Способ дифференциальной фотодинамической диагностики доброкачественной и злокачественной опухоли слизистой оболочки орофарингеальной зоны

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ФОТОДИНАМИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ДОБРОКАЧЕСТВЕННОЙ И ЗЛОКАЧЕСТВЕННОЙ ОПУХОЛИ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ОРОФАРИНГЕАЛЬНОЙ ЗОНЫ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н.Александрова(72) Авторы Нейман Ольга Ивановна Жуковец Александр Геннадьевич Яськевич Лариса Станиславовна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н.Александрова(56)2129273 С 1, 1999.03/071953 1. ТРУХАЧЕВА Т.В. и др. ФОТОЛОН новое средство для фотодинамической терапии. Обзор результатов фармацевтических, фармакологических и клинических исследований. РУП Белмедпрепараты. - Минск, 2009. - С. 16-23.. - 2007. - . 14. -2. - . 99-103... . - 2000. . 110. -1. - . 78-83.(57) Способ дифференциальной фотодинамической диагностики доброкачественной и злокачественной опухоли слизистой оболочки орофарингеальной зоны, отличающийся тем,что вводят в 200 мл физиологического раствора в дозе 1,0 мг/кг массы тела внутривенно капельно в течение 30 мин фотосенсибилизатор, содержащий в качестве активного компонента хлорин е 6, через 3 ч в 10 точках опухоли индуцируют лазерным излучением с длиной волны 632,8 нм, мощностью 10 мВт и плотностью 1,0 Дж/см 2 флуоресценцию фотосенсибилизатора и регистрируют среднюю интенсивность флуоресценции в диапазоне 620-680 нм, определяют среднее значение средних интенсивностей флуоресценции фотосенсибилизатора по десяти точкам и диагностируют доброкачественную опухоль слизистой оболочки орофарингеальной зоны при среднем значении средней интенсивности флуоресценции фотосенсибилизатора, равном 950-1250 условных единиц, или злокачественную опухоль орофарингеальной зоны при среднем значении средней интенсивности флуоресценции, равном 1400 или более условных единиц. Изобретение относится к медицине, в частности к онкологии, а именно к способам ранней диагностики доброкачественных и злокачественных опухолей слизистой оболочки орофарингеальной зоны. 17822 1 2013.12.30 Ранняя диагностика рака или предракового заболевания слизистой оболочки орофарингеальной области является лучшим путем повышения выживаемости и качества жизни пациентов. Существующие традиционные способы первичной диагностики включают визуальный осмотр слизистой оболочки и биопсию, которая является инвазивной техникой и малопригодна в качестве компонента регулярного обследования групп лиц с доброкачественными заболеваниями или повышенным риском развития рецидива рака или метахронной опухоли на слизистой оболочке орофарингеальной области. Фотодинамическая диагностика доброкачественных и злокачественных опухолей слизистой оболочки орофарингеальной зоны основана на возможности распознавания доброкачественной и злокачественной опухоли по индивидуальным световым излучениям,исходящим из опухолевой ткани и напрямую связанным с особенностью накопления фотосенсибилизатора в ней. Избирательность накопления фотосенсибилизатора в опухолевой ткани и возможность обнаружения его по спектрам экзогенной флуоресценции составляют основу фото динамической диагностики опухолей. В настоящее время используют различные группы фотосенсибилизаторов, наиболее эффективными из которых являются фотосенсибилизаторы хлоринового ряда. Известны способы фотодинамической (флуоресцентной) диагностики рака слизистой оболочки полости рта с использованием аппликации на слизистую оболочку 0,4 раствора 5-аминолевулиновой кислоты с последующей оценкой данных флуоресцентной спектроскопии и иммеджин флуоресценции 1, 2, 3. Однако локальное применение 5-аминолевулиновой кислоты и фотосенсибилизаторов не позволяет проводить фотодинамическую (флуоресцентную) диагностику злокачественных или доброкачественных поражений ротоглотки в связи со сложностью длительной их аппликации на слизистую ротоглотки. Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому изобретению является способ эндоскопической флуоресцентной диагностики злокачественных опухолей полых органов, включающий внутривенное введение фотосенсибилизатора фотогем в дозе 1,5-3 мг/кг с последующим сеансом флуоресцентной диагностики через 24-72 ч с использованием стандартного эндоскопа и волоконно-оптического катетера 4. Для возбуждения флуоресценции биотканей используют излучение лазера на парах меди с длиной волны 510 нм либо аргонового лазера с длиной волны 512 нм при плотности лазерного излучения не более 1 Дж/см 2. Спектрофлуометрию биотканей осуществляют в диапазоне 550-700 нм. Регистрируют флуоресценцию опухоли, подозрительных на опухоль участков и окружающей неизмененной слизистой оболочки. В процессе флуоресцентного диагностического исследования определяют спектральный параметр, являющийся отношением интегральной интенсивности флуоресценции в красном диапазоне и интегральной интенсивности эндогенной флуоресценции в желто-зеленой области спектра, и при его значении 3 относительные единицы и выше диагностируют злокачественную опухоль. Данный способ принят нами за прототип. Однако прототип обладает некоторыми недостатками. Исследование проводят через 2-3 суток после введения фотогема. В течение 1-1,5 месяцев после сеанса флуоресцентной диагностики пациенту необходимо соблюдать световой режим, включающий ношение солнцезащитных очков и ограничение пребывания на улице в дневное время, чтобы избежать кожной фототоксичности. Задача - улучшить раннюю диагностику доброкачественных и злокачественных опухолей слизистой оболочки орофарингеальной области. Решение поставленной задачи достигают тем, что используют фотосенсибилизатор,содержащий в качестве активного компонента тринатриевую соль хлорина Е 6, который имеет высокую тропность к опухолевой ткани, быстро накапливается в опухоли и выводится из организма, не вызывая длительной фототоксичности. Способ осуществляют следующим образом. Фотосенсибилизатор, содержащий в качестве активного компонента хлорин 6, вводят внутривенно капельно в дозе 1 мг/кг массы 2 17822 1 2013.12.30 тела на 200 мл физиологического раствора с обязательной защитой от попадания прямых солнечных лучей в течение 30 мин. Фотодинамическую (флуоресцентную) диагностику проводят через 3 ч после введения препарата с использованием лазер-индуцированной флуоресцентной спектроскопии (ЛИФС). ЛИФС проводят с использованием лазерной электронно-спектральной установки для флуоресцентной диагностики опухолей ЛЭСА-6 (БИОСПЕК, РФ). В качестве источника излучения, возбуждающего флуоресценцию фотосенсибилизатора в биологической ткани, используют излучение - лазера с длиной волны 632,8 нм. Мощность лазерного излучения составляет 10 мВт, плотность энергии локального лазерного излучения на поверхности исследуемой ткани в процессе одного исследования 1 Дж/см 2. Исследование проводят под прямым углом к объекту и при легком касании торцом оптико-волоконного световода ткани. Процедура регистрации флуоресцентного спектра составляет 1-2 с на точку. Регистрируют средние интенсивности флуоресценции в диапазоне 620-680 нм. Измерение проводят на здоровую слизистую оболочку и опухоль по 10 точек на каждую область соответственно. Среднее спектральное значение (условные единицы измерения) для доброкачественной опухоли составляют 950-1250, а при значении, равном 1400 и более условных единиц, расценивают опухоль как злокачественную. Среднее спектральное значение для интактной слизистой оболочки составляет до 900 условных единиц. Полученные путем точечных измерений данные из центра и периферии патологического образования, а также визуально здоровой слизистой оболочки на симметричном участке анализируют с помощью компьютерной программы -. Диагностическим параметром является селективность накопления препарата (флуоресцентная контрастность) в опухолевой ткани или доброкачественном процессе, определяемая величиной отношения интегральных интенсивностей экзогенной флуоресценции в патологическом очаге и в нормальной ткани. После сеанса дифференциальной фотодинамической (флуоресцентной) диагностики пациент соблюдает специальный световой режим в течение трех дней. Основные отличительные признаки предлагаемого изобретения 1. Используют фотосенсибилизатор с активным веществом тринатриевая соль хлорина 6. 2. Высокая селективность накопления в опухолевой ткани, малая кожная фототоксичность и быстрое выведение из организма фотосенсибилизатора позволяют использовать фотодинамическую (флуоресцентную) диагностику в качестве компонента регулярного обследования групп лиц с предраковыми заболеваниями или повышенным риском развития рецидива рака или метахронной опухоли. Сущность изобретения поясняют фигуры. На фиг. 1 а изображена злокачественная опухоль слизистой оболочки средней трети тела языка в рассеянном свете и 1 б - во флуоресцентном свете (пример 1). На фиг. 2 а изображена злокачественная опухоль слизистой оболочки правой щеки в рассеянном свете и 2 б - во флуоресцентном свете (пример 2). На фиг. 3 а изображена доброкачественная опухоль слизистой оболочки дна полости рта в рассеянном свете и 3 б - во флуоресцентном свете (пример 3). На фиг. 4 а изображена злокачественная опухоль слизистой оболочки твердого неба в рассеянном свете и 4 б - во флуоресцентном свете (пример 4). Способ иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Больной С.Л.В., 52 года (а/к 4261/00, ист. болезни 14394/09) обратился в РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова 15.09.2009 с жалобами на наличие опухолевидного образования в области средней трети тела языка справа. При осмотре и пальпации выявлен патологический очаг размерами 1,51,0 см. 21.09.2009 в 9.00 внутривенно капельно введено 1 мг/кг массы тела фотосенсибилизатора с активным веществом тринатриевая соль хлорина Е 6, растворенного в 200,0 мл физиоло 3 17822 1 2013.12.30 гического раствора, что соответствует 1 мг/кг массы тела. 21.09.2009 в 12.00 проведена фотодинамическая (флуоресцентная) диагностика. ЛИФС выполнена согласно описанию изобретения от 1600 до 2100 условных единиц (соответствует накоплению фотосенсибилизатора в злокачественной опухоли). Диагноз рака подтвержден данными морфологического исследования ( 133457-458/09 плоскоклеточный ороговевающий рак). Использование фотодинамической (флуоресцентной) диагностики с фотосенсибилизатором с активным веществом тринатриевая соль хлорина Е 6 позволило установить диагноз (фиг. 1). Пример 2. Больная Г.Е.Г., 66 лет (а/к 596/08, история болезни 8076/09) обратилась в РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова 01.06.2009 с жалобами на наличие плоского образования на слизистой оболочки правой щеки. При осмотре и пальпации выявлен патологический очаг на слизистой оболочке размерами 1,00,8 см белесоватого цвета с нечетким контуром. 02.06.2009 в 9.00 внутривенно капельно введено 80 мг фотосенсибилизатора (1 мг/кг массы тела), растворенного в 200,0 мл физиологического раствора. 02.06.2009 в 12.00 проведена фотодинамическая (флуоресцентная) диагностика с использованием ЛИФС. ЛИФС выполнена согласно описанию изобретения, в центре патологического образования очаг повышенного накопления препарата 1950 условных единиц (соответствует накоплению фотолона в злокачественной опухоли). В области слизистой оболочки правой щеки патологический очаг размерами 1,51,0 см в виде светящегося пятна на фоне темной нормальной слизистой оболочки. Диагноз рака подтвержден данными морфологического исследования ( 137972-73/09 на фоне лейкоплакии участок до 0,2 см рака). Использование фотодинамической (флуоресцентной) диагностики с фотосенсибилизатором позволило выявить доинвазивную форму рака слизистой оболочки, развившуюся на фоне предракового заболевания (фиг. 2). Пример 3. Больная С.А.А., 72 года (а/к 722/10., история болезни 1942/10) обратилась в РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова 08.02.2010 с жалобами на образование на слизистой оболочки дна полости рта слева. При осмотре и пальпаторно выявлен патологический очаг на слизистой оболочке размерами 1,00,8 см белесоватого цвета без четких контуров. 08.02.2010 в 9.00 внутривенно капельно введено 66 мг фотосенсибилизатора (1 мг/кг массы тела), растворенного в 200,0 мл физиологического раствора. 08.02.2010 в 12.00 проведена фотодинамическая (флуоресцентная) диагностика с фотосенсибилизатором с использованием ЛИФС. ЛИФС выполнена согласно описанию изобретения от 1050 до 1400 условных единиц (соответствует накоплению фотолона в доброкачественной опухоли). На слизистой оболочке дна полости рта в проекции 2-3 моляра слева патологический очаг звездчатой формы размерами 1,01,5 см в виде светящегося пятна на фоне темной нормальной слизистой оболочки. Диагноз лейкоплакии (доброкачественной опухоли) подтвержден данными морфологического исследования ( 58046/10 папилломатоз, акантоз,слабое воспаление, лейкоплакия). Использование фотодинамической (флуоресцентной) диагностики с фотосенсибилизатором позволило провести дифференциальную диагностику, уточнить границы и распространенность очага лейкоплакии (фиг. 3). Пример 4. Больная П.А.Г., 73 года (а/к 6634/09., история болезни 14040/09) обратилась в РНПЦ онкологии и медицинской радиологии им. Н.Н. Александрова 08.09.2009 с жалобами на наличие плоского образования в области твердого неба. При осмотре и пальпации выявлено уплотнение слизистой оболочки в области средней линии твердого неба без четких контуров размерами 1,52,0 см. 09.09.2009 в 9.00 внутривенно капельно введено 90 мг фотосенсибилизатора с активным веществом тринатриевая соль хлорина 6 (1 мг/кг массы тела), растворенного в 200,0 мл 4 17822 1 2013.12.30 физиологического раствора. 09.09.2009 в 12.00 проведена фотодинамическая (флуоресцентная) диагностика с использованием ЛИФС. ЛИФС выполнена согласно описанию изобретения от 1700 до 2100 условных единиц (соответствует накоплению фотосенсибилизатора в злокачественной опухоли). Диагноз рака подтвержден данными морфологического исследования ( 142231/09 плоскоклеточный рак). Использование фото динамической(флуоресцентной) диагностики с фотосенсибилизатором с активным веществом тринатриевая соль хлорина Е 6 позволило установить диагноз (фиг. 4). Предлагаемый способ дифференциальной фотодинамической (флуоресцентной) диагностики выполнен у 45 пациентов со злокачественными опухолями и у 35 пациентов с доброкачественными опухолями слизистой оболочки орофарингеальной зоны. Чувствительность способа для злокачественной опухоли составляет 87 , специфичность 82 . Способ может быть рекомендован к использованию в онкологии для ранней дифференциальной диагностики рецидива рака и метахронных опухолей слизистой оболочки орофарингеальной области, а также в стоматологии и отоларингологии в качестве компонента регулярного обследования групп лиц с предраковыми заболеваниями или высоким риском развития рака. Источники информации 1..-., - .//.. . - 115 2005. - . 1877-1885. 2.//. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.