Биологический стимулятор для животных и способ его изготовления

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ БИОЛОГИЧЕСКИЙ СТИМУЛЯТОР ДЛЯ ЖИВОТНЫХ И СПОСОБ ЕГО ИЗГОТОВЛЕНИЯ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(72) Авторы Объедков Георгий Антонович Сюсюкин Василий Андреевич(умерший) Борознов Святослав Леонидович Глушенкова Татьяна Александровна Седлецкий Григорий Иванович(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии имени С.Н.Вышелесского(56) ПЕРЕДЕРА Б.Я. Препараты крови. Киев Урожай, 1980. - С. 63-79. ГУРОВ В.А. и др. Справочник по производству органопрепаратов. - М. Пищевая промышленность, 1970. С. 39-44.5565198 , 1996.851777, 1960.59-134728 А, 1984.12919 , 2003.2033179 1, 1995.2013950 1, 1994.2089181 1, 1997. БОРОЗНОВ С.Л. и др. Ветеринарная медицина Беларуси. - 2004. -2. С. 31-32.(57) 1. Биологический стимулятор для животных, включающий белки, углеводы, липиды,гормоны, кальций, фосфор, магний, натрий, калий, железо, медь, цинк и воду дистиллированную, отличающийся тем, что в качестве гормонов содержит прогестерон, 17- прогестерон, эстрадиол, тестостерон и кортизол и дополнительно содержит марганец и кобальт при следующем соотношении компонентов на литр биостимулятора белки, кг(0,055-0,065)10-9 вода дистиллированная остальное,при этом белок включает следующие ферменты, кат/л биологического стимулятора аспартатаминотрансфераза(0,025-0,035)10-6. 2. Способ изготовления биологического стимулятора для животных по п. 1, включающий термическую обработку сырья, в качестве которого используют яичники половозрелых свиней, путем замораживания при температуре 20 С и размораживания при 20 С в течение 4,0-4,5 ч, экстракцию, стабилизацию и стерилизацию сырья в растворе, состоящем из дистиллированной воды, хлорида натрия, этилового спирта, нейтрального трехатомного спирта, карболовой кислоты и едкого натра при их соотношении 511111, в течение 3 суток при постоянном взбалтывании и температуре 19-25 С, центрифугирование при 2000-2300 об/мин в течение 25-30 мин и фильтрацию центрифугата на фильтре с размером пор 1,0-2,5 мк. Изобретение относится к биологическим стимуляторам, способам их изготовления(технологии) и может найти применение в биологической промышленности и ветеринарии для стимуляции отдельных физиологических систем и всего организма в целом в целях профилактики болезней и повышения продуктивности животных. Известны биогенные (тканевые) стимуляторы, представляющие собой вещества сопротивления. Биогенные стимуляторы из тканей в той или иной степени активизируют функциональные отправления всего организма 1. Они обладают рядом недостатков, обусловленных сложностью химического состава,неопределенностью основного действующего вещества, трудностями дозирования при разных способах введения в организм (пероральный, оральный). Известны биостимуляторы, в которых действующим началом являются гормоны агофоллин, сыворотка жеребых кобыл (СЖК). Агофоллин - искусственно синтезированный гормон из группы женских половых гормонов - эстрогенов. Агофоллин - прозрачная жидкость желтого или желто-зеленого цвета. По химическому составу это эстрадиола дипропинат 1 мг в 1 мл. Не содержит никаких побочных химических примесей. Агофоллин стимулирует половые органы самок, способствует пролиферации эндометрия, образованию цервикальной слизи, тонизирует миометрий, вызывает внешние признаки течки, а также стимулирует синтез белков, отложение гликогена и некоторых минералов в организме 2. Этот препарат имеет недостатки, заключающиеся в скорости ответной реакции, в том числе ложной охоты с осеменением без оплодотворения, преждевременной овуляции и оплодотворением с последующим абортом или мертворождением. Это импортный и дорогостоящий препарат, который не производится в республике Беларусь. Наиболее близким аналогом является СЖК - жидкая часть крови, не содержащая фибрина, форменных элементов, состоящая из воды (90-92 ) и сухого вещества (8-10 ). В состав последнего входят органические вещества (белки альбумины, глобулины, антитела, иммунные тела, полипептиды аминокислоты тирозин - 3,54 , триптофан - 1,37 ,лизин - 8,8 , серин - 2,1 , гистидин - 3,3 , сиаловая кислота ферменты, гормоны,пигменты, глюкоза, витамины, жирные кислоты и др.) и минеральные вещества (К, , , , , , , 2 и др.) 3. 2 11624 1 2009.02.28 В сыворотке жеребых кобыл имеются гонадотропные гормоны - фолликулстимулирующий (ФСГ) и лютенизирующий (ЛГ). СЖК имеет ряд недостатков гонадотропные гормоны определены лишь качественно в виде двух групп, одна из которых называется фолликулостимулирующими (ФСГ), вторая - лютеностимулирующими (ЛГ) без расшифровки их на женские и мужские, стероидные, белковые и тем более, без количественного содержания каждого из стероидных гормонов, что затрудняет их дозирование содержание лишних компонентов, в том числе альбуминов, глобулинов, антител, иммунных тел, полипептидов, аминокислот, пигментов, жирных кислот, серы, 2, хлора,что обуславливает аллергические реакции отсутствие в составе ферментов, необходимых для катализа обменных процессов возможность кистозных перерождений при применении больших доз СЖК 4 отсутствие в Беларуси возможности изготовления СЖК в промышленных масштабах,вследствие отсутствия развитого коневодства и коннозаводства. Изготовление СЖК требует содержания в одном месте 100-300 кобыл, кровь от которых надо брать в особый, узкий период беременности, что требует дополнительных мероприятий по синхронизации их охоты, осеменений и оплодотворения, всей работы по изготовлению СЖК обязательность антигуманного и экологически вредного акта, связанного с взятием крови у жеребых кобыл, обуславливающего ухудшение внутриутробного питания плода с возможной его гибелью и абортом. Сыворотка жеребых кобыл, имеющая недостатки и являющаяся импортным (Россия,Германия) дорогостоящим биостимулятором, не в состоянии удовлетворить потребности животноводства Беларуси в этом виде ветеринарных препаратов. Известные способы получения биостимуляторов не позволяют получить заявляемый биологический стимулятор для животных нужной степени экстракции, очистки, стабилизации. Известен способ изготовления сыворотки жеребых кобыл (СЖК), получаемой путем цетрирования крови, получения плазмы, дефибринирования плазмы, консервирования сыворотки 5. Способ имеет ряд недостатков необходимость наличия жеребых кобыл с конкретными сроками беременности трудности процедуры взятия крови из яремной вены у лошадей реальность травмирования жеребых кобыл, прерывание беременности, гибели плода,аборта необходимость трудновыполнимой процедуры дифибринирования крови длительные сроки изготовления сыворотки крови из нативной крови. В связи с указанными недостатками и высокой экономической стоимостью способ изготовления СЖК не нашел практического применения в Республике Беларусь. Известен способ изготовления биогенных (тканевых) стимуляторов по В.П. Филатову,заключающийся в измельчении тканей, выдерживании при температуре 2-4 С, фильтрации, автоклавировании 6. Указанный способ имеет ряд недостатков не обеспечивается изготовление специфического стимулирующего вещества в очищенном виде высокая экономическая стоимость способа изготовления. По указанным причинам способ изготовления биогенных (тканевых) стимуляторов не нашел применения в Беларуси. Известен способ изготовления биостимулятора, содержащего гонадотропины, включающий термическую обработку сырья, измельчение, экстракцию, стабилизацию, фильтрацию, стерилизацию с применением экстрагента, состоящего из 50 спирта, по этапам 7 1) сбор сырья (яичники коров) - источников гонадотропинов 3 11624 1 2009.02.28 2) термическая обработка путем замораживания при температуре 02 С в течение 2 суток 3) измельчение на куски, изготовление фарша 4) экстрация первая фарша в экстрагенте, состоящем из 50 спирта при 5,6 в течение 5 суток при комнатной температуре 5) фильтрация первая на фильтре из 3 слоев марли. В результате получается фильтрат 1 и жмых 1 6) экстракция вторая в новой порции экстрагента жмыха 1 в течение 3 суток 7) фильтрация вторая на фильтре из 3 слоев марли. В результате получается фильтрат 2 и жмых 2 8) объединение фильтрата 1 и 2 9) стерилизация объединенного фильтрата на фильтре Зельца или Сальникова 10) разлив, укупорка, фасовка. Указанный способ имеет ряд недостатков использование химреактивов, вредно влияющих на животных при подкожном и внутримышечном введении большая длительность технологического процесса эксплуатация дорогостоящего оборудования (фильтр Зельца или Сальникова) потеря активности гонадотропинов в процессе стерилизации высокая себестоимость способа изготовления. Задачей предлагаемого изобретения является создание биологического стимулятора для животных, сбалансированного по химическому составу с максимально низким количеством белка, преимущественным содержанием женских и мужских стероидных гормонов, очищенный от углеводных, жировых, пигментных, минеральных компонентов для стимуляции физиологических функций, обмена веществ и продуктивности животных и разработка способа его изготовления с использованием легкодоступного дешевого отечественного сырья, а также усовершенствование способа изготовления за счет использования естественного сырья - яичников свиней, как более активных продуцентов стероидных гормонов экстрагента с целью более полной экстракции гормонов его очистки от высокомолекулярных белков, жиров, углеводов при сохранении женских и мужских стероидных гормонов способа стабилизации и стерилизации, обеспечивающих лучшую сохранность гормонов удешевление способа изготовления биологического стимулятора для животных. Поставленная задача достигается тем, что в биостимуляторе для животных, содержащем белки, углеводы, липиды, гормоны, кальций, фосфор, магний, натрий, калий, железо,медь, цинк и воду дистиллированную, в качестве гормонов содержатся прогестерон, 17 ОН прогестерон, эстрадиол, тестостерон, кортизол, и дополнительно содержит марганец и кобальт при следующем соотношении компонентов на литр биостимулятора белки, кг(0,055-0,065)10-9 вода дистиллированная остальное,при этом белок включает следующие ферменты, кат/л биологического стимулятора аспартатаминотрасфераза(0,025-0,035)10-6. Кроме того, поставленная задача решается тем, что в способе изготовления биологического стимулятора для животных, включающего термическую обработку сырья, в качестве которого используют яичники половозрелых свиней, путем замораживания при температуре 20 С и размораживания 20 С в течение 4,0-4,5 ч, экстракцию, стабилизацию и стерилизацию сырья в растворе, состоящем из дистиллированной воды, хлорида натрия,этилового спирта, нейтрального трехатомного спирта, карболовой кислоты, едкого натра при их соотношении 511111, в течение 3 суток при постоянном взбалтывании при температуре 19-25 С, центрифугирование при 2000-2300 об/мин в течение 25-30 мин и фильтрацию центрифугата на фильтре с размером пор 1,0-2,5 мк. Прогестерон - это основной гормон желтого тела, эндокринной железы, развивающийся в яичнике из фолликула после высвобождения яйцеклетки (овуляции). Прогестерон функционирует как гормон, необходимый для поддержания беременности и, кроме того,наряду с эстрогенами он участвует в регуляции менструального цикла 8. 17-ОН прогестерон - простагландин, который регулирует активность мускулатуры матки 9. Эстрадиол - наиболее активный из эстрогенов (женских половых гормонов). Физиологическое действие эстрогенов обеспечивает развитие, дифференцировку и функциональную активность органов размножения самок, стимулирует рост и развитие фолликулов,повышает чувствительность яичников к действию гонадотропинов 10. Тестостерон - основной мужской половой гормон, который служит предшественником женских половых гормонов, обладает также общей анаболической активностью 11. Кортизол - это глюкокортикоид, стимулирующий глюконеогенез и накопление глюкогена в печени. В мышцах и других тканях кортизол ингибирует синтез белка, а в жировой ткани усиливает расщепление жиров с освобождением жирных кислот, а также обладает антивоспалительным действием 12. Аспартатаминотрасфераза- фермент, который регулирует процессы метаболизма углеводов и аминокислот в сердце, печени, мышцах, почках, поджелудочной железе, который, согласно международным требованиям, выражается в единице измерения катал (кат), представляющей собой количество фермента, которое катализирует превращение 1 моль субстрата в продукт за 1 с 13. Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) - фермент, который катализирует гидролиз мочевины(расщепляет в белках и пептидах пептидные связи), который, согласно международным требованиям, выражается в единице измерения - катал (кат), представляющей собой количество фермента, которое катализирует превращение 1 моль субстрата в продукт за 1 с 14. Кислые и щелочные фосфатазы представляют собой неспецифические ферменты, которые способны большое число различных эфиров фосфорной кислоты 15. Щелочная фосфатаза - фермент, который участвует в метаболизме (распаде) гликогена, обеспечивая клетку энергией, который, согласно международным требованиям, выражается в единице измерения катал (кат), представляющей собой количество фермента, которое катализирует превращение 1 моль субстрата в продукт за 1 с. 5 11624 1 2009.02.28 Натрий и калий участвуют в осморегуляции, входят в состав буферных систем крови и биологических жидкостей, поддерживая этим постоянство внутренней среды организма. Они способствуют генерации биотоков и передаче импульсов по нервно-мышечным волокнам, кроме того, стимулируют действие отдельных ферментов 16. Кальций входит в состав скелета и имеет исключительно важное биологическое значение. Он понижает нервную возбудимость, стимулирует деятельность сердца, уменьшает связывание воды тканевыми коллоидами, участвует в свертывания крови и молока, активирует и тормозит определенные ферменты 17. Магний входит в состав костей, активирует ферменты, необходимые при мышечных сокращениях. Магний повышает защитные функции организма, активируя биосинтез защитных белков - иммуноглобулинов. Ионы магния стимулируют активность некоторых ферментов 18. Фосфор входит в костяк, в состав белков (нуклеиновых кислот), липидов фосфорных эфиров углеводов и триозофосфатов. Фосфор участвует в синтезе нуклеиновых кислот,гликолизе и гликогенолизе, окислении жирных кислот, глицерина 19. Железо входит в состав чрезвычайно важных в биологическом отношении органических соединений (гемоглобина крови, миоглобина, каталазы, цитохромов). Основное количество железа (около 70 ) у человека и животных сконцентрировано в эритроцитах крови 20. Кобальт стимулирует процессы распада углеводов и активирует фосфоглюкомутазу,аргиназу, влияет на белковый обмен, на отложение фосфора в костях, стимулируя действие костной фосфатазы, содержится в витамине В 12, недостаток которого ограничивает биосинтез и вызывает авитаминоз 12, сопровождающийся анемией 21. Марганец играет роль активатора окислительного фосфорилирования и входит в состав ферментов - фосфоглюкомутазы, енолазы, фосфофруктокиназы, аргиназы, дипептидазы,фосфатазы 22. Он участвует в окислительно-восстановительных процессах, тканевом дыхании, костеобразовании. Медь участвует в образовании простетической группы енолазы, оксидаз, цитохромоксидазы, тирозиназы и других ферментов стимулирует кроветворение и биосинтез антител 23. Цинк входит в состав коферментов кокарбоксилаз, карбооксипептизаз, алкогольдегидрогеназы, активирует деятельность гормонов гипофиза и половых гормонов. Входит в состав фермента карбоангидразы и гормона инсулина и тем самым играет важную роль в промежуточном обмене углеводов 24. Микроэлементы, находясь в организме в связанном на уровне полипептидов и белков состоянии, не могут связываться между собой ни в какие химические реакции. Из перечисленных составных частей биостимулятора для животных только стероидные гормоны обуславливают стимулирующее действие. Гормоны циркулируют в крови животных в очень малых количествах стероидные гормоны - в концентрациях не более 10-9 М,пептидные и белковые гормоны - в концентрациях не более 10-12 М 25. Указанные количества гормонов определены опытным путем. Эти концентрации гормонов позволяют выделить принятый способ изготовления. Меньших значений концентрации гормонов мы не получали. Больших значений мы также не получали. Получение меньших значений концентрации гормонов грозит потерей активности препарата. Получение больших значений концентрации гормонов возможно лишь при другом способе получения. Указанный диапазон концентрации гормонов, белков, ферментов, макро- и микроэлементов и характеризует оптим, обеспечивающий стимуляцию без вторичных иммунных реакций в виде сенсибилизации и аллергии. Способ получения биологического стимулятора для животных осуществляется следующим образом термическая обработка сырья, измельчение, экстракция, стабилизация,фильтрация, стерилизация, причем в качестве сырья берут яичники половозрелых свиней и осуществляют термическую обработку при температуре 2020 С в течение 4,0-4,5 ч,6 11624 1 2009.02.28 затем сырье экстрагируют, стабилизируют и стерилизуют в растворе, состоящем из дистиллированной воды с добавлением хлорида натрия, этилового спирта, нейтрального трехатомного спирта, карболовой кислоты, едкого натра, в соотношении 511111, в течение 3 суток при постоянном взбалтывании при температуре 19-25 С, после этого осуществляют центрифугирование при 2000-2300 об/мин в течение 25-30 мин, затем полученный центрифугат фильтруют на фильтре с размером пор 1-2,5 мк. В отличие от прототипа способа получения, в заявляемом способе указанные соотношения химических веществ раствора обеспечивает экстракцию (выход) клеточного содержимого из измельченного сырья с нарушенной структурой клеточных мембран клеток,достигаемой быстрым размораживанием, экстрагирующим действием дистиллированной воды в соответствии с известным свойством вода всегда проникает (поступает) в сторону большей концентрации этилового спирта, как органического растворителя. Стабилизация препарата обеспечивается присутствием нейтрального трехатомного спирта. Стерилизация препарата обеспечивается двойной фильтрацией и добавлением кислоты и щелочи. Разлив раствора осуществляется в стерильные флаконы в стерильном боксе. Пример 1. Этап 1. Отбор исходного сырья - яичники половозрелых свиней. Этап 2. Термическая обработка путем замораживания при температуре 20 С и размораживания при температуре 20 С. Этап 3. Измельчение яичников до состояния фарша. Этап 4. Приготовление экстрагента, состоящего из дистиллированной воды с добавлением хлорида натрия, этилового спирта, нейтрального трехатомного спирта, карболовой кислоты, едкого натра, в соотношении 511111. Этап 5. Экстракция, стабилизация и стерилизация осуществляется в течение 3 суток при постоянном взбалтывании при температуре 19-25 С в приготовленном экстрагенте. Этап 6. Центрифугирование при 2000-2300 об/мин в течение 25-30 мин. Этап 7. Отделение центрифугата от осадка и его фильтрация на фильтре с размером пор 1,0-2,5 мк. Этап 8. Разлив фильтрата в стерильные флаконы. Этап 9. Укупорка, вальцовка, фасовка. В результате получается препарат со следующими параметрами. Таблица 1 Параметры биостимулятора для животных Наименование показателей 1. Внешний вид 2. Прозрачность 3. Цвет 4. Запах 5. Концентрация водородных ионов 6. Стерильность 7. Безвредность 8. Масса белка, мг 9. Гиперчувствительность (аллергия) немедленного типа 10. Гиперчувствителъность (аллергия) замедленного типа 11. Стимулирующая активность,Характеристика нормы Жидкость. На дне флакона может образовываться легко разбивающийся осадок прозрачная светло-желтый без запаха 6,00,5 стерильная безвредная 0,80,13 не вызывает не вызывает 51 в 1 мл 11624 1 2009.02.28 Активность сыворотки жеребых кобыл (ее титр) также измеряют в международных единицах . Но в отличие от заявляемого биостимулятора для животных, сыворотка жеребых кобыл, имеющая титр (гонадотропная активность в 1 мл) менее 60 , для применения не пригодна 26. Таким образом, биологический стимулятор для животных и способ его изготовления обеспечивает получение биопрепарата, соответствующего современным требованиям к биологическим стимуляторам. Пример 2. Сравнительное испытание разных биологически активных препаратов проводилось при гипофункции яичников у коров в СПК Гастелловское и СПК Озерицкий (табл. 2). Заявленные ингредиенты использовались в количественном соотношении, приведенном в примере 1. Таблица 2 Результаты сравнительного опыта по испытанию стимулирующего действия различных препаратов при гипофункции яичников у коров к-во коров, пришедших в охоту в течение первого месяца стимуляции животных кол-во коров(базовый вариант) Биостимулятор для животных 2 20 мл в течение 3 дней (заявляемый образец) СПК Озерицкое Биостимульгин (четырехкратно,1 по 30 и 10 мл по наставлению) 10(базовый вариант) АСД-2 - 2,0 мл Тривитамин - 8 мл (внутримы 2 24 шечно 1 раз в неделю, в течение 3 недель) (базовый вариант) СЖК в дозе 2500-3000(ба 3 25 зовый вариант) Биостимулятор для животных 4 по 20 мл в течение 3 дней (300 Как видно из материалов таблицы, биостимулирующая активность составила биостимульгина - 40,0 , АСД с тривитамином 62,5 , агофолинвитамин ЕАСД-2 - 42,1 ,СЖК - 44 , биостимулятора для животных - 65,0 . Пример 3. Изучение стимуляции половой охоты биостимулятором для животных у коров при гипофункциях проводилось в хозяйствах Минской области. Заявленные ингредиенты использовались в количественном соотношении, приведенном в примере 1. 8 11624 1 2009.02.28 Таблица 3 Результаты изучения стимуляции половой охоты биостимулятором для животных у коров при гипофункциях в хозяйствах Минской областип/п 1. К-во стиму- К-во коров, пришедших в охоту Стимулилированных в течение первого месяца после рующая аккоров применения биостимулятора тивность ,67 Ф-л Крион-Агро 60 20 33,0 УП Демидовичи 131 82 63,0 Ф-л Минский Мясо 4. 70 34 49,0 комбинат-Агро 5. СЗАО Негорельское 16 9 56,0 6. СПК Озерицкий 20 13 65,0 7. АК Ждановичи 19 14 73,5 Таким образом, в заявляемом биостимуляторе для животных и способе его изготовления достигнута сбалансированность содержания эстрогенов и андрогенов, микро- и макроэлементов, ферментов за счет выбора сырья, заявленных компонентов и их параметров,режимов изготовления биостимулятора для животных, обеспечивающих в итоге оптимальное соотношение гормонов, их проникновение в клетки органов и тканей по принципу тропизма, т.е. в клетки органов и тканей, имеющих специфические рецепторы к соответствующим гормонам, что обеспечивает стимуляцию синтеза аминокислот и белков в клетке, рост и функциональную активность яичников, их фолликулов, клеток и тканей других органов. 2. 3. Источники информации 1. Мозгов И.Е., Фармакология. - . Колос, 1974. - С. 285. 2. Борознов С.Л. и др. Об испытании гормональной активности экспериментального образца биопрепарата овостим // Ветеринарная медицина Беларуси. -2(14). - 2004. С. 31-32. 3. Передера Б.Я. Препараты крови. - Киев Урожай, 1980. - С. 64-65 (прототип). 4. Передера Б.Я. Препараты крови. - Киев Урожай, 1980. - С. 79. 5. Передера Б.Я. Препараты крови. - Киев Урожай, 1980. - С. 16-17, 31. 6. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М. Мир, 1980. - С. 584. 7. Справочник по производству органопрепаратов. - М. Пищевая промышленность,1970. - С. 40-42 (прототип). 8. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М. Мир, 1980. - С. 584. 9. Вили К., В. Детье. Биология. - М. Мир, 1975. - С. 553-554. 10. Журбенко А.М Гормоны и продуктивность животных. - Киев Урожай, 1983. - С. 36. 11. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М. Мир, 1980. - С. 589-590. 12. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М. Мир, 1980. - С. 585. 13. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М. Мир, 1980. - С. 8-9. 14. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М. Мир, 1980. - С. 8, 115. 15. Мецлер Д. Биохимия. Т. 2. - М. Мир, 1980. - С. 8, 119. 16. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. - М. Агропромиздат, 1985. - С. 15. 17. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. М. Агропромиздат, 1985. - С. 15. 9 11624 1 2009.02.28 18. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. М. Агропромиздат, 1985. - С. 16. 19. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. М. Агропромиздат, 1985. - С. 16. 20. Сорвачев К.Ф Биологическая химия. - М. Просвещение, 1971. - С. 421. 21. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. М. Агропромиздат, 1985. - С. 17. 22. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. М. Агропромиздат, 1985. - С. 17. 23. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. М. Агропромиздат, 1985. - С. 16. 24. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии Справочное издание. М. Агропромиздат, 1985. - С. 17. 25. Вили К., В. Детье. Биология. - М. Мир, 1975. - С. 559. 26. Передера Б.Я. Препараты крови. - Киев Урожай, 1980. - С. 70-73. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 10