Штамм бактерий Salmonella cholerae suis КМИЭВ-В126 – штамм-антиген

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(72) Авторы Финогенов Артм Юрьевич Лемиш Артм Петрович Андрусевич Андрей Сергеевич Финогенова Елена Геннадьевна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(56) МЕДВЕДЕВ А.П. и др. Ученые записки учреждения образования Витебская ордена Знак почета государственная академия ветеринарной медицины. Т. 40. Ч. 1. - Витебск, 2004. С. 251-252.20803 4, 2009.2255763 2, 2005.2246316 1, 2005.2163142 2, 2001. Технология производства вакцин против сальмонеллеза телят и поросят. Учебно-методическое пособие. - Витебск, 2004. - 21 с. АМОСОВА Л.А. и др. Эпизоотология,иммунобиология, фармакология, санитария. - 2010. -2. - С. 54-57.(57) Штамм бактерийКМИЭВ-В 126 - штамм-антиген. Изобретение относится к микробиологической промышленности и касается штамма,предназначенного для конструирования вакцины против сальмонеллеза пушных зверей,средств диагностики, специфической профилактики и лечения. Известен штамм 370, максимальная удельная скорость роста которого в процессе культивирования составляет 8 ч, максимальное накопление бактериальной массы достигало до 25 млрд. м.т./см 3, а выживаемость бактерий составляла 931. Данные штамм обладает недостаточной удельной скоростью роста в процессе культивирования, слабым накоплением бактериальной массы и низкой выживаемостью бактерий для изготовления биопрепаратов в промышленных объемах. Известен штамм-177, исходные культуры которого являются непатогенными, при подкожном введении которого в дозе 10 млн. м.к./см 3 вызывает гибель не более 2 из 10 белых мышей массой 16-18 г. Иммуногенность которого составляет 80 . Антигенная активность - 7 2 2. На МПБ штамм через 8-10 ч роста вызывает равномерное помутнение среды, на МПА образует колонии -формы, на МППЖА - диффузный рост. Штамм при посеве на среде,содержащей углеводы и многоатомные спирты, ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, манит, сорбит, дульцит, арабинозу, ксилозу, не ферментирует лактозу, саха 17917 1 2014.02.28 розу, не свертывает молоко, не разлагает желатин, не образовывает индол, образует сероводород 2. Недостатком данного штамма является то, что он непатогенен для животных, и изготовление вакцин из такого штамма может привести к снижению антигенной и иммуногенной активности, а следовательно, и защитных свойств. Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является получение штамма, обладающего максимальной удельной скоростью роста в процессе культивирования, наибольшим накоплением бактериальной массы, высокой выживаемостью бактерий, патогенностью, антигенностью и иммуногенностью для изготовления вакцины. Поставленная задача достигается тем, что штаммКМИЭВВ 126 - штамм-антиген выделен из селезенки норки двухмесячного возраста в 2008 г. в ЧУП Белкоопвнешторг Белкоопсоюза Бобруйском сельскохозяйственном отделении Зверохозяйство Могилевской области. ШтаммКМИЭВ-В 126, штамм-антиген депонирован в коллекции микроорганизмов РУП Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского. Коллекционный номер КМИЭВ-В 126. Таксономическая принадлежность. Микроорганизм отнесен к видуродусемейства . Патогенность для животных. ШтаммКМИЭВ-В 126, штаммантиген патогенен для пушных зверей и лабораторных животных при подкожном введении вызывает гибель белых мышей массой 14-16 г. Культурально-морфологические признаки. Данный микроорганизм в мазках, приготовленных из бульонных и агаровых культур, окрашенных по Граму, имеет вид мелких грамотрицательных палочек, размером 0,7-1,52-5 мкм, располагающихся изолировано,реже парами, цепочками. Культура сальмонелл подвижная, спор и капсул не образует. Факультативный анаэроб. В МПБ, бульоне на основе перевара Хоттингера в первый день выращивания дает легкое равномерное помутнение среды на 2-4 день на дне пробирки образуется характерный слизистый осадок, поднимающийся при встряхивании пробирки в виде косички с просветлением бульона. На МПА, агаре на основе перевара Хоттингера образует мелкие прозрачные круглые с ровными краями колонии слизистой консистенции диаметром 1,0-3,0 мм. На агаре Эндо растет в виде серовато-голубых прозрачных круглых колоний, на висьмут-сульфитном агаре - темно-зеленых колоний с ровными краями. Биохимические свойства. ШтаммКМИЭВ-В 126 - штаммантиген обладает способностью ферментировать глюкозу, маннит, арабинозу с образованием кислоты без газа, не ферментирует сахарозу, лактозу, раффинозу, мальтозу, дульцит,образует индол, сероводород, утилизирует цитраты, не продуцирует гемолизин и уреазу. Антигенный состав. Имеет в своем составе - и - антигены. Другие особенности и маркерные свойства. Типизацию сальмонелл проводят согласно Наставления по применению наборов сывороток сальмонеллезных -комплексных и монорецепторных - и -агглютинирующих. Условия хранения. Хранят в ампулах после лиофильного высушивания в сахарозожелатиновой среде при температуре 24 С в течение 5 лет. Сохранность культуры обеспечивается путем пересева на питательные среды - ПЖА, бульон Хоттингера, МПА на основе перевара Хоттингера 1 раз в течение месяца. Антигенные свойства. Антигенная активность штаммаКМИЭВ-В 126 - штамм-антиген в РИГА составляет 8 2. Иммуногенность штаммаКМИЭВ-В 126 - штамм-антиген составляет 90 . Вирулентность. ШтаммКМИЭВ-В 126, штамм-антиген обладает высокой вирулентностью 50, которая составляет для белых мышей 0,3105 м.к. 17917 1 2014.02.28 Устойчивость к антибиотикам. ШтаммКМИЭВ-В 126 - штаммантиген чувствителен к следующим антибактериальным препаратам левомицетину, гентамицину, энроксилу ( 5), спектиномицину, канамицину, флумеквину (флумизолу),окситетрациклину. 1. Пример выделения штаммаКМИЭВ- В 126 - штамм-антиген. ШтаммКМИЭВ-В 126 - штамм-антиген выделен при посеве кусочков селезенки на границе патологической и здоровой ткани на бульон Хоттингера. В первые сутки выращивания отмечали легкое равномерное помутнение среды, иногда образовывание пристеночного кольца. Через 7-10 дней хранения при температуре 24 С на дне пробирки образовывался характерный слизистый осадок с полным просветлением бульона. 2. Пример определения ростовых свойств штаммаКМИЭВВ 126 - штамма-антигена. Ростовые свойства определяли в процессе культивирования в реакторе по следующим параметрам максимальная удельная скорость роста, максимальное накопление бактериальной массы и выживаемость бактерий. Культивирование проводили в реакторах на мясо-пептонном бульоне при температуре 37 С,- 7,2, скорости перемешивания 120 об/мин, аэрации - 500 см 3 воздуха на 1 л среды. Исследуя через каждые два часа концентрацию бактерий в питательной среде и их выживаемость. Результаты исследований показали, что у штаммаКМИЭВВ 126 - штамма-антигена максимальная удельная скорость роста в процессе культивирования составила 6 часов, а максимальное накопление бактериальной массы достигало до 35 млрд. м.т./см 3, при 100 -ной выживаемости бактерий. 3. Пример определения вирулентных свойств штаммаКМИЭВ-В 126 - штамм-антиген. Вирулентные свойства изучали в опытах на белых мышах живой массой 16-18 г с этой целью готовили суспензию суточной агаровой культуры данного штамма в физиологическом растворе натрия хлорида. Животных заражали десятикратными разведениями подкожно в области спины в дозе 0,5 мл. За опытными животными вели наблюдение в течение 10 суток после заражения. На каждую заражающую дозу использовали по 10 животных. Расчет 50 проводили по методу Кербера в модификации Ашмарина результаты исследований показали, что 50 штаммаКМИЭВ-В 126 - штамма-антигена составила для белых мышей 0,3105 м.к. 4. Пример определения иммуногенной активности штаммаКМИЭВ-В 126 - штамма антигена. Иммуногенную активность штаммаКМИЭВ-В 126 - штамма-антигена изучали на щенках норки в возрасте 1,5-2 месяца(10 иммунизированных - опытных и 10 контрольных). Через 15 дней после иммунизации всем опытным животным и контрольным инъецировали предварительно подтитрованную дозу 50 бактериальную культуры штаммаКМИЭВ-В 126 штамма-антигена. Результаты реакции показали, что в опытной группе пало одно животное, клинических признаков заболевания не наблюдали. Следовательно, иммуногенная активность штаммаКМИЭВ-В 126 - штамма-антигена составляет 90 , в то время как в прототипе она равна 80 . 5. Пример определения антигенной активности штаммаКМИЭВ-В 126 - штамма-антигена. Антигенные свойства изучали в реакции непрямой гемагглютинации в разведении сыворотки до 1024. В качестве антигена использовали бактериальную культуру штаммаКМИЭВ-В 126 - штамма-антигена. Результаты реакции показали, что антигенная активность штаммаКМИЭВ-В 126 - штамма-антигена составляет 8 2. Таким образом, штаммКМИЭВ-В 126 - штамм-антиген, выделенный от пушных зверей, обладает высокими ростовыми свойствами бактериальной массы до 35 млрд. м.т./см (у известного штамма 25 млрд. м.т./см 3) с выживаемостью бактерий 100(у известного штамма 93 ), максимальной удельной скоростью роста 6 часов (у 3 17917 1 2014.02.28 известного штамма 8 часов), высокой вирулентностью 50 для белых мышей 0,3105 м.к. (у известного штамма 50 для белых мышей 106 м.к.), более высокой иммуногенностью 90(у известного штамма 80 ) и антигенной активностью 8 2 (у известного штамма 7 2), что является важным в процессе формирования иммунного ответа и создания биопрепаратов, поэтому он может использоваться в качестве штамма-антигена. Источники информации 1. Медведев А.П., Даровских С.В. Влияние качества посевного материала на рост сальмонелл при глубинном культивировании /Ученые записки Витебск. гос. вет. акад. Витебск, 2004. - Т. 40. Ч. 1. - С. 253-254. 2. Дремач Г.Е. Технология производства вакцин против сальмонеллеза телят и поросят Учебное пособие для студентов, аспирантов. - Витебск, 2003. - 21 с. (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4