Ветеринарный препарат, обладающий антивирусным и антимикробным действием

(51) МПК (2009) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявители Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Белорусский государственный университет(72) Авторы Прокулевич Владимир АнтоновичЮркштович Татьяна ЛукиничнаГолуб Наталья ВасильевнаАлиновская Валентина АлександровнаКалужский Василий Евгеньевич(73) Патентообладатели Учреждение Белорусского государственного университета Научно-исследовательский институт физико-химических проблем Белорусский государственный университет(57) 1. Ветеринарный препарат, обладающий антивирусным и антимикробным действием,включающий -интерферон, антимикробное вещество, наполнитель-стабилизатор, хлорид натрия и воду для инъекций, отличающийся тем, что в качестве антимикробного вещества включает антибиотик, в качестве наполнителя-стабилизатора - эфир целлюлозы, выбранный из группы, включающей метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и карбоксиметилцеллюлозу, в смеси с маннитом и дополнительно содержит метабисульфит натрия и бензоат натрия при следующем соотношении компонентов на литр препарата 1106-11010-интерферон, МЕ антибиотик, г до концентрации антибиотика в известных препаратах для инъекций метилцеллюлоза, г 5,0-10,0 гидроксипропилметилцеллюлоза, г 2,0-5,0 карбоксиметилцеллюлоза, г 5,0-10,0 маннит, г 0,1-5,0 хлорид натрия, г 8,8-9,1 метабисульфит натрия, г 3,0-6,0 бензоат натрия, г 1,8-2,2 вода для инъекций остальное. 2. Препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве антибиотика содержит гентамицина сульфат в количестве 40-100 г/л. 3. Препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве антибиотика содержит энрофлоксацин в количестве 100 г/л. 13363 1 2010.06.30 4. Препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве антибиотика содержит окситетрациклин. Изобретение относится к ветеринарии, области биотехнологии, может быть использовано при получении лечебно-профилактических иммунобиологических препаратов, обладающих пролонгированным антимикробным и противовирусным действиями, касается биологически активных препаратов на основе антибиотиков и рекомбинантного -интерферона. В настоящее время для лечения инфекционных заболеваний животных наиболее перспективными являются лекарственные формы на основе различных антимикробных средств и иммуномодуляторов, в том числе интерферонов. Недостатком большинства препаратов является их однонаправленное действие либо антимикробное, либо антивирусное. В связи с тем, что инфекционный процесс заболеваний животных часто носит смешанный вирусно-бактериальный характер, актуальным является создание препаратов комбинированного действия. В ветеринарии широкое распространение нашел препарат для инъекций на основе рекомбинантных -интерферонов - МИКСОФЕРОН 1, который обладает прямым антивирусным действием и, кроме того, стимулирует иммунные процессы, а также повышает неспецифическую резистентность организма животных. Препарат в дозах 5, 10, 20, 50 и 100 (1 доза соответствует 100000 МЕ в 1 мл) растворяют непосредственно перед употреблением в стерильной дистиллированной воде или в 0,9 растворе натрия хлористого. Недостатками лекарственного препарата МИКСОФЕРОН является низкая стабильность в водных растворах, а также короткий период полураспада активного вещества в тканях и кровотоке животных, что препятствует достижению его максимального лечебного действия. Наиболее близким техническим решением к заявляемому препарату, выбранным в качестве прототипа, является пролонгированный раствор -2-интерферона 2 для медицинского применения. Отличие и преимущество данного лекарственного препарата от других известных лекарственных форм 3-7 состоит в использовании наряду с -2-интерфероном антиоксидантов (лимонная кислота и унитиол), антимикробных веществ (борная кислота и тетраборат натрия), а также в качестве наполнителя-стабилизатора смесь сывороточного альбумина человека в концентрации 0,1-0,5 и эфиров целлюлозы в концентрации 0,5-5,0 . Препарат представляет собой прозрачный вязкий раствор, который может быть использован в медицине для местного применения. Недостатками известного пролонгированного раствора -2-интерферона является использование в качестве антимикробных веществ борной кислоты и тетрабората натрия,которые являются антисептиками поверхностного действия, характеризуются слабо выраженным терапевтическим действием по сравнению с антибиотиками, относятся к классу сильнотоксичных веществ и разрешены в ветеринарии и медицине только для наружного применения 8. Кроме того, известный препарат в качестве наполнителя-стабилизатора содержит человеческий сывороточный альбумин (ЧСА), который обладает высокой стоимостью, требует дополнительного контроля на наличие инфицируемости (гепатит В и С,ВИЧ-инфекции и др.), что снижает возможность применения его в ветеринарии. Задачей изобретения является получение препарата в виде стабильного раствора не только для местного применения, но и для инъекций, который обладает более широким спектром терапевтического действия и обеспечивает эффект сохранения высокого уровня антивирусной и антибактериальной активности в организме животных в течение длительного времени. Поставленная задача достигается тем, что ветеринарный препарат, обладающий антивирусным и антимикробным действием, включающий -интерферон, антимикробное вещество, наполнитель-стабилизатор, хлорид натрия и воду для инъекций, в качестве 2 13363 1 2010.06.30 антимикробного вещества включает антибиотик, в качестве наполнителя-стабилизатора эфир целлюлозы, выбранный из группы, включающей метилцеллюлозу, гидроксипропилметилцеллюлозу и карбоксиметилцеллюлозу, в смеси с маннитом и дополнительно содержит метабисульфит натрия и бензоат натрия при следующем соотношении компонентов на литр препарата-интерферон,1106- 11010 антибиотик, г до концентрации антибиотика в известных препаратах для инъекций метилцеллюлоза, г 5,0-10,0 гидроксипропилметилцеллюлоза, г 2,0-5,0 карбоксиметилцеллюлоза, г 5,0-10,0 манит, г 0,1-5,0 метабисульфит натрия, г 3,0-6,0 хлорид натрия, г 8,8-9,1 бензоат натрия, г 1,8-2,2 вода для инъекций остальное. Препарат отличается тем, что в качестве антибиотика содержит гентамицина сульфат в количестве 40-100 г/л. Препарат отличается тем, что в качестве антибиотика содержит энрофлоксацин 50100 г/л. Препарат отличается тем, что в качестве антибиотика содержит окситетрациклин. Приготовление заявляемого препарата, обладающего антивирусным и антимикробным действиями, для инъекций осуществляют следующим образом 1. В 500 мл воды для инъекций помещают 5,0 г метилцеллюлозы (МЦ) или 2,0 г гидроксипропилметилцеллюлозы (ГПМЦ), или 5,0 г карбоксиметилцеллюлозы (КМЦ), перемешивают в течение 1-3 часов до полного растворения полисахарида. Затем в полученный раствор добавляют 9,0 г хлорида натрия (точная навеска), 40 г гентамицина сульфата (или соответствующие действующие концентрации других антибиотиков), 3,0 г метабисульфита натрия (225), субстанцию, содержащую рекомбинантный -интерферон (человеческий, птичий, свиной, бычий либо их смеси) с активностью 1106 , 0,1 г маннита, 2,0 г бензоата натрия (65). После растворения всех компонентов объем полученного раствора при перемешивании доводят водой для инъекций до 1000 мл, проводят стерилизующую фильтрацию. Раствор разливают в асептических условиях стерильные флаконы по 5-100 мл укупоривают резиновыми пробками с обкаткой металлическими колпачками. 2. В 500 мл воды для инъекций помещают 10,0 г МЦ или 5,0 г ГПМЦ, или 10,0 г КМЦ,перемешивают в течение 1-3 часов до полного растворения полисахарида. Затем в полученный раствор добавляют 9,0 г хлорида натрия (точная навеска), 100 г гентамицина сульфата (ГН 4) или соответствующие действующие концентрации других антибиотиков, 6,0 г метабисульфита натрия, 2,0 г бензоата натрия. Объем полученного раствора доводят при перемешивании водой для инъекций до 1000 мл и проводят стерилизующую фильтрацию. Раствор разливают в асептических условиях в стерильные флаконы по 5-100 мл укупоривают резиновыми пробками с обкаткой металлическими колпачками. Отдельно готовят стерильный раствор субстанции интерферона с активностью 11010(человеческого, птичьего, свиного, бычьего либо их смесей) и 5,0 г маннита, который в асептических условиях расфасовывают в стерильные флаконы, лиофильно высушивают и укупоривают резиновыми пробками с обкаткой металлическими колпачками. Препарат растворяют в предварительно полученном растворе полимера с антибиотиком непосредственно перед употреблением. 3. В 500 мл воды для инъекций помещают 10,0 г МЦ или 5,0 г ГПМЦ, или 10,0 г КМЦ,перемешивают в течение 1-3 часов до полного растворения полисахарида. Затем в полученный раствор добавляют 9,0 г хлорида натрия (точная навеска), 100 г энрофлоксацина(или соответствующие действующие концентрации других антибиотиков), 6,0 г метаби 3 13363 1 2010.06.30 сульфита натрия, 2,0 г бензоата натрия. Объем полученного раствора доводят при перемешивании водой для инъекций до 1000 мл и проводят стерилизующую фильтрацию. Раствор разливают в асептических условиях в стерильные флаконы по 5-100 мл укупоривают резиновыми пробками с обкаткой металлическими колпачками. Отдельно готовят стерильный раствор субстанции интерферона с активностью 11010(человеческого, птичьего,свиного, бычьего либо их смесей) и 5,0 г маннита, который в асептических условиях расфасовывают в стерильные флаконы, лиофильно высушивают и укупоривают резиновыми пробками с обкаткой металлическими колпачками. Препарат растворяют в предварительно полученном растворе полимера с антибиотиком непосредственно перед употреблением. В заявляемом препарате определяют активность -2-интерферона, содержание биополимера - УФ-спектрофотометрическим методом, гентамицина сульфата - методом комплексообразования с тринитробензолсульфокислотой (другие антибиотики соответствующими методами). Дополнительно контролируют соответствие всем требованиям, предъявляемым к биологически активному препарату для инъекций отсутствие механических включений, прозрачность, цветность, рН, реологические свойства раствора, стерильность и др. Препарат, обладающий антивирусным и антимикробным действиями, для инъекций представляет стабильный (активность -2-интерферона сохраняется более одного года),прозрачный, бесцветный раствор с динамической вязкостью 5,1-23 мПас, которую определяют на ротационном вискозиметре при температуре 201 С и скорости сдвига 5,4437,4 с-1. Изучение острой и хронической токсичности, а также фармакодинамики заявляемого препарата, обладающего антивирусным и антимикробным действиями, проводили на 20200 белых мышах, поросятах обоего пола (до 30 кг), цыплятах бройлерах. Результаты экспериментальных исследований позволили сделать заключение, что заявляемый препарат,обладающий антивирусным и антимикробным действиями, не обладает пирогенностью и нетоксичен при пероральном, внутрижелудочном, внутримышечном и подкожном введении. Таблица 1 Состав и некоторые свойства заявляемого препарата,обладающего антивирусным и антимикробным действиями Результаты исследования антивирусной активности заявляемого ветеринарного препарата показаны на фигуре и табл. 2. Из данных фигуры и табл. 2 следует, что как МЦ, так ГПМЦ и КМЦ способствуют сохранению достаточно высокого уровня антибактериальной активности -интерферона в 4 13363 1 2010.06.30 течение длительного времени. Видно, что эффект пролонгированного действия исследуемых полисахаридов является дозозависимым и с возрастанием содержания эфира целлюлозы в препарате наблюдается более длительное (до 96 ч) присутствие -интерферона в сыворотке крови. Таким образом, приведенное сочетание в составе заявляемого препарата антибиотика,-интерферона, и эфира целлюлозы (МЦ или ГПМЦ, или КМЦ) приводит к появлению раствора пролонгированного действия, обладающего стабильностью и двойственным (антивирусным и антибактериальным) эффектом. Таблица 2 Динамика иммуномодулирующей активности препаратов в сыворотке крови белых мышей при введении внутримышечно Примеры контроль интерферон ГПМЦ 0,5 ГПМЦ 0,75 МЦ 0,5 МЦ 0,75 КМЦ 0,5 КМЦ 0,75 Иммуномодулирующая активностьв течение времени после введения (ч) 12 24 30 48 54 72 0 0 0 0 0 0 44,6 55,4 0 0 0 0 18,5 18,5 42,6 0 16,4 18,6 35,3 19,5 17,8 21,6 20,2 21 0 0 22,9 22,9 29,2 0 20,8 50,2 29,0 0 15,4 20,8 43,7 В ветеринарии при смешанных инфекциях имеется практика сочетания инъекций интерферона с инъекциями растворов подтитрованных антибиотиков. Однако способ введения заявляемого препарата, имеющего в своем составе -интерферон и антибиотик, путем одной инъекции (а не двух параллельных) более прост, экономичен и предполагает пролонгирование действия антибиотика. Таким образом, заявляемый препарат для инъекций обеспечивает по сравнению с существующим препаратом пролонгированный раствор -интерферона следующие преимущества 1) получение препарата не только для местного применения, но и для инъекций 2)высокая степень индуцирования антибактериальной активности отдельно взятого интерферона, регулируемая концентрацией и природой носителя 3) возможность регулирования степени пролонгирования компонентов препарата на антибактериальную и антивирусную активности путем изменения природы носителей и их концентраций 4) замена дорогостоящего наполнителя-стабилизатора (смесь ЧСА-эфиры целлюлозы) более дешевым (смесь маннит-эфиры целлюлозы). Заявляемый препарат на основе интерферона может быть получен в условиях предприятий, выпускающих химические и ветеринарные препараты. Источники информации 1. Большая ветеринарная энциклопедия. Миксоферон. 2. Патент РФ 2 270 692, 2006. 3. Ершов Ф.И. Интерферон и их индукторы (от молекул до лекарств). - . ГЭОТАР Медиа, 2005, 356 с. 4. Патент РФ 2 121 364, 1998. 5 13363 1 2010.06.30 5. Патент 2726470, 1996. 6. Патент РФ 2 236 866, 2003. 7. Методические основы применения реаферона - человеческого рекомбинантного интерферона -2 В-белка. Сб. матер. научн. конф. для врачей-практиков. - Кольцово, 2529 января 1993. - С. 15-19. 8. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Вильнюс ЗАО Гамта, 2004. - Т. 2. С. 348. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 6