанными тритерпенами, 15 альфа-ацетил-дегидросульфуреновой кислотой, дегидроебурикоевой кислотой и дегидросульфуреновой кислотой были выделены., 1996.. . 411389-1392. Поиски точ 3 16211 1 2012.08.30 ных активных ингредиентов с противоопухолевым эффектом все еще остаются на экспериментальной стадии и нуждаются в разъяснении, хотя сообщалось о противоопухолевых эффектах(таких как в вышеупомянутых ссылках). Если будет найдена точная противоопухолевая композиция, это внесет большой вклад в благоприятные эффекты лечения рака. Чтобы идентифицировать противоопухолевые соединения из экстрактов, в данном изобретении было выделено и очищено соединение, представляющее собой 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10 триенил)циклогекс-2-енон, как показано в формуле 1, с молекулярной формулой 24384,в виде бледно-желтого порошка, с молекулярной массой 390. 3 Соединения формулы 1 очищены путем водной экстракции или экстракции органическим растворителем. Органические растворители включают, но не ограничены этим, спирты, такие как метанол, этанол или пропанол, сложные эфиры, такие как этилацетат, алканы, такие как гексан, или алкилгалоиды, такие как хлорметан, хлорэтан. Среди них предпочтительным является спирт, особо предпочтительным является этанол. Соединениями, которые можно применять в соответствии с изобретением, может быть подавлен рост опухолевых клеток, что можно далее применять для медицинской композиции для лечения рака и усиления лечебных эффектов. Соединения изобретения можно применять для ряда раковых клеток, включая рак молочной железы, рак печени и рак простаты, что приводит к замедлению роста раковых клеток, с последующим подавлением пролиферации раковых клеток и снижением риска развития опухоли. Таким образом, их можно применять в лечении рака, такого как рак молочной железы, рак печени, рак простаты и тому подобного. С другой стороны, соединения формулы 1 в изобретении могут быть включены в медицинские композиции для лечения рака молочной железы, рака печени и рака простаты,для подавления роста опухолевых клеток. Медицинские композиции включают не только соединения формулы 1, но также и фармацевтически пригодные носители. Носители включают, но не ограничены этим, наполнители, такие как вода, уплотнители, такие как сахароза или крахмал, связующие агенты, такие как производные целлюлозы, разбавители, дезинтегранты, усилители абсорбции или подсластители. Фармацевтическая композиция настоящего изобретения может быть произведена путем смешивания соединений формулы 1, по крайней мере, с одним из носителей с помощью обычных способов, известных в фармацевтической области техники, и может быть представлена, но не ограничена этим, в виде порошка, таблетки, капсулы, пилюль, гранул или иного жидкого состава. В дополнение, поскольку соединения настоящего изобретения в то же время обладают антиоксидантной активностью, они могут быть идеальными добавками к здоровому питанию, диетам и напиткам, медицинским продуктам и косметике и являются благоприятными для здоровья человека благодаря способностям к профилактике сердечно-сосудистых заболеваний или мутации клеток. Настоящее изобретение далее разъясняется в следующих примерах и иллюстрациях воплощений. Эти примеры, однако, нельзя рассматривать как ограничивающие объем 4 16211 1 2012.08.30 изобретения, и предполагается, что специалистами в данной области техники легко могут быть сделаны модификации, находящиеся в пределах сущности изобретения и объема приложенной формулы. Мицелий, плодовые тела или их смесь извначале экстрагировали водой или органическими растворителями до получения водного экстракта или органического экстрактас применением способов, известных специалистам в данной области техники. Органические растворители включали, но не ограничивались этим, спирты, такие как метанол, этанол или пропанол, сложные эфиры, такие как этилацетат, алканы, такие как гексан, или алкилгалоиды, такие как хлорметан, хлорэтан. Среди них предпочтительным является спирт, особо предпочтительным является этанол. Водные или органические экстракты изподвергали высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) для выделения и очистки. Каждую фракцию отбирали и анализировали на противораковый эффект. В активных фракциях с противораковым эффектом анализировали состав и впоследствии исследовали активность против различных опухолевых клеток. Вышеуказанный подход привел к идентификации новых соединений формулы 1, ингибирующих рост некоторых опухолевых клеток, не обнаруженных ранее в, и о которых не сообщалось в каких-либо предыдущих публикациях. Соединение 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон формулы 1 разъясняется ниже в качестве примера настоящего изобретения. Противоопухолевые эффекты 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона оценивали путем анализа с 3-(4,5 диметилтиазол-2-ил)-2, -дифенил тетразолия бромидомтестом в соответствии с моделью скрининга противоопухолевых лекарств Национального института ракапо уровню выживания клеток с применением клеточных линий, таких как клетки рака молочной железы, рака печени, рака простаты и тому подобных. Вышеуказанные тесты доказали, что 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон снижает уровни выживания клеточных линий рака молочной железы(-7 и 231), клеточных линий гепатоцеллюлярной карциномы ( 3 и 2) и клеточных линий рака простаты ( и -145), в то же время показывая относительно низкие значения концентрации полуингибирования (50). Рост клеток рака молочной железы, рака печени и рака простаты подавлялся 4-гидрокси-2,3-диметокси-6 метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-еноном, который, таким образом, можно применять для лечения рака, такого как рак молочной железы, рак печени,рак простаты и тому подобное. Подробности примеров описаны далее. Пример 1 Выделение 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона. 100 г мицелия, плодовых тел или их смеси изпомещали в колбу. В колбу добавляли подходящее количество воды и спирта (70-100 спиртовой раствор) и перемешивали при 20-25 в течение, по крайней мере, 1 часа. Раствор фильтровали через фильтр и 0,45 мкм мембрану и собирали фильтрат в качестве экстракта. Фильтрат изподвергали анализу посредством высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Разделение проводили на колонке 18, мобильная фаза состояла из метанолаи 0,1-0,5 уксусной кислоты , с условиями градиента 0-10 мин в 9520, 10-20 мин в 2010, 20-35 мин в 1010,35-40 мин в 1095, при скорости потока 1 мл/мин. Поток, вытекающий из колонки, контролировали детектором в УФ/видимой области. Фракции, собранные на 25-30 мин, отбирали и концентрировали до получения 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2 енона, продукта в виде бледно-желтого порошка. Анализ 4-гидрокси-2,3-диметокси-65 16211 1 2012.08.30 метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона показал молекулярную формулу 24384, молекулярную массу 390, точку плавления 48 С 52 С. Исследование ЯМР-спектра показало, что 1-(3)(м.д.)1.51, 1.67, 1.71, 1.75, 1.94, 2.03,2.07, 2.22, 2.25, 3.68, 4.05, 5.07 и 5.14 13-(3)(м.д.)12.31, 16.1, 16.12, 17.67,25.67, 26.44, 26.74, 27.00, 39.71, 39.81, 4.027, 43.34, 59.22, 60.59, 120.97, 123.84, 124.30,131.32, 135.35, 135.92, 138.05, 160.45 и 197.12. Химическую структуру 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека 2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона сравнивали с базой данных химических соединений, и не было найдено подобной структуры. Эти данные подтвердили, что 4-гидрокси-2,3 диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон является новым соединением, о котором не сообщалось ранее. Пример 2 Анализ выживаниядля эффектов против рака молочной железы. Модель скрининга противораковых лекарстввыбрали для тестирования противоракового эффекта соединения из примера 1 изобретения. Выделенное соединение 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2 енон из примера 1 добавляли в среду для культивирования клеток рака молочной железы человека, -7 или 231, для анализа выживания опухолевых клеток. Этот анализ проводили с применением теста с 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2, -дифенил тетразолия бромидом , обычно применяемого для определения клеточной пролиферации,процента жизнеспособных клеток и цитотоксичности.является желтым красителем,который абсорбируется живыми клетками и восстанавливается до багряно-синих кристаллов формазана редуктазой сукцинат-тетразолия в митохондриях. Образование формазана,таким образом, применяют для оценки и определения уровня выживания клеток. Клетки рака молочной железы человека -7 и 231 культивировали по отдельности в средах, содержащих эмбриональную телячью сыворотку, в течение 24 часов. Пролиферировавшие клетки отмывали один раз ФБР, затем обрабатывали 1 х трипсин-ЭДТА и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость отбрасывали, а осадок клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды для культивирования при легком встряхивании. Клетки помещали в 96-луночный планшет. Этанольные экстракты(контрольная группа, общие экстрактыбез очистки) добавляли в каждую из 96 лунок со следующей концентрацией 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл соответственно, в то время как 4-гидрокси-2,3 диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон (экспериментальная группа) добавляли в каждую из 96 лунок со следующей концентрацией 30, 10,3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл соответственно. Клетки инкубировали при 37 С в 52 инкубаторе в течение 48 часов.добавляли с концентрацией 2,5 мг/мл в каждую лунку в темноте и инкубировали в течение 4 часов, с последующим добавлением 100 мкл литического буфера для остановки реакции. Планшеты анализировали на ИФА-ридере при длине волны 570 нм для определения уровня выживания. Значения концентрации полуингибирования (50) подсчитывали и указывали в табл. 1. Таблица 1 Результаты анализа выживаниядля подавления клеток рака молочной железы Образцы 50 (мкг/мл) Контрольная группа (экстракт из) 162111 2012.08.30 Из результатов табл. 1 видно, что 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон является мощным ингибитором роста клеточной линии рака молочной железы человека. Значения 50 4-гидрокси-2,3 диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона для -7 и 231 составляют 0,852 и 1,031 мкг/мл соответственно, что значительно ниже,чем у общих экстрактов из. Таким образом, 4-гидрокси-2,3 диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон изможно применять для подавления роста клеток рака молочной железы. Пример 3 Дополнительное исследованиепо адъювантной терапии клеток рака молочной железы. Эксперимент также проводили в соответствии смоделью скрининга противораковых лекарств . Клетки рака молочной железы человека -7 и -231 культивировали по отдельности в средах, содержащих эмбриональную телячью сыворотку, в течение 24 часов. Пролиферировавшие клетки отмывали один раз ФБР, затем обрабатывали 1 х трипсин-ЭДТА и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость отбрасывали, а осадок клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды для культивирования при легком встряхивании. Клетки помещали в 96-луночный планшет после добавления 0,0017 мг/мл Таксола и обрабатывали в течение 72 часов. 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2 енон, полученный в примере 1, добавляли в каждую из 96 лунок в следующих концентрациях 0 мкг/мл (контрольная группа) 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл (экспериментальная группа) соответственно. Клетки инкубировали при 37 С в 52 инкубаторе в течение 48 часов.добавляли с концентрацией 2,5 мг/мл в каждую лунку в темноте и инкубировали в течение 4 часов, с последующим добавлением 100 мкл литического буфера для остановки реакции. Планшеты анализировали на ИФА-ридере при длине волны 570 нм для определения уровня выживания. Значения концентрации полуингибирования(50) подсчитывали и указывали в табл. 2. Таблица 2 Результаты дополнительной терапии Таксоломклеток рака молочной железы Образцы Результаты Контрольная группа Уровень выживания клеток 231 (0,0017 мкг/мл Таксолаформула 2) 0,011 Из результатов табл. 2 видно, что значения 50 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона для -7 и -231 снизились до 0,009 и 0,011 мкг/мл соответственно после добавления Таксола. Таким образом, эти результаты подтверждают ингибиторную активность 4-гидрокси-2,3 диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона из, который можно применять для подавления роста клеток рака молочной железы, и показывают лучшую противоопухолевую синергетическую активность при комбинации с Таксолом. Пример 4 Анализ выживаниядля эффектов против рака печени. Модель скрининга противораковых лекарствтакже применяли для анализа противораковых эффектов соединения, выделенного в примере 1 настоящего изобретения. Выделенное соединение 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека 7 16211 1 2012.08.30 2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон из примера 1 добавляли в среду для культивирования клеток рака печени человека,3 или 2, для анализа выживания опухолевых клеток. Клетки рака печени человека 3 и 2 культивировали по отдельности в средах, содержащих эмбриональную телячью сыворотку, в течение 24 часов. Пролиферировавшие клетки отмывали один раз ФБР, затем обрабатывали 1 х трипсин-ЭДТА и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость отбрасывали, а осадок клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды для культивирования при легком встряхивании. Клетки помещали в 96-луночный планшет. Этанольные экстракты(контрольная группа, общие экстрактыбез очистки) добавляли в каждую из 96 лунок со следующей концентрацией 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл соответственно, в то время как 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон (экспериментальная группа) добавляли в каждую из 96 лунок со следующей концентрацией 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл соответственно. Клетки инкубировали при 37 С в 52 инкубаторе в течение 48 часов.добавляли с концентрацией 2,5 мг/мл в каждую лунку в темноте и инкубировали в течение 4 часов, с последующим добавлением 100 мкл литического буфера для остановки реакции. Планшеты анализировали на ИФА-ридере при длине волны 570 нм для определения уровня выживания. Значения концентрации полуингибирования (50) подсчитывали и указывали в табл. 3. Таблица 3 Результаты анализа выживаниядля подавления клеток рака печени Образцы 50 (мкг/мл) Контрольная группа (экстракт из)3 5,1212 18,631 Экспериментальная группа (формула 1)3 0,0052 1,679 Из результатов табл. 3 видно, что 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон является мощным ингибитором роста клеточной линии рака печени человека. Значения 50 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил 5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона для 3 и 2 составляют 0,005 и 1,679 мкг/мл соответственно, что значительно ниже, чем у общих экстрактов из. Таким образом, 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон изможно применять для подавления роста клеток рака печени. Пример 5 Дополнительное исследованиепо адъювантной терапии клеток рака печени. Эксперимент также проводили в соответствии смоделью скрининга противораковых лекарств . Клетки рака печени человека 3 и 2 культивировали по отдельности в средах, содержащих эмбриональную телячью сыворотку, в течение 24 часов. Пролиферировавшие клетки отмывали один раз ФБР, затем обрабатывали 1 х трипсин-ЭДТА и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость отбрасывали, а осадок клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды для культивирования при легком встряхивании. Клетки 3 обрабатывали 0,0043 мг/мл Ловастатина в течение 72 часов, а 2 обрабатывали 0,0017 мг/мл Таксола в течение 72 часов, перед помещением в 96-луночный планшет. 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил 5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон, полученный в примере 1, добавляли в каждую из 96 лунок в следующих концентрациях 0 мкг/мл (контрольная группа) 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл (экспериментальная группа) соответственно. Клетки 8 16211 1 2012.08.30 инкубировали при 37 С в 52 инкубаторе в течение 48 часов.добавляли с концентрацией 2,5 мг/мл в каждую лунку в темноте и инкубировали в течение 4 часов, с последующим добавлением 100 мкл литического буфера для остановки реакции. Планшеты анализировали на ИФА-ридере при длине волны 570 нм для определения уровня выживания. Значения концентрации полуингибирования (50) подсчитывали и указывали в табл. 4. Таблица 4 Результаты дополнительной терапииклеток рака печени Образцы Результаты Контрольная группа Уровень выживания клеток 3 (0,0043 мкг/мл Ловастатина) 6132 (0,0017 мкг/мл Таксола) 812 Экспериментальная группа 50 (мкг/мл)3 (0,0043 мкг/мл Ловастатинаформула 2) 0,0022 (0,0017 мкг/мл Таксолаформула 2) 0,008 Из результатов табл. 4 видно, что значения 50 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона для 3 и 2 снизились до 0,002 и 0,008 мкг/мл соответственно после добавления синергетических активностей Ловастатина и Таксола. Таким образом, эти результаты подтверждают ингибиторную активность 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона из, который можно применять для подавления роста клеток рака печени, и показывают лучшую противоопухолевую синергетическую активность при комбинации с Таксолом. Пример 6 Анализ выживаниядля эффектов против рака простаты. Модель скрининга противораковых лекарствтакже применяли для анализа противораковых эффектов соединения, выделенного в примере 1 настоящего изобретения. Выделенное соединение 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека 2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон из примера 1 добавляли в среду для культивирования клеток рака простаты человека,или -145, для анализа выживания опухолевых клеток. Клетки рака простаты человекаили -145 культивировали по отдельности в средах, содержащих эмбриональную телячью сыворотку, в течение 24 часов. Пролиферировавшие клетки отмывали один раз ФБР, затем обрабатывали 1 х трипсин-ЭДТА и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость отбрасывали,а осадок клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды для культивирования при легком встряхивании. Клетки помещали в 96-луночный планшет. Этанольные экстракты(контрольная группа, общие экстрактыбез очистки) или 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2 енон (экспериментальная группа) добавляли в каждую из 96 лунок со следующей концентрацией 30, 10, 3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл соответственно. Клетки инкубировали при 37 С в 52 инкубаторе в течение 48 часов.добавляли с концентрацией 2,5 мг/мл в каждую лунку в темноте и инкубировали в течение 4 часов, с последующим добавлением 100 мкл литического буфера для остановки реакции. Планшеты анализировали на ИФА-ридере при длине волны 570 нм для определения уровня выживания. Значения концентрации полуингибирования (50) подсчитывали и указывали в табл. 5. 16211 1 2012.08.30 Таблица 5 Результаты анализа выживаниядля подавления клеток рака простаты Образцы 50(мкг/мл) Контрольная группа (экстракт из)-145 1,812 Из результатов табл. 5 видно, что 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон является мощным ингибитором роста клеточной линии рака простаты человека. Значения 50 4-гидрокси-2,3-диметокси-6 метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона дляи -145 составляют 2,378 и 1,812 мкг/мл соответственно, что значительно ниже, чем у общих экстрактов из. Таким образом, 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон изможно применять для подавления роста клеток рака простаты. Пример 7 Дополнительное исследованиепо адъювантной терапии клеток рака простаты. Эксперимент также проводили в соответствии смоделью скрининга противораковых лекарств . Клетки рака простаты человекаи -145 культивировали по отдельности в средах, содержащих эмбриональную телячью сыворотку, в течение 24 часов. Пролиферировавшие клетки отмывали один раз ФБР, затем обрабатывали 1 х трипсин-ЭДТА и центрифугировали при 1200 об/мин в течение 5 минут. Надосадочную жидкость отбрасывали, а осадок клеток ресуспендировали в 10 мл свежей среды для культивирования при легком встряхивании. Клеткиобрабатывали 0,0017 мг/мл Таксола в течение 72 часов, а -145 обрабатывали 0,0043 мг/мл Таксола в течение 72 часов,перед помещением в 96-луночный планшет. 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11 триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енон, полученный в примере 1, добавляли в каждую из 96 лунок в следующих концентрациях 0 мкг/мл (контрольная группа) 30, 10,3, 1, 0,3, 0,1 и 0,03 мкг/мл (экспериментальная группа) соответственно. Клетки инкубировали при 37 С в 52 инкубаторе в течение 48 часов.добавляли с концентрацией 2,5 мг/мл в каждую лунку в темноте и инкубировали в течение 4 часов, с последующим добавлением 100 мкл литического буфера для остановки реакции. Планшеты анализировали на ИФА-ридере при длине волны 570 нм для определения уровня выживания. Значения концентрации полуингибирования (50) подсчитывали и указывали в табл. 6. Таблица 6 Результаты дополнительной терапии Таксоломклеток рака простаты Образцы Результаты Контрольная группа Уровень выживания клеток(0,0017 мкг/мл Таксола) 563-145 (0,0043 мкг/мл Таксолаформула 2) 0,515 Из результатов табл. 6 видно, что значения 50 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона для клеток рака простаты человекаи -145 снизились до 0,961 и 0,5158 мкг/мл соответственно после комбинации с Таксолом. Таким образом, эти результаты подтверждают ингибиторную активность 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2 енона иза, который можно применять для подавления роста клеток ра 10 16211 1 2012.08.30 ка простаты, и показывают лучшую противоопухолевую синергетическую активность при комбинации с Таксолом. Пример 8 Исследование антиоксидантной активности. Человеческий липопротеин низкой плотности , окисленный ионом меди (2),широко применяют для оценки антиоксидантной активности анализируемых образцов. Антиоксидантную активность образца определяют по содержанию диенов впосле окисления и выражают в эквивалентах Тролокса с применением стандартной кривой, рассчитанной по водорастворимому стандарту витаминаТролоксу (значение 1 антиоксидантной активности соответствует 2 мкМ Тролокса). Вначале готовили следующие растворы бидистиллированную воду (отрицательная контрольная группа), 5 мМ натрий-фосфатный буфер (НФБ), 1 и 2 мкМ раствор Тролокса(положительная контрольная группа) и 40 мкг/мл 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2-енона, выделенного в примере 1. Концентрацию холестерина(-) определяли с применением метода ферментативной реакции, готовя разведения до 0,1-0,25 мг/мл с помощью 5 мМ НФБ. Одну сотую мклдобавляли в каждую лунку 96-луночного кварцевого планшет, с последующим добавлением вышеупомянутого Тролокса и соединения, выделенного в примере 1. Чтобы индуцировать окисление, добавляли стандартизированный окисляющий агент 4, до конечной концентрации 5 мкМ в каждую 250 мкл лунку. Планшет анализировали на ИФА-ридере при длине волны 232 нм, при 37 С в течение 12 часов. Время отбора пробы составило 15 минут. Результаты показаны в табл. 7. Таблица 7 Результаты исследования антиоксидантной активностиЗначения Образцы(мин)(мин) активности Отрицательный контроль 2 (0) 185 Положительный контроль 1 мкМ Тролокс 266 81 0,48 2 мкМ Тролокс 344 159 1,00 Экспериментальная группа 40 мкг/мл формулы 1 439 208 1,30 Замечание 1 Время лаг-фазы (, мин) определяли как пересечение лаг-фазы с фазой распространения поглощения при 234 нм.(мин) определяли как разницу во времени междуи 0 для каждого образца. Замечание 2 Считается, что соединение обладает антиоксидантной способностью, когда значение антиоксидантной активности больше 0,5. Из результатов табл. 7 видно, что значение антиоксидантной активности 4-гидрокси-2,3-диметокси-6-метил-5-(3,7,11-триметилдодека-2,6,10-триенил)циклогекс-2 енона составляет 1,3, что гораздо больше стандартного значения 0,5. Таким образом, соединения изобретения обладают антиоксидантной активностью, что может быть использовано для здорового питания, диет и напитков, медицинских продуктов и косметики, и оказывают значительные благоприятные эффекты в отношении здоровья человека благодаря способности к профилактике сердечно-сосудистых заболеваний или мутации клеток. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 11