Способ повышения эффективности парентеральной иммунизации животных сухими живыми вакцинами

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПАРЕНТЕРАЛЬНОЙ ИММУНИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХ СУХИМИ ЖИВЫМИ ВАКЦИНАМИ(71) Заявитель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(72) Авторы Прудников Виктор Сергеевич Громов Игорь Николаевич Большакова Елена Ивановна Прибытько Светлана Петровна Михайлова Анжелика Владимировна Прудников Алексей Викторович Денисюк Анатолий Федорович(73) Патентообладатель Учреждение образования Витебская ордена Знак Почета государственная академия ветеринарной медицины(57) Способ повышения эффективности парентеральной иммунизации животных сухими живыми вакцинами, отличающийся тем, что в качестве растворителя вакцин используют раствор натрия тиосульфата.(56) Ветеринарное законодательство. т. 3. Москва, Колос, 1981. - С. 155-169.2097066 1, 1997.2102067 1, 1998.2080879 1, 1997.2155595 1, 2000. Изобретение относится к ветеринарии, в частности способам повышения эффективности парентеральной иммунизации животных против инфекционных болезней сухими живыми вакцинами. Оно может быть использовано в ветеринарной практике для повышения поствакцинального иммунитета у вакцинированных животных. Основную роль в профилактике и ликвидации вирусных и бактериальных болезней животных играет специфическая профилактика (иммунизация). В настоящее время для этого чаще используют сухие (леофилизированные) живые вакцины, приготовленные из ослабленных штаммов вирусов и бактерий. Перед применением их растворяют в стерильном физиологическом растворе (0,9 -ном растворе натрия хлорида) 2. Наиболее близким к предлагаемому изобретению является применение физиологического раствора для растворения сухой культуральной вирус-вакцины ВГНКИ против болезни Ауески свиней, крупного рогатого скота и овец 1. Для разведения вакцины,соблюдая правила асептики, вскрывают ампулу и в нее шприцем с иглой или пастеров 6670 1 ской пипеткой вливают 2-3 мл физиологического раствора и смешивают с помощью пипетки или шприца до полного растворения массы. Растворившуюся в ампуле вакцину переливают в приготовленный стерильный флакон необходимой емкости с резиновой пробкой. Ампулу промывают 2-3 раза физиологическим раствором, перенося жидкость из нее в стерильный флакон, в который добавляют физиологический раствор до соответствующего объема (разведения). Разведенную во флаконе вакцину перед применением встряхивают. Шприцы и иглы перед применением стерилизуют кипячением, место инъекции дезинфицируют. Вакцину вводят подкожно или внутримышечно, в зависимости от возраста и вида животных в область шеи или внутренней поверхности бедра. Однако иммунизация животных живыми вакцинами далеко не всегда бывает достаточно эффективной в силу ряда причин недостаточные иммуногенные, остаточные реактогенные (в том числе и иммунодепрессивные) свойства вакцин, снижение иммунного статуса животных. Цель изобретения - применение нового, неизвестного ранее растворителя сухих живых вакцин, обладающего иммуностимулирующими и десенсибилизирующими свойствами, с целью усиления иммуногенности и снижения остаточной реактогенности вакцин, повышения иммунного статуса и напряженности поствакцинального иммунитета у животных. Поставленная цель достигается тем, что в качестве растворителя сухих живых вирусвакцин при парентеральном их применении используют стерильный водный раствор натрия тиосульфата. Натрия тиосульфат стимулирует функцию макрофагов, Т-хелперов, оказывая положительное влияние на выработку иммунитета против инфекционных болезней бактериальной и вирусной этиологии. Усиление макрофагальной и Т-хелперной функции способствует ускорению и повышению эффективности индуктивной фазы иммунного ответа и, как следствие, более интенсивной продуктивной фазе иммуногенеза. При применении вакцин совместно с натрия тиосульфатом активизируются процессы иммуноморфологической перестройки центральных (красный костный мозг, тимус, бурса Фабрициуса у птиц) и периферических (селезенка, лимфатические узлы, кровь, железа Гардера, слепокишечные миндалины) органов иммунной системы у млекопитающих и птиц. Наличие в молекуле натрия тиосульфата атомов серы в степени окисления -2, выступающих в роли восстановителя, обуславливает десенсибилизирующее, антитоксическое и противовоспалительное действие препарата. Поэтому введение натрия тиосульфата совместно с вакцинами снижает их реактогенность. Способы применения изобретения 1. При парентеральной иммунизации свиней против сальмонеллеза сухой живой вакциной из шт. -177 в качестве растворителя вакцины используют свежий стерильный 30 -ный раствор натрия тиосульфата. Установлено, что применение 30 -ного раствора натрия тиосульфата в качестве растворителя сухой живой вакцины из шт. -177 значительно повышает иммуногенные свойства вакцины при снижении ее остаточных реактогенных свойств. В результате у вакцинированных животных активизируются иммуноморфологические реакции и формируется более напряженный поствакцинальный иммунитет, по сравнению с использованием вакцины без иммуностимулятора. В ткани на месте введения вакцины, в регионарных и контррегионарнах месту введения вакцины лимфоузлах и селезенке поросят, иммунизированных вакциной совместно с натрия тиосульфатом, активизировалась микро- и макрофагальная реакция, - и В-бласттрансформация и плазматизация. При вакцинации супоросных свиноматок вакциной из шт. -177, разбавленной 30 -ным раствором натрия тиосульфата, титры специфических антител были достаточно высокими как у самих свиноматок, так и у их поросят и превышали в 2-4 раза уровень у животных, иммунизированных одной вакциной (табл. 1). 2 6670 1 Таблица 1 Титры противосальмонеллезных агглютининов в сыворотке крови у свиноматок и их потомства на 25-й день после опороса Группы животных 1. Иммунизированы вакциной совместно с натрия тиосульфатом 2. Иммунизированы одной вакциной 3. Контроль 2. При парентеральной иммунизации свиней против сальмонеллеза сухой живой вакциной из супрессороного ревертанта ., шт.9 в качестве растворителя вакцины используют свежий стерильный 30 -ный раствор натрия тиосульфата. Установлено, что применение 30 -ного раствора натрия тиосульфата в качестве растворителя сухой живой вакцины против сальмонеллеза из супрессорного ревертанта ., шт.9 значительно повышает иммуногенные и снижает ее реактогенные свойства. Иммунизация поросят совместно с натрия тиосульфатом способствовала значительной активизации микро - и макрофагальной и плазмоцитарной реакции в ткани на месте введения вакцины, в лимфатических узлах, особенно регионарных, селезенки и увеличением в органах иммунной системы числа вторичных лимфоидных узелков. Одновременно, под воздействием натрия тиосульфата после 1-й вакцинации в сыворотке крови поросят достоверно повышалось содержание иммуноглобулинов класса , а после второй иммунизации - иммуноглобулинов классаизаметно возрастали титры против сальмонеллезных агглютининов (табл. 2). Таблица 2 Влияние натрия тиосульфата на содержание специфических агглютининов в сыворотке крови у поросят, парентерально вакцинированных против сальмонеллеза (м, ) Группы животных На 7-й день после первой иммунизации 1. Иммунизированы вакциной совместно с натрия тиосульфатом 2. Иммунизированы одной вакциной 3. Контроль На 14-й день после повторной иммунизации 1. Иммунизированы вакциной совместно с натрия тиосульфатом 2. Иммунизированы одной вакциной 3. Контроль На 21-й день после повторной иммунизации 1. Иммунизированы вакциной совместно с натрия тиосульфатом 2. Иммунизированы одной вакциной 3. Контроль Примечание 1-2 - 1-2 группы Р 1-3 - 1-3 группы Р 2-3 - 2-3 группы. 3 6670 1 В периферической крови иммунных животных под воздействием иммуностимулятора количество лейкоцитов увеличивалось в 1,1-1,4 раза по сравнению с животными, вакцинированными согласно Наставлению, и в 1,4-2 раза по сравнению с контролем. Одновременно повышалось в 1,3-1,5 раза относительное и абсолютное содержание В-лимфоцитов, насыщенных РНК. При изучении аутоиммунных реакций в периферической крови поросят, иммунизированных одной вакциной, во все сроки исследования возрастало количество бляшкообразующих клеток. При этом число их было в 24 раза выше, чем у животных, вакцинированных с иммуностимулятором, и 14 раз больше по сравнению с интактными поросятами. 3. При парентеральной иммунизации свиней против болезни Ауески сухой живой вакциной ВГНКИ в качестве растворителя вакцины используют свежий стерильный 30 -ный раствор натрия тиосульфата. Установлено, что иммунизация поросят против болезни Ауески вакциной ВГНКИ,растворенной в 30 -ном растворе натрия тиосульфата, сопровождается значительной активизацией микро- и макрофагальной реакций в ткани на месте введения вакцины, бласттрансформации - и В-лимфоцитов, плазмоцитарной реакции в регионарных лимфатических узлах и селезенке, пролиферативной и миграционной активности Т-лимфоцитов в тимусе, что способствует формированию более напряженного иммунитета к данной болезни, по сравнению с применением одной вакцины. Количество бляшкообразующих клеток оставалось на уровне иммунных животных, не получавших натрия тиосульфата, что свидетельствует о том, что данный препарат не повышает реактогенность вакцины. При вакцинации супоросных свиноматок вакциной ВГНКИ, разбавленной 30 -ным раствором натрия тиосульфата, титры специфических антител к вирусу болезни Ауески были достаточно высокими как у самих свиноматок, так и у их поросят и превышали в 2-4 раза уровень у животных, иммунизированных одной вакциной (табл. 3). Таблица 3 Титры вируснейтрализующих антител в сыворотке крови у свиноматок и их потомства на 25-й день после опороса Группы животных 1. Иммунизированы вакциной совместно с натрия тиосульфатом 2. Иммунизированы одной вакциной 3. Контроль 4. При парентеральной иммунизации свиней против классической чумы сухой живой вакциной из штамма ЛК-ВНИИВиМ в качестве растворителя вакцины используют свежий стерильный 30 -ный раствор натрия тиосульфата. Установлено, что в сыворотке крови иммунных животных под действием натрия тиосульфата титры антител возрастали в 2 и более раз и составляли у поросят группы доращивания 116-132 (30 ), 164 (50 ) и 1128 (20 ). Иммунная защищенность у животных разных возрастных групп, вакцинированных против чумы с иммуностимулятором с натрия тиосульфатом, составила 90-100 . У свиней, вакцинированных без иммуностимулятора, иммунная защищенность составила у поросят группы доращивания - 60 ,у подсвинков - 70 , у супоросных свиноматок и хряков - 80-90 . При изучении напряженности колострального иммунитета у поросят 30-35-дневного возраста, полученных от иммунных матерей, вакцинированных с натрия тиосульфатом,титры антител у 60 животных были 132, у 30- 116 и у 10- 12-14. Иммунная защищенность составила 90 . У поросят, полученных от иммунных матерей, вакцинированных согласно Наставления, иммунная защищенность была всего 40 , а титры антител были 116(30 ), 132(10 ), 10-14(60 ). 4 6670 1 5. При парентеральной иммунизации норок против чумы плотоядных сухой живой вакциной ВНИИЗЖ ЛК-ВНИИВиМ в качестве растворителя вакцины используют свежий стерильный 10 -ный раствор натрия тиосульфата. Установлено, что применение 10 -го раствора натрия тиосульфата в качестве растворителя сухой живой вакцины ВНИИЗЖ против чумы плотоядных способствует активизации иммунных процессов как специфического, так и неспецифического характера и созданию более напряженного иммунитета в организме вакцинированных норок. При оценке напряженности гуморального иммунитета в сыворотке крови (в РНГА) под действием натрия тиосульфата титры специфических антител достоверно увеличивались в 1,2-1,4 раза (табл. 4). Таблица 4 Титры специфических антител в сыворотке крови норок, вакцинированных против чумы плотоядных (РНГА, 2) Группы животных 1. Иммунизированы совместно с натрия тиосульфатом 2. Иммунизированы одной вакциной 3. Контроль На 14-й день Через 3 мес. Через 6 мес. Через 12 мес. после после после после вакцинации вакцинации вакцинации вакцинации 7,50,29 6,00,41 3,50,29 4,750,25 1-20,05 Р 1-20,05 Р 1-20,05 1-20,05 Р 1-30,001 1-30,001 1-30,001 1-30,001 6,750,25 5,50,29 2,50,29 40,0 Р 2-30,001 Р 2-з 0,01 Р 2-30,001 Р 2-30,01 0,000,00 0,250,25 0,000,00 0,250,25 Примечание Р 1-2 - 1-2 группы Р 1-3 - 1-3 группы Р 2-3 - 2-3 группы. 6. При парентеральной иммунизации цыплят против болезни Марека вирус-вакциной из штамма ФС-126 вируса герпеса индеек и апатогенного штамма ВНИВИП в качестве растворителя вакцины используют свежий стерильный 7 -ный раствор натрия тиосульфата. Установлено, что при парентеральной иммунизации однодневных цыплят сухой живой вирус-вакциной из штамма ФС-126 вируса герпеса индеек и апатогенного штамма ВНИВИПпротив болезни Марека, растворенной в 7 -ном растворе натрия тиосульфата,отмечается, по сравнению с введением вакцины без иммуностимулятора, более интенсивная плазмоцитарная реакция в Фабрициевой бурсе, селезенке, слепокишечных миндалинах, дивертикуле Меккеля, железе Гардера, за счет плазмобластов, незрелых и зрелых плазматических клеток, что отражает общую иммунную перестройку организма цыплят,которая коррелирует с усилением фагоцитарной активности псевдоэозинофилов, накоплением в крови иммуноглобулинов , ,и специфических антител в 2,3 раза (Р 0,05),чем обуславливает невосприимчивость их к вирусу болезни Марека. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.