Способ определения типа системной реакции организма человека

НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОИ СОБСТВЕННОСТИСПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИПА СИСТЕМНОЙ РЕАКЦИИ ОРГАНИЗМА ЧЕЛОВЕКА(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет (ВУ)(72) Авторы Смотрин Сергей Михайлович Наумов Игорь Алексеевич Островский Александр Александрович Шейбак Владимир Михайлович Головко Елена Викторовна (ВУ)(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет (ВУ)Способ определения типа системной реакции организма здорового человека, заключающийся в том, что на предплечье пациента создают кожно-вакуумные пузыри, из которых через 6 часов и через 24 часа отбирают жидкость и подсчитывают в 1 ммз абсолютное количество лейкоцитов, содержание нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов, Т-лимфоцитов, Т-хелперов С 1 Э 4, Т-супрессоров С 1 Э 8, по отношению С 1 Э 4/С 1 Э 8 рассчитывают иммунорегуляторный индекс, и при изменении количества лейкоцитов с 1670-2120 до 24103540, содержания нейтрофилов с 67,6 1 3,5 до 55,2 1 4,4 , макрофагов с 27,3 1 3,2 до 39,9 1 3,9 , лимфоцитов с 1,96 1 0,4 до 3,0 1 0,7 , Т-лимфоцитов с 49,4 1 2,6 до 59,3 1 1,9 и значениях иммунорегуляторного индекса 1,1-1,3 тип системной реакции организма определяют как нормоергический, при изменении количества лейкоцитов с 970-1420 до 980-1870, содержания нейтрофилов с 52,9 1 5,1 до 31,2 1 3,1 , макрофагов с 44,7 1 2,8 до 65,3 1 3,8 , лимфоцитов с 1,74 1 0,32 до 1,13 1 0,64 , Т-лимфоцитов с 46,3 1 1,9 до 48,2 1 2,7 и значениях иммунорегуляторного индекса 0,8-0,9 тип системной реакции организма определяют как гипоергический, а при изменении количества лейкоцитов с 2140-2570 до 3610-3990, содержания нейтрофилов с 77,4 1 1,6 до 70,3 1 2,2 ,макрофагов с 20,4 1 1,4 до 25,4 1 2,1 , лимфоцитов с 2,43 1 0,21 до 3,11 1 0,53 ,Т-лимфоцитов с 44,4 1 2,1 до 45,8 1 1,8 и значениях иммунорегуляторного индекса 1,5-1,7 тип системной реакции организма определяют как гиперергический.Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может использоваться для определения типа системной реакции организма человека на внешнее воздействие.Проблема создания технически простого и диагностически значимого способа, позволяющего оценивать системную реакцию организма на внешнее воздействие и на его осно ВУ 8760 С 12006.12.30ве прогнозировать течение патологического процесса, является одной из важнейших в медицинской практике.Известны аналоги для оценки системной реакции организма на внешнее воздействие Методы кожного окна и раневых отпечатков.Способ кожного окна КеЬисК 1377., Сгош 1 еу .Н. А шетоб згибуш 1 е 111 осугез Гипсгйопз ш у 1 уо//Апп. НУ. Асаб. 501. 1955, По 59, р. 757. заключается в нанесении скарификационной раны площадью 0,2-0,5 см 2 на коже передней поверхности предплечья. Ранку, лишенную эпидермиса, покрывают стерильным стеклом. Периодически стекла заменяют. Полученные отпечатки окрашивают по Романовскому. Препараты просматривают под микроскопом с иммерсией, подсчитывая не менее 200-300 клеток.Недостатком способа кожного окна является его техническая сложность, невысокая стандартность в нанесении травмы (при скарификации невозможно отделение одного лишь эпидермиса от дермы ввиду извилистого хода базальной мембраны), значительная болезненность при нанесении скарификационной травмы и при получении препаратов-отпечатков, затруднение в поддержании асептичности (в препаратах обнаруживаются микробы) затрудненная интерпретация результатов (большинство данных получено в экспериментах на животных), невозможность оценки абсолютных параметров воспалительной эмиграции(оценивается лишь удельный вес тех или иных клеток на покровном стекле).Способ раневых отпечатков Покровская М.П., Макаров М.С. Цитология раневого экссудата как показатель процесса заживления ран. - М. Медгиз, 1942 г., с. 42 заключается в получении препаратов-отпечатков из верхнего лейкоцитарного слоя раны после предварительного снятия гноя с ее поверхности. Препараты окрашиваются по Романовскому. При просмотре под микроскопом определяется относительное содержание клеточных элементов в зависимости от однородности клеточного состава.Недостатками способа раневых отпечатков являются техническая сложность, затруднена стандартность при получении препарата-отпечатка (невозможно полноценное отделение гнойного слоя), затруднена интерпретация результатов (в препарат-отпечаток попадают элементы из верхних слоев раны - лейкоцитарного и сосудистого, изобилуюшие недифференцированными элементами соединительной ткани, представление о характере процесса возможно только при последовательном сопоставлении цитологических данных), невозможность оценки абсолютных параметров воспалительной эмиграции (оценивается лишь удельный вес тех или иных клеток на покровном стекле).Известен способ кожных камер Боишаш С.М., Ьеуш АО. А Чиапшагйуе КеЬис 1 гес 11 пщие//В 1 оо 1. 1966, уо 1. 27, р. 734-738, заключаюшийся в том, что для изучения системной реакции организма на внешнее воздействие после скарификации кожи используют специальные камеры, заполняемые стерильными растворами с различными хемоаттрактантами. Периодически из полости камер производят забор жидкости лишь для однократного подсчета только абсолютного количества лейкоцитов в камере Горяева и после окраски по Романовскому для определения относительного содержания различных форм лейкоцитов,подсчитывая не менее 200-300 клеток.Недостатками способа являются техническая сложность, невысокая стандартность в нанесении травмы, значительная болезненность при нанесении скарификационной травмы и при получении клеточных проб, затруднение в поддержании асептичности, неадекватная смена клеточных фаз при развитии асептического воспаления, низкая диагностическая ценность способа в оценке системной реакции организма.Задача изобретения - разработать малотравматичный способ, позволяюший определять тип системной реакции организма человека с высокой диагностической точностью и стандартностью.Поставленная задача решается путем создания на предплечье пациента кожно-вакуумных пузырей, из которых через 6 часов И через 24 Часа отбирают жидкость И подсчитывают в 1 ммз абсолютное количество лейкоцитов, содержание нейтрофилов, макрофагов, лимфоцитов, Т-лимфоцитов, Т-хелперов (С 1 Э 4), Т-супрессоров (С 1 Э 8), рассчить 1 вают иммунорегуляторный индекс (С 1 Э 4/С 1 Э 8), составляют иммунограмму, и в случае увеличения абсолютного количества лейкоцитов с 1670-2120 до 2410-3540, количества макрофагов от 27,3 1 3,2 до 39,9 1 3,9 , лимфоцитов от 1,96 1 0,4 до 3,0 1 0,7 ,Т-лимфоцитов от 49,4 1 2,6 до 59,3 11,9 , уменьшения количества нейтрофилов от 67,6 1 3,5 до 55,2 1 4,4 , при этом иммунорегуляторный индекс составляет 1,1-1,3, определяют нормоергический тип системной реакции, в случае увеличения абсолютного числа лейкоцитов с 970-1420 до 980-1870, количества макрофагов от 44,72,8 до 65,3 1 3,8 , Т-лимфоцитов от 46,3 1 1,9 до 48,2 1 2,7 , уменьшения количества нейтрофилов от 52,9 1 5,1 до 31,2 1 3,1 , лимфоцитов от 1,74 1 0,32 до 1,13 1 0,64 ,снижения иммунорегуляторного индекса до 0,8-0,9 определяют гипоергический тип системной реакции, в случае увеличения абсолютного числа лейкоцитов от 2140-2570 до 3610-3990, количества макрофагов от 20,4 1 1,4 до 25,4 1 2,1 , лимфоцитов от 2,43 1 0,21 до 3,11 1 0,53 , Т-лимфоцитов от 44,4 1 2,1 до 45,8 1 1,8 , уменьшения количества нейтрофилов от 77,4 1 1,6 до 70,3 1 2,2 , увеличения иммунорегуляторного индекса до 1,5-1,7 определяют гиперергический тип системной реакции организма.Способ осуществляют следующим образом. На коже внутренней поверхности средней трети левого плеча или предплечья человека с помошью отсась 1 вателя медицинского наносят вакуумную микротравму. При этом при помоши специальных камер образовывают кожно-вакуумные пузыри. После предварительной обработки кожи 70 -ным этиловым спиртом понижают давление до -0,6 кг/см 2 и поддерживают его в течение 30-45 минут до образования 4-8 пузырей диаметром 4,5-5,5 мм (их объем составляет 20-40 мкл). Жидкость из пузырей берут через 6 и 24 часа от начала воздействия отрицательного давления. Для сохранения пузырей неповрежденными в течение указанных промежутков времени на участок кожи, подвергшийся воздействию неполного вакуума, помешают марлевый тампон, который фиксируют с помошью полосок лейкопластыря. Первую часть забранной из полости кожно-вакуумных пузырей жидкости используют для подсчета абсолютного количества лейкоцитов (применяют камеру Горяева). Вторую часть пузырной жидкости помешают на предметное стекло. В ней после окраски по Романовскому определяют относительное содержание различных форм лейкоцитов, подсчитывая не менее 200-300 клеток. Третью часть забранной жидкости используют для иммунофенотипирования лимфоцитов с использованием диагностикумов на основе моноклональных антител. Определяют Т-лимфоцить 1, Т-хелперы (С 1 Э 4) и Т-супрессоры (С 1 Э 8). Затем определяют иммунорегуляторный индекс как отношение С 1 Э 4 к С 1 Э 8. Анализы проводят через 6 и 24 часа после нанесения микротравмы, т.е. наблюдают за развитием процессса в динамике, и по полученным иммунограммам судят о типе системной реакции организма на внешнее воздействие.Нами изучены иммунограммы, полученные данным способом, у 75 здоровых лиц мужского и женского пола. Возраст обследованных составил 18-22 лет. Забор материала производили через 3, 6, 12 и 24 часа. Анализ материала показал, что у здоровых лиц в зависимости от индивидуальных особенностей реактивности организма наблюдаются 3 возможных типа системной реакции организма на внешнее воздействие - нормоергический,гипоергический и гиперергический. Иммунограммы, характерные для каждого из этих типов, представлены в табл. 1, 2, 3.Показатели иммунограммы 3 часа 6 часов ДН КЛИЧТВ ЛИКЦИТВ 420-560 1670-2120 2990-3930 2410-3540 Нейтрофилы, 86,111,4 67,613,5 61,312,5 55,214,4 Макрофаги, 9,9911,4 27,313,2 32,912,4 39,913,9 Лимфоциты, 1,491 О,3 О 1,961 О,4 О 2,4210,50 3,0010,70 Т-лимфоциты, 47,812,3 49,412,6 52,612,9 59,311,9 Т-хелперы (С 1 Э 4), 32,212,1 31,612,1 31,711,9 31,911,8 Т-супрессоры (С 1 Э 8), 28,413,9 26,614,6 24,814,6 26,513,4 Иммунорегуляторный индексПоказатели иммунограммы 3 часа 6 часов 12 часов 24 часа ДТН КЛИЧТВ ЛИКЦИТВ 220-340 970-1420 1840-2650 980-1870 Нейтрофилы, 72,111,6 52,915,1 41,712,7 31,213,1 Макрофаги, 15,911,5 44,712,8 55,811,4 65,313,8 Лимфоциты, 1,311 О,11 1,741 О,32 1,131 О,35 1,131 О,64 Т-лимфоциты, 47,813,1 46,311,9 48,712,1 48,212,7 Т-хелперы (С 1 Э 4), 26,111,1 26,412,2 25,511,8 26,812,1 Т-супрессоры (С 1 Э 8), 30,111,8 3 О,612,6 27,811,6 29,512,3 Иммунорегуляторный индексПоказатели иммунограммы 3 часа 6 часов 12 часов 24 часа ДН КЛИЧТВ Лейкщит 610-860 2140-2570 3990-4880 3610-3990 Нейтрофилы, 80,211,1 77,411,6 72,511,9 70,312,2 Макрофаги, 19,310,33 20,411,4 21,811,8 25,412,1 Лимфоциты, 2,1110,11 2,4310,21 3,2310,19 3,1110,53 Т-лимфоциты, 45,311,4 44,412,1 46,512,8 45,811,8 Т-хелперы (С 1 Э 4), 36,313,3 37,212,3 34,713,9 35,711,8 Т-супрессоры (С 1 Э 8), 21,311,8 22,512,7 20,611,9 20,511,3 Иммунорегуляторный индексИз таблиц видно, что для иммунограммы нормоергического типа характерно значительное устойчивое преобладание нейтрофильной эмиграции в пузырную жидкость с постепенным на протяжении суток нарастанием моноцитарной эмиграции лейкоцитов, иммунорегуляторный индекс на протяжении суток составляет 1,1-1,3.Иммунограмма гипоергического типа характеризуется устойчивой динамикой в течение суток нарастания моноцитарной эмиграции в пузырную жидкость с перекрестом меж 4