Способ профилактики колибактериоза

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(72) Авторы Гусев Анатолий Алексеевич Новикова Оксана Николаевна Ломако Юрий Васильевич(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(57) Способ профилактики колибактериоза у телят или поросят, при котором в качестве раствора для внутримышечных инъекций используют композицию, содержащую тритерпеновые сапонины, формальдегид, натрия хлорид и дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, мас.тритерпеновые сапонины 0,03-0,05 формальдегид 0,05-0,07 натрия хлорид 0,80-0,85 дистиллированная вода остальное,которую вводят в 20-дневном возрасте телятам по 3,0 мл или поросятам по 1,0 мл один раз в сутки с интервалом 24 ч двукратно с повторным введением через 7-10 суток по аналогичной схеме. Изобретение относится к области ветеринарии, может быть использовано в качестве способа профилактики факторных заболеваний инфекционной этиологии, например колибактериоза поросят и телят. Известна специфическая профилактика колибактериоза путем вакцинации животных инактивированными вакцинами против колибактериоза крупного рогатого скота и свиней 1. Недостатком этого способа является то, что бактериальные штаммы . , содержащиеся в вакцине, не всегда идентичны бактериальным штаммам, циркулирующим в хозяйствах Республики Беларусь, что существенно снижает эффективность специфической профилактики. Задачей заявляемого изобретения является разработка способа профилактики колибактериоза, позволяющего использовать препараты, выпускаемые отечественной фармацевтической промышленностью. 18393 1 2014.08.30 Поставленная задача достигается при использовании композиции в виде раствора для внутримышечных инъекций, содержащей тритерпеновые сапонины, формальдегид, натрия хлорид и дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов, мас.тритерпеновые сапонины 0,03-0,05 формальдегид 0,05-0,07 натрия хлорид 0,80-0,85 дистиллированная вода остальное,которую вводят внутримышечно в 20-дневном возрасте телятам по 3,0 мл или поросятам по 1,0 мл один раз в сутки с интервалом 24 ч двукратно с повторным введением через 7-10 суток по аналогичной схеме. Кроме того, поставленная задача достигается за счет того, что иммуностимулирующий препарат дополнительно содержит тритерпеновые сапонины, которые при взаимодействии с холестерином клетки формируют поры в двойных слоях мембраны клетки в результате чего повышается биологическая доступность молекул формальдегида, которые при проникновении в клетку модулируют внутриклеточные процессы метаболизма 2,т.е. наблюдается новое свойство заявляемого препарата в результате синергитического эффекта. Кроме того поставленная задача достигается за счет применения отработанных мас.соотношений заявляемых компонентов, которое выражается в снижении эффективности применения заявляемого препарата при уменьшении заявленных соотношений мас. , а при увеличении заявленных соотношений мас.появляется отрицательный эффект в виде гемолитического эффекта - разрушение эритроцитов (табл. 1, 3, 4, 5). Таблица 1 Изучение гематологических показателей у поросят Доза преГруппа жи- парата, Эритроциты, Гемато- Гемоглобин, Тромбоци- Лейкоцивотных мл/10 кг 1012/л крит ммоль/л ты, 109/л ты, 109/л массы тела Препарат 1,0 4,30,8 0,250,03 8,31,6 367,869,4 11,22,5 Препарат 2,0 3,60,6 0,200,05 7,60,9 355,873,1 12,93,1 Препарат 3,0 3,240,4 0,190,03 6,41,2 327,884,5 10,22,7 Без обраКонтроль 4,50,5 0,290,04 8,51,5 322,853,2 12,83,2 ботки Примечание- при 0,05,- при 0,01. Тритерпеновые сапонины - высокомолекулярные сложные органические соединения гликозидного характера, растворяются в воде с образованием коллоидных растворов,уменьшают величину поверхностного натяжения и, подобно мылу, образуют пену, способствуют повышению проникающей способности клеточных мембран 3, 4. Кроме того, для тритерпеновых сапонинов характерно адаптогенное, антиоксидантное, противовоспалительное, противоопухолевое действие 4. Формальдегид - первый представитель класса альдегидов . Представляет собой бесцветный газ с резким запахом, мол. массой 30,03, плотность его при 20 С равна 0,815,температура плавления 92 С температура кипения 19,2 С. Хорошо растворим в воде,спирте. В чистом виде легко полимеризуется, образуя параформальдегид, и используется в качестве биологического модулятора обменных процессов в клетке 2, 5. Натрия хлорид - кубические кристаллы или белый кристаллический порошок соленого вкуса, без запаха. Растворим в воде (13). Используется в качестве образующего компонента для физиологического раствора 6. Дистиллированная вода - 2, бесцветная прозрачная жидкость без запаха и вкуса,используется в качестве растворителя 7. 18393 1 2014.08.30 Пример 1. Приготовления композиции. Композиция содержит активнодействующие тритерпеновые сапонины, формальдегид,натрия хлорид и дистиллированную воду при следующем соотношении ингредиентов,мас.тритерпеновые сапонины 0,03-0,05 формальдегид 0,05-0,07 натрия хлорид 0,80-0,85 дистиллированная вода остальное,причем берут 99,0-98,9 мл дистиллированной воды, к которой добавляют 0,80-0,85 г хлорида натрия, что соответствует 0,80-0,85 мас.в конечном объеме раствора препарата,0,03-0,05 г тритерпеновых сапонинов, что соответствует 0,03-0,05 мас.в конечном объеме раствора препарата, далее его стерилизуют при 100 С в течение 5-7 мин, раствор охлаждают до 30-35 С и в стерильный раствор добавляют 0,14-0,19 мл формалина с содержанием 37-40 формальдегида, конечная концентрация формальдегида в 100 мл препарата составляет 0,05-0,07 мас. , доводятраствора до значения 5,0-7,0, затем раствор перемешивают в течение 10-20 мин при температуре 10-40 С при скорости мешалки 100-150 об/мин до получения раствора однородного цвета, который вводят внутримышечно в 20-дневном возрасте телятам по 3,0 мл или поросятам по 1,0 мл один раз в сутки с интервалом 24 ч двукратно с повторным введением через 7-10 суток по аналогичной схеме. Стабильность физико-химических свойств инъекционной композиции изучали с использованием метода ускоренного старения, путем повышения температуры хранения препарата на 15 С 8. Результаты изучения стабильности заявляемого препарата представлены в табл. 2. Таблица 2 Результаты изучения органолептических, физико-химических и биологических показателей композиции в зависимости от показателя концентрации водородных ионов раствора Наименование показателя Показатель концентрации водородных ионов , единицы 4,0 1. Внешний вид,Прозрачная бесцветная или цвет, запах,светло-соломенного цвета, опаналичие осадка и лесцирующая жидкость без механических осадка и без запаха, при встряпримесей хивании которой наблюдается пенообразование. Допускается наличие механических примесей в 3 от общего количества флаконов в партии 2. Стерильность должен выдерживать испытание 3. Массовая доля тритерпеновых 0,03-0,05 сапонинов,4. Подлинность содержания тридолжен выдерживать испытание терпеновых сапонинов Продолжение таблицы 2 Показатель концентрации водородных ионов , единицы 4,0 5,0-7,0 8,0 5. Подлинность должен выдерживать испывыдержисодержания выдерживает выдерживает тание вает формальдегида 6. Массовая доля формальдеги 0,05-0,07 0,055 0,055 0,055 да,7. Безвредность препарат не должен вызывать гибель и признаки заболеваний у клинически нетоксинетоксичен нетоксичен здоровых белых мышей при чен его однократном введении под кожу в объеме 0,30 см 3 Пример 2. Способ профилактики факторных заболеваний инфекционной этиологии, например колибактериоза поросят и телят, с помощью композиции. Способ профилактики факторных заболеваний инфекционной этиологии, например колибактериоза поросят и телят, осуществляют с помощью композиции. Испытание композиции проводили в хозяйствах, неблагополучных по колибактериозу. Диагноз на колибактериоз поставлен на основании заключения бактериальной экспертизы. С профилактической целью композицию в виде инъекционного раствора вводили телятам и поросятам внутримышечно в 20-дневном возрасте телятам в объеме - 2,0, 3,0,4,0 мл, а поросятам - 0,5, 1,0, 2,0 мл один раз в сутки с интервалом 24 ч двукратно, с повторным введением через 7-10 суток по аналогичной схеме. Контрольная группа - интактные животные. Таблица 3 Перевод объемных единиц композиции (мл) в весовые единицы (г) Количество активнодействующих веществ, г Объем инъекционного раствора, мл Тритерпеновые сапонины Формальдегид 0,5 2,510-4 3,510-4-4 4,0 14,010 28,010-4 Полученные результаты по эффективности профилактики колибактериоза у телят и поросят с помощью заявляемого способа представлены в табл. 4, 5. Таблица 4 Эффективность профилактики колибактериоза у телят Кол-во жиЗаболело Выздоровело Пало Группа животКомпозиция,вотных в ных мл/теленок Телята (голов, ) группе 1. Опытная 30 2,0 7 23,3 6 85,7 1 3,3 2. Опытная 30 3,0 5 16,6 5 100 0 0 3. Опытная 30 4,0 8 26,6 6 75 2 6,6 4. Контрольная 30 17 56,6 9 52,9 8 26,6 4 18393 1 2014.08.30 Таблица 5 Эффективность профилактики колибактериоза у поросят Кол-во жиЗаболело Выздоровело Группа животКомпозиция,вотных в ных мл/поросенок Поросята (голов, ) группе 1. Опытная 20 0,5 5 25 4 80 2. Опытная 20 1,0 3 15 3 100 3. Опытная 20 2,0 7 35 5 71,4 4. Контрольная 20 11 55 6 54,5 Как видно из данных, представленных в табл. 4 и 5, эффективность применения заявляемого способа с целью профилактики колибактериоза зависит от дозы введения композиции. При применении композиции на телятах наиболее эффективной была доза 3,0 мл/теленок. Наилучший результат у поросят отмечали при введении композиции в дозе 1,0 мл/поросенок. Таким образом, заявляемый способ позволяет снизить заболеваемость колибактериозом у поросят и телят соответственно на 25-26,6 . При изучении неспецифических гуморальных и клеточных факторов иммунитета было выявлено, что при применении заявляемого способа повышалась бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови животных, усиливалась фагоцитарная активность гранулоцитов (табл. 6-8). Таблица 6 Изучение бактерицидной активности сыворотки крови поросят Бактерицидная активность сыворотки крови,Группа животных 7 сутки после введения До начала введения препарата препарата 1. Опыт 33,53,1 44,53,8 2. Прототип 36,44,5 38,23,3 Контроль 35,94,2 34,64,1 Примечание- при 0,05. Таблица 7 Изучение лизоцимной активности сыворотки крови поросят Лизоцимная активность сыворотки крови,7 сутки после введения До начала введения препарата препарата 1. Опыт 1,910,2 2,80,2 2. Прототип 1,950,1 2,470,4 Контроль 2,180,4 2,790,6 Примечание- при 0,01. Таблица 8 Изучение фагоцитарной активности гранулоцитов крови поросят Группа животных Фагоцитарный показатель,Группа животных 7 сутки после введения До начала введения препарата препарата 1. Опыт 65,63,7 78,64,3 2. Прототип 69,34,3 79,55,3 Контроль 72,75,8 74,94,9 Примечание.- при 0,05 5 18393 1 2014.08.30 В табл. 9, 10 представлены сравнительные результаты по изучению эффективности применения заявляемого способа с использованием композиции в дозе 1,0 мл/поросенок(1) по указанной выше схеме и базового препарата (прототип) (2) в условиях технологического стресса (перегруппировки поросят и перевода их в 30-дневном возрасте в группу доращивания). Таблица 9 Изучение эффективности применения композиции в качестве адаптогена Группа животных 1. Опыт 2. Прототип Контроль Как видно из представленных в табл. 9 данных, заявляемый способ с использованием композиции обладает выраженным адаптогенным действием, повышая устойчивость поросят к неблагоприятным факторам технологического стресса. Изучение основных биохимических маркеров стресса в крови поросят через 7 дней после их перевода в группу доращивания показало, что в опытной группе (1) достоверно не изменялся уровень общего белка, холестерина, а также активность ферментов аспартатаминотрансферазы (АсАт) и аланинаминотрансферазы (АлАт). В тоже время во 2-й группе (прототип) и у контрольных поросят отмечали достоверное (0,01) снижение уровня общего белка и холестерина, при этом активность АсАт и АлАт повышалась. Таблица 10 Изучение основных биохимических маркеров стресса в крови поросят при применении иммуностимулирующего препарата Группа жи- Перегруппивотных ровка поросят Общий беАсАт, ед/л лок, г 1. Опыт до 71,41,49 22,91,6 после 69,81,62 23,81,8 2. Прототип до 72,71,56 21,51,7 после 65,21,32 25,91,5 до 75,41,44 22,41,2 Контроль после 66,41,29 27,91,9 Примечание- при 0,01. Разработан способ профилактики колибактериоза, позволяющий использовать препараты, выпускаемые отечественной фармацевтической промышленностью. Источники информации 1. Патент 2077882 1, МПК 661 31/115, 9/08, 1997 (прототип). 2. Формалин Электронный ресурс.- 2011. - Режим доступа //.///00/00/0000042/017 - Дата доступа 2.11.2011. 3. Сапонины Электронный ресурс. 2011. - Режим доступа //////.Дата доступа 2.11.2011. 4. Сапонины Электронный ресурс. - 2011. - Режим доступа //отд//сапонины. - Дата доступа 2.11.2011. 6 18393 1 2014.08.30 5. Формалин Электронный ресурс.- 2011. - Режим доступа ////Формальдегид. - Дата доступа 2.11.2011. 6. Хлорид натрия Электронный ресурс.- 2011. - Режим доступа ////Хлорд натрия. - Дата доступа 2.11.2011. 7. Вода дистиллированная - ГОСТ 6709-72. 8. Временная инструкция по проведению работ с целью определения сроков годности лекарственного средства на основе метода ускоренного старения при повышенной температуре.М., 1974. - 9 с. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.