Применение 4′-йодо-4′-деоксидоксорубицина для лечения амилоидоза, способ лечения амилоидоза

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ ПАТЕНТНЫЙ КОМИТЕТ РЕСПУБЛИКИ БЕЛАРУСЬ(71) Заявители Поликлинико Сан Маттео, Иституто Ди Риковеро Э Кура А Караттере Шиентифико Ди Диритто Публико, Иституто Национале Пер Ло Студио Э Ла Кура Деи Тумори(73) Патентообладатели Поликлинико Сан Маттео, Иституто Ди Риковеро Э Кура А Караттере Шиентифико Ди Диритто Публико Иституто Национале Пер Ло Студио Э Ла Кура Деи Тумори(57) 1. Применение 4-йодо-4-деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей в качестве средства индукции распада фибрилл амилоида и ингибирования фибриллогенеза при лечения амилоидоза. 2. Способ лечения амилоидоза за счет индукции распада фибрилл амилоида и ингибировании фибриллогенеза, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества 4-йодо-4 деоксидоксорубицина или его фармацевтически приемлемых солей. 3. Способ по п. 2, отличающийся тем, что 4-йодо-4-деоксидоксорубицин вводят пациенту внутривенно при ежедневной дозировке, составляющей от 15 мг/м 2 до 30 мг/м 2 площади тела в виде раствора, содержащего фармацевтически приемлемые носители или разбавители, в течение периода времени в интервале от 2 до 4 недель.(56) 1.4438105 , 1984. 2.0275966 1, 1988. 3.0502661 2, 1992. Данное изобретение относится к новому применению известного антрациклина с противоопухолевой активностью. Более конкретно - изобретение относится к новому применению 4-йод-4-деоксидоксорубицина и его фармацевтически приемлемых солей при лечении амилоидоза. 4-йод-4-деоксидоксорубицинформулы 3838 1 описан в 1 и др. вместе со способом его получения. Указанный антрациклин, который отличается от доксорубицина тем, что гидроксил сахара замещен в положении 4 одним атомом йода, обладает высокой противоопухолевой активностью. Термин амилоидоз относится к различным болезненным состояниям, обладающим в качестве общей характерной черты тенденцией определенных белков к полимеризации и осаждению во внеклеточном пространстве в виде нерастворимых фибрилл, вызывая структурные и функциональные повреждения органов и тканей. Хотя они содержат огромное разнообразие белковых субъединиц, тем не менее различные типы амилоидов имеют одинаковое ультраструктурное строение в виде переплетающихся -пластов. Фибриллы образуются из отдельных легких цепей моноклональных иммуноглобулинов многочисленных других амилоидогенных белков таких, как протеин АА, транстиретин, -2-микроглобулин, бета-протеин, которые вызывают амилоидоз. Итак, неожиданно было установлено, что , и, в частности, его гидрохлорид, является активным в том смысле, что он вызывает разложение амилоидных фибрилл. Взаимодействие лекарственный препарат/фибрилла является основой успешного клинического результата, наблюдаемого у пациентов, больных амилоидозом. В связи с тем, что известна структура их в виде бетапластов, общая для всех видов амилоидоза, 4-йод-4-деоксидоксорубицин представляется перспективным для лечения всех видов амилоидоза. Экспериментальные данные, относящиеся к соединениюс амилоидными фибриллами различных биохимических композиций. Предварительно определенное количество амилоидных фибрилл (1 мг/мл) термостатировалось с различными концентрациями гидрохлорида . Инкубирование осуществлялось в физиологическом растворе в течение 2 часов, при этом система подвергалась постоянному спокойному перемешиванию. Затем фибриллы центрифугировались при 5000 об/мин и проводилось определение оптической плотности всплывшей части при 478 нм. Процедура промывания повторялась три раза. После окончательного этапа центрифугирования осуществлялся количественный и качественный анализ связи с фибриллами с использованием таблетирования. Количественный анализ Таблетка суспендировалась в фосфатном буферном растворе (ФБР) и затем термостатировалась в течение ночи с ферментом протеазы. Такая обработка вызывает полный гидролиз белков. Количество связанного фибрилламиможет быть измерено в всплывшем слое жидкости спектрофотометрированием при 478 нм. Испытания показали связывание 41 мгна 1 мг фибрилл. Приведенные данные были получены при исследовании амилоидных фибрилл двух пациентов ( и), страдающих амилоидозом. Качественный анализ Качественный анализ, проведенный с использованием иммунофлюоресцентного микроскопа, был осуществлен с применением спектрофлюориметрических свойств . Был определен состав из следующих фибрилл легкие иммуноглобулиновые цепочкиамилоид А (АА) 2-микроглобулин-протеин (АВ) транстиретин (Вар.30) . Фибриллы инкубировались с 10-7 и св 0,15 М-ом растворев течение 1 часа и экстенсивно промывались 0,15 М раствором . Характерная антрациклиновая флуоресценция оценивалась возбуждением при 484 нм и отсчетом при 610 нм. Все фибриллы, инкубированные с , показали интенсивную флуоресценцию, в то время, как соответствующие фибриллы, термостатированные с , не обнаружили заметной флуоресценции. Ингибирование образования инсулиновой фибриллы. 10 мг коммерческого бычьего инсулина, суспендированного в 1 мл (1.74 х 10-3 М) 5 уксусной кислоты,инкубировались в течение двух часов при 85 С до образования прозрачного геля. После замораживания при-80 С, нагревания до 37 С и повторения этой процедуры 5 раз фибриллы подвергались центрифугированию в микроцентрифуге. Производилось добавлениеив различных молярных отношениях к фибриллярному белковому предшествующему соединению (инсулину). (- инсулин 11, 12, 14, 18)., а не , полностью ингибировал образование амилоидных фибрилл при молярных соотношениях 11 и 12 и частично при молярном отношении 14. 2 3838 1 Испытания показывают, чтоингибирует фибриллогенез. Экстракция гликоламиногликановиз амилоидных фибрилл и оценка их связывания применением .выделялись из амилоидных фибрилл с применением ионообменной хроматографии в присутствии 6 М мочевины. Метод осуществлялся с использованием жидкостной хроматографии быстрого разрешения с колонкой. Фибриллы растворялись в 50 мМ фосфатного буфера с рН 5, содержащего СМ мочевины и 0,2. Выделение производилось при 0-5 молярном градиенте . При использовании этого метода белковые фибрилльные компоненты выделялись из гликозаминогликанов (дерматан и гепаран сульфат) без какой-либо необратимой денатурации. Выделенный белковый компонент подтверждает высокое сродство для , наблюдаемое в природных фибриллах. Результаты этих испытаний показывают, что гликозаминогликаны, хотя и являются наиболее распространенными компонентами амилоидных фибрилл, не являются необходимыми для связывания с . На основе полученных результатов можно сделать заключение, чтои его фармацевтически приемлемые соли могут успешно использоваться для лечения пациентов, страдающих от амилоидоза. Прием осуществляется парентерально в виде соответствующих инъецируемых водных растворов. Названные растворы могут быть получены с применением стандартного метода в присутствии обычных носителей и/или разбавителей (см., например, публикацию .и др. Активность и токсичность 4-йод 4-деоксидоксорубицина у пациентов с прогрессирующим раком грудной железы 2719725, 1991). Дозы могут варьироваться от 5 до 150 мг/м 2 площади тела в неделю при внутривенном введении. Предпочтительными вариантами дозировок являются от 15 мг/м 2 до 30 мг/м 2 площади тела в неделю при внутривенном введении в течение двух-четырех недель. Ниже даются основные клинические данные, касающиеся 5 пациентов. Пациент 1. Этот случай относится к пациенту мужского пола (ЕР) 45 лет, страдающему множественной миеломой и амилоидозомс широко распространенным кожным и мышечным разложением. В июле 1991 г. он перенес аутогенную пересадку костного мозга. Ему была назначена внутривенная дозировкав 190 мг в течение 4 часов. Уже на следующее утро у пациента наблюдалось значительное улучшение кожи и подвижности конечностей. В течение следующих дней наблюдалось большое количество выделяемых с мочой амилоидозных белковых фрагментов наряду со значительным снижением амилоидных отложений в коже и отложений на уровне межжелудочковой сердечной перегородки (с 13 до 10 мм). Ячеистое улучшение в подвижности конечностей и в амилоидных отложениях сохранялись в течение следующих шести месяцев без дальнейшего лечения. Пациент 2. Этот случай касается пациента мужского пола 57 лет, страдающего от амилоидозас обширным поражением желудочно-кишечного тракта (8-10 диарейных опорожнений в день), подвергшемуся значительной потере веса в 15 кг за шесть месяцев (вес 64 кг) и с признаками нефротического симптомокомплекса (протеинурия 7 г/день). Он подвергался лечению шестью циклами мельфалана и преднизона, закончившемуся в январе 1991 г без какого-либо результата. В феврале 1992 г. его пролечили двумя дозами (80 и 100 мг/м 2) . Непосредственно после лечения наблюдались ячеичное ухудшение диареи, частично регулируемое соматоститином (зарегистрированный товарный знак), и протеинурии (41 г/день), однако в течение последующих месяцев состояние внутренних органов брюшной полости постепенно улучшалось с ячеистым снижением в кишечных опорожнениях (3-4 раза/день). Пациент вновь восстановил вес (68 кг) и протеинурия восстановилась приблизительно до 4 г/день. Общее состояние пациента значительно улучшилось до такой степени, что он имел возможность вернуться к работе. Пациент 3. Этот случай относится к пациенту женского поля , страдающему от амилоидоза , главным образом, почечного расположения нефротический симптомокомплекс с протеинурией (7 г/день) и с селезеночным расположением, диагносцированным в 1991 г. С декабря 1991 г. по май 1992 г. пациент подвергался лечению алкилирующими агентами без какого-либо улучшения. В июне пациенту было сделано сцинтиграфическое исследование на амилоидные отложения с применением 131-, которое подтвердило их почечное и селезеночное расположение. В июле 1992 г. пациент подвергся лечениюпри внутривенной дозе 30 мг/м 2 в неделю в течение двух недель и 15 и 20 мг/м 2 в последующие два приема. 3838 1 После первоначального повышения протеинурия снизилась до 6 г/день, и эта величина сохранялась в течение последующих шести месяцев. Пациент 4. Этот случай относится, к пациенту мужского полав возрасте 70 лет, страдающему плазмацитомой и амилоидозом А ( ). Диагноз был поставлен в июле 1991 г., когда пациент начал жаловаться на интенсивную боль в крестцовой области, распространяющуюся на левую нижнюю конечность, такую, что создавалась трудность при хождении. Инструментальное исследование показало присутствие твердой массы диаметром около 10 см,определяющей разрушение одной стороны крестца и левой подвздошной области, обладающей распространяющимся действием в тазовой полости, проникающей в позвоночный канал и пропитывающей ягодичные мышцы. Исследование биопсии показало наличие амилоидомы. Между октябрем 1991 и январем 1992 г. пациент подвергался лечению кобальтом в количестве 75 сеансов с общим облучением 50 Грей, а в марте 1992 г. был начат цикл химиотерапевтического лечения циклофосфамидом при 500 мг/день в течение 5 дней в месяц с общим количеством в 6 циклов, однако без какогонибудь радиографически очевидного снижения размера амилоидомы или уменьшения болевой симптоматологии. В ноябре 1992 г. было проведено сцинтиграфическое исследование амилоидных отложений с применением 131-, которое подтвердило нахождение радиоизотопа в крестцовом отделе. Затем пациент был подвергнут лечению с использованиемпри внутривенной дозировке 30 мг/м 2 в течение двух недель и 20 мг/м 2 в течение следующих двух недель, что привело к почти немедленному снижению в болевой симптоматологии, так, что это побудило его к отказу от приема анальгетиков. Ультразвуковое диагностическое исследование, проведенное в январе 1993 г., показало снижение массы ягодичного инфильтрата (с 12 см до 5 см), в то время как магнитный резонанс тазовой области показал снижение диаметра амилоидомы приблизительно с 10 см до 8 см. Улучшение в болевой симптоматологии сохранялось в течение 14 месяцев после лечения . Сцинтиграфическое исследование амилоидных отложений, проведенное с использованием 131- через месяц после леченияи спустя 14 месяцев после него, показало постепенное, но полное рассасывание амилоидных отложений. Пациент 5. Этот случай относится к пациенту мужского поляв возрасте 48 лет, страдающему амилоидозом, размещенным, в основном, в почечной и селезеночной области. Нарушения начались в сентябре 1992 г. с появления опускающихся отеков. Биологическое исследование анализа тканевой жидкости показало присутствие большой протеинурии (12,6 г/день), дислипемии и электрофоретические серопротеиновые симптомы, совместимые с нефротическим синдромом. В течение сентября пациент подвергся исследованию с применением ультразвуковой почечной биопсии,которая показала присутствие амилоидных скоплений на уровне клубочковых и интерстициальных сосудов. Было начато лечение кортикостероидными препаратами, но вскоре оно было прервано из-за неэффективности. В январе 1993 г. пациент подвергся сцинтиграфическому обследованию на амилоидные отложения с применением 131-, которое выявило значительное скопление радиоизотопа на селезеночном и почечном уровнях. В течение февраля пациент подвергся лечениюпосредством внутривенных вливаний при дозировке в 30 мг/м 2 при общем назначении 4-х приемов. К марту 1993 г. спускающиеся отеки явно уменьшились, измерения ежедневной протеинурии составили приблизительно 6 г/день, а ультразвуковой контроль показал, что размеры селезенки снизились с 12,3 см Государственный патентный комитет Республики Беларусь. 220072, г. Минск, проспект Ф. Скорины, 66. 4