Рекомбинантный вирус MVA и его применение

8. Рекомбинантный вирус МУА по п. 1 или 2, отличающийся тем, что чужеродный ген кодирует РНК-полимеразу Т 7.9. Рекомбинантный вирус МУА по п. 8, отличающийся тем, что является МУА-Т 7 ро 1.10. Рекомбинантный вирус МУА по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что чужеродньп 71 ген находится под транскрипционным контролем раннего/позднего промотора Р 7.5 вируса коровьей оспы.11. Рекомбинантный вирус МУА по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что, по существу, очищен от вирусов, способных реплицирсваться в клетках человека.12. Рекомбинантный вирус МЧА, содержащий и способньпй экспрессировать чужеродныи ген, кодирующии антиген или антигенную детерминанту тирозиназы человека, причем указанный ген встроен в геном МУ А.13. Рекомбинантный вирус МУА по п. 12, отличающийся тем, что чужеродный ген находится под транскрипционным контролем раннего/позднего промотора Р 7.5 вируса коровьеи оспы.14. Рекомбинантный вирус МУА по п. 12 или 13, отличающийся тем, что, по существу,очищен от вирусов, способных реплицирсваться в клетках человека.15. Рекомбинантный вирус МУА, содержащий и способньщ экспрессировать чужеродный ген, кодирующий антиген или антигенную Детерминанту Нет ВИЧ, причем указанный ген встроен в геном МУА.16. Рекомбинантный вирус МУА по п. 15, отличающийся тем, что чужеродный ген находится под транскрипционным контролем раннего/позднего промотора Р 7.5 вируса коровьей оспы.17. Рекомбинантный вирус МУА по п. 15 или 16, отличающийся тем, что, по существу,очищен от вирусов, способных реплицирсваться в клетках человека.18. Применение рекомбинантного вируса МУА по п. 8 или 9 для транскрипции ДНКпоследовательностей под транскрипционным контролем промотора РНК-полимеразы Т 7.19. Рекомбинантный вирус МУА по любому из пп. 1-17, введенный в эукариотическую клетку.20. Рекомбинантный вирус МУА по п. 19, отличающийся тем, что введен в эукариотическую клетку, которая дополнительно содержит один или несколько экспрессионных векторов, несущих один или несколько чужеродных генов под транскрипционным контролем промотора РНК-полимеразы Т 7, причем указанные клетки используются для продуцирования полипептидов, кодируемых указанньпи чужеродным геном.21. Рекомбинантньтй вирус МУА по п. 19, отличающийся тем, что введен в эукариотическую клетку, которая дополнительно содержита) один или несколько экспрессионных векторов, несущих один или несколько чужеродньтх генов под транскрипционным контролем промотора РНК-полимеразы Т 7, иб) экспрессионный вектор, несуцшй вирусные гены и/или вирусную векторную конструкцию, кодирующую геном вирусного вектора под транскрипционньтм контролем промотора РНК-полшиеразьт Т 7, причем указанные клетки используются для продуцирования вирусных частиц.22. Рекомбинантный вирус МУА по п. 19, отличающийся тем, что введен в эукариотическую клетку, которая дополнительно содержита) экспрессионный вектор, несущий ретровирусную векторную конструкцию, способную инфицировать клетки-мишени и регулировать в клетках-мишенях экспрессию одного или нескольких чужеродных генов, присутствующих в указанной ретровирусной векторной конструкции, иб) один или несколько экспрессионных векторов, несущих гены, кодирующие полипептиды, необходимые для упаковки генома указанной ретровирусной векторной конструкции,под транскрипционным контролем промотора РНК-полимеразы Т 7, причем указанные клеткииспользуются для продуцирования ретровирусных частиц. 23. Рекомбинантный вирус МУА по п. 19, отличающийся тем, что введен в эукариоти ЧССКУЪО КЛСТКУ, которая ДОПОЛНИТЕЛЬНО СОДЕРЖИТа) один или несколько экспрессионных векторов, несущих один или несколько чужеродных генов под транскрипционным контролем промотора РНК-полимеразы Т 7, б) экспрессионный вектор, несущий ретровирусную векторную конструкцию, способную инфицировать клетки-мишени и регулировать в клетках-мишенях экспрессию одного или нескольких чужеродных генов, присутствующих в указанной ретровирусной векторной конструкции, ив) один или несколько экспрессионных векторов, несущих гены, кодирующие полипептиды, необходимые для упаковки генома указанной ретровирусной векторной конструкции,под транскрипционным контролем промотора РЪПС-полимеразы Т 7, причем указанные клетки используются для продуцирования ретровирусных частиц.24. Применение рекомбинантного вируса МУА по любому из пп. 1-17 для получения вакЦины.25. Применение рекомбинантного вируса МУА по любому из пп. 1-17 для иммунизации млекопитающего, включая человека.26. Линия клеток СЕЕ, инфицированных вектором МУА-ЬТУР по п. 6 или 7, как продуЦент рекомбинантной тирозиназЬ 1 человека и вирусных частиц МУА-ЬТУР.27. Линия клеток СЕЕ, инфицированных вектором МУА-ЬАШеГ по п. 6 или 7, как продуЦент рекомбинантного белка МеГ И вирусных частиц МУА-ЬАШеЕ28. Вакцина для профилактики или лечения ВИЧ-инфекции и СПИД, содержащая рекомбинантный вирус МУА, включающий ген, кодирующий антиген или антигенную детерминанту МеГ ВИЧ, и физиологически приемлемый носитель.29. Вакцина для профилактики или лечения меланом, содержащая рекомбинантный вирус МУА, включающий ген, кодирующий антиген или антигенную детерминанту тирозиназы Человека, и физиологически приемлемьпй носитель.30. Вакцина для профилактики или лечения ВИЧ-инфекции и СПИД, содержащая в качестве первого компонента рекомбинантный вирус МУА по п. 8 или 9 в физиологически приемлемом носителе И в качестве второго компонента ДНК-последовательность, включающую ген, кодирующий антиген или антигенную детерминанту Нет ВИЧ под контролем промотора РНК-полимеразы Т 7, в физиологически приемлемом носителе.31, Вакцина для профилактики или лечения меланом, содержащая в качестве первого компонента рекомбинантный вирус М 7 А по п. 8 или 9 в физиологически приемлемом носителе и в качестве второго компонента ДНК-последовательность, включающую ген, кодирующий антиген или антигенную детерминанту тирозиназы человека под контролем промотора РНК-полимеразы Т 7, в физиологически приемлемом носителе.32. Применение рекомбинантного вируса МЧА по п. 8 или 9 для получения вакцины по П. 30 или 31.33. Применение вакцины по любому из пп. 28-31 для иммунизации млекопитающего,включая человека.34. Способ профилактики ВИЧ-инфекции и СПИД у млекопитающего, включая человека,включающий иммунизацию указанного млекопитающего вакциной по п. 28 или 30.35. Способ профилактики меланом у млекопитающего, вкшочая человека, включающий иммунизацию указанного млекопитающего вакциной по п. 29 или 31.Настоящее изобретение относится к рекомбинантному вирусу коровьей оспы, происходящему ОТ МОДИФИЦИРОВдННОГО ВИРУСЗ коровьей оспы Анкара (МЧА) а также содержащему И СПОСОНОМУВИЗУСОВ МЧА ДЛЯ продуцирования ПОЛИПЭПТИДОБ, например ЭНТИГЕНОВ ИЛИ терапевтических ЭГЭНШОВ, ИЛИ ВИрУСНЬШ векторов ДЛЯЦелью настоящего изобретения является получение реком бинантного вируса МПА, который может быть использован в ка честве эффективного и абсолютно безопасного зкспрессионного вектора.Другой целью настоящего изобретения является разработка простого, эффективного и безопасного способа продуцирования полипептидов, например, антигенов или терапевтических агентов, а также получения рекомбинатных вирусов для изготовления вакцин, и вирусных векторов для использования в геннойтерапии. Еще одной целью настоящего изобретения является получе ние ЭКСПрЕ-ЭССИОННОЙ СИСТЕМЫ на ЬСНОВЕ рекомбинантного вируса МЧА, экспрессирующего РНКполимеразу Т 7 и разработка спосо бов продуцирования полипептидов, например, антигенов или терапевтических агенов, или генерирования вирусных векторов ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВЭНИЯ В ГЕННОЙ терапии, ИЛИ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВаКЦИНна основе указанной зкспрессионной систем.Вирус коровьей оспы, принадлежащий к роду Ортопоксвиру сов семейства Поксвирусов, был использован в качестве живойвакцины для иммунизации человека В целях продуцирования унего имунитета против натуральной оспы. (тье 91 оЬа 1 егао 1 са 1 оп ой 5 ша 11 рох. 1 па 1 герогг ой сие 91 оЬа 1 сошш 15 з 1 оп Бог Ьпе сегЬ 1 Е 1 сак 1 оп оЕ вша 11 рох егао 1 сас 1 оп. Н 15 Согу оЕ РПЬ 11 С НЕа 1 д 5 Бепена Ыол 1 о Неа 1 п О 9 ап 15 ап 1 оп 1980). Со времени подписания декларации ВОЗ (Всемирная органивацин здравоонранения ИНО всеобщая вакцинация бьша прекращена, за исключением людей с высоким риском заражения поксовирусом (например, лаборантов).Позже, вирусы коровьей оспы были также использованы для конструирования вирусных векторов, предназначавшихся для,вкспрессии рекомбинантных генов и для возможного их применения в качестве живых вакцин (МаскеЬЬ М. зш 1 п 6.Ь. Мо 55 В. 1982 Р.М.А.8. ПЗА 79, 74157419 5 шЬЬ 6.Ь. МаскеЕ М. Мозг, В. 1984, В 1 оесЬпо 1 о 9 у 6 епеЬ 1 с Еп 91 пеел 1 п 9 Ке ч 1 еш 5 2, 383-407. Это дает возможность получить ДНКпосле довательности тены) кодирующие чужеродные антигены и встроенные, с помощью техники рекомбинантных ДНК, в геном вируса коровьей оспы. Если ген интегрируется в сайт вирусной ДНК.которы не имеет решающего значения для жизненного Цик ла вируса, то вновь продуцируемый рекомбинантный вирус коро вьей оспы может быть инфекционны то есть, он может инфицировать чужеродные клетки, в результате чего будет экспрессиироваться интегрированная ДНКпоследовательность (Европейскиепатентные заявки шт 83286 и 110385). Полученные таким об разом рекомбинантные вирусы коровьей оспы могут быть исполь 45