Моноклональное антитело VFF-18, его аналоги и линия клеток гибридомы

7. Антитело к эпитопу с аминокислотной последовательностью, кодируемой вариабельным экзоном уб гена СВ 44, полученное рекомбинантной и/или ферментативной,и/или химической модификацией антитела УРР-18 без изменения аминокислотной последовательности области места связывания указанного антитела, или его фрагмент.8. Антитело по п. 7, отличающееся тем, что оно связано с другой молекулой, отличнои от антитела, 9. Антитело по п. 7, отличающееся тем, что оно связано с полипептидом.10. Антитело по п. 7, отличающееся тем, что оно связано с токсином.11. Антитело по любому из пп. 8-10, отличающееся тем, что оно связано с радиоактивным изотопом.12. Рекомбинантное антитело к эпитопу с аминокислотной последовательностью кодируемой вариабельным экзоном уб гена С 1 Э 44, имеющее аминокислотную последовательность области места связывания, идентичную аминокислотной последовательности области места связывания антитела ЧРР-18, или его фрагмент, причем указанное рекомбинантное антитело или его фрагмент предназначены для диагностических или терапевтических целей.13. Рекомбинантное антитело по п. 12, отличающееся тем, что оно представляет собой химерную, гуманизированную одноцепочечную или полученную путем сцепления цепей молекулу антитела.14. Антитело по п. 12 или 13, отличающееся тем, что оно связано с другой молекулой, отличной от антитела.15. Антитело по п. 14, отличающееся тем, что оно связано с полипептидом.16. Антитело по п. 14, отличающееся тем, что оно связано с токсином.17. Антитело по любому из пп. 14-16, отличающееся тем, что оно связано с радиоактивным изотопом.ИЗОбРСТСНИС ОТНОСИТСЯ К бИОЛОГИЧССКИМ средствам ДЛЯ ДИЭГНОСТИЧССКИХ ИЛИ тера певтических целей, более конкретно, к антителу ИТР-Ю и его аналогам.Недавно было показано, что экспрессия вариантов поверхностных гликопротеинов гена С 1 Э 44 необходима и достаточна, чтобы вызвать так называемое спонтанное метастатическое поведение как в неметастазирующей линии клеток аденокарциномы поджелудочной железы крысы, так и в неметастазирующей линии клеток фибросаркомы крысы (Ойпшегт и др., 1991). В то время, как наименьшая изоформа СВ 44. стандартная форма СВ 445 (или СВ 445 тс 1), выражается повсюду в ряду различных тканей, включая эпителиальные клетки, определенные сплайсинговые вариантыВарианты СВ 44 получают путем альтернативного сплайсинга таким образом, чтопоследовательности 10 экзонов (ч - у 10) в СВ 445 полностью вырезаются, однако, в большем числе вариантов могут наблюдаться в различных комбинациях (Зсгеагоп и др., 1992 ТЫ и др., 1993 НоГтапп и др., 1991). Варианты отличаются тем, что различные аминокислотные последовательности включаются в определенное положение внеклеточных участков белков. Такие варианты могли быть обнаружены в различных опухолевых клетках человека и опухолевых тканях человека. Так, недавно была исследована экспрессия вариантов СВ 44 при образовании и развитии колоректального ракового новообразования (Нейдег и др., 1993 а). Экспрессия вариантов СВ 44 отсутствует в нормальном эпителии толстой кишки человека, и лишь слабая экспрессия наблюдается в пролиферирующих клетках крипт. На более поздних стадиях прогрессии опухоли, например в случае аденокарцином, выражаются все злокачественные перерожденные варианты С 1 Э 44. Экспрессия в тканивариантов СВ 44 на высоком уровне могла быть также показана в случае агрессивныхПоказано, что важную роль, в особенности при метастатическом развитии, играетэкзон уб (Кцу и др., 1993). На модели животного антитела против специфичных к чб эпитопов могли препятствовать распространению метастазирующих клеток и росту метастазов (Зейтег и др., 1993). При карциномах толстого кишечника экспрессия уб коррелирует с прогрессией опухоли (М 1 е 1 еп,а и др., 1993). При раке желудка экспрессия чб является важным диагностическим индикатором при дифференцировании опухолей интестинального и рассеянного типа (Нейаег и др., 1993 Ь).Экспрессия уб в обеих упомянутых последними работах была измерена с помощьюантител ПрОТИВ специфичных К Уб ЭПИТОПОВ.Моноклональные антитела против эпитопа, кодируемые экзоном уб, известны из уровня техники (НоГтапп и др., 1991 М 1 еепа и др., 1993). Из-за высокой потенциальной пользы, которую могут принести подобные антитела для диагностики иТЩЗЗЙИИ, СуЩССТВуСТ ВЫСОКЗЯ ПОТрСбНОСТЬ В антителах С УЛУЧШСННЫМИ свойствами.Задачей настоящего ИЗОбрСТСНИЯ ЯЛЯСТСЯ ПОЛУЧСНИС ЗНТИТСЛ, КОТОрЫЕ ПО СрЗВНЗНИЮС ИЗВССТНЫМИ СПСЦИфИЧНЫМИ К /6 антителам проявляет ЛУЧШИС СВОЙСТВЗ.Поставленная задача решается предлагаемым моноклональнькм антителом к эпитопу с аминокислотой последовательностью, кодируемой вариабельным экзоном уб гена СВ 44 представляющим собой антитело УРРЧЗ, продуцируемое гибродомой ОЗМ АСС 2174, или его фрагмент, причем моноклонапьное антитело или его фрагментПРСДННЗНЗЧСНЫ ДЛЯ ДИЗГНОСТИЧССКИХ ИЛИ ТСРЗПСВТИЧССКИХ ЦСЛСЙ.Дополнительным объектом изобретения является линия клеток гибридомы ВЗМАСС 2174, продуцирующей предлагаемое моноклональное антитело.Дальнейшим объектом изобретения является антитело к эпитопу с аминокислотной последовательностью, кодируемой вариабельным экзоном уб гена СВ 44, полученное-изменения аминокислотной последовательности антитела УРР-ПЗ в области местаЕще одним объектом изобретения является рекомбинантное антитело к эпитопу с аминокислотой последовательностью, кодируемой вариабельным экзоном уб гена. имеющее идентичную аминокислотную последовательность моноклонального антитела УРР-18 в обасти места связывания антитела, или его фрагмент, причем рекомбинантное антитело или его фрагмент предназначены для диагностическихИЛИ терапевтических ЦСЛСЙ .Признаки, рЗЗВИВЗЮЩИС И УТОЧНЯЮЩИС ВЫШСПРИВСДСННЫС ОбЪСКТЫ ИЗОбрСТСНИЯ.Из полного иммуноглобулина антитела Х/РР-18 могут быть, например, получены фрагменты РаЬ или Р(аЬ)2 или другие фрагменты (Кгейгтап и др., 1993). Для диагностических способов можно соединять молекулы антитела УРР 18, их фрагменты или рекомбинантные молекулы антитела с одинаковым идиотипом, Ш 1, Чп, 9 Тс или радиоактивныминапример с радиоактивными изотопами, как соединениями (Ьагэоп и др., 1991 Тпотаз и др., 1989 Згйуазтача, 1988), с ферментами, такими как пероксидаза или щелочная фосфатаза (Сапу и Каукипоапа,1989), с флуоресцентными красителями (Лоппзоп, 1989) или с молекулами биотина(Сиезоп и др., 1979). Для терапевтического применения можно соединять УРР-18 или производные от УРР-18 молекулы антитела с токсинами (Уйгегга и др., 1991 Игетта и Тпогре, 1991 Кгейгтап и др., 1993 Т 1 теыег и др., 1993), с цитостатиками(Зспгарре и др., 1992), с пролекарствами (Шап и др.,1992 Зетег и др., 1989) или с радиоактивными веществами. Антитело далее можно соединить с цитокином илиДруГИМ ИММуНОМОДуЛИруЮЩИМ ПОЛИПСПТИДОМ, например С фактором НСКрОЗЭ. ОПУ холи или интерлейкином-2.Далее специалист может получить после анализа аминокислотнойпоследовательности антитела УРР 8 и/или при использовании линии клеток гибридомы,продуцирующей это антитело, и, в частности, содержащейся там генетической информации рекомбинантные молекулы антитела с таким же, как у УРР-18,идиотипом. Соответствующие способы составляют основу этой техники. Такие рекомбинантные молекулы антител могуг быть, например, антителами, приближенными к таковым для человека (5111 п и др., 1989 Сиьззош и Зеепттап, 1991),биспецифическими антителами (Шейпег и др., 1993 Ооодшйпт, 1989), одноцепочечными антителами ( зсРщ .о 11 п 5 оп и Вйга, 1991), полными или фрагментарными иммуноглобулинами (Со 1 ота и др., 1992 Невы и др., 1992 Вагьаз и др., 1992), или антителами, полученными путем сцепления цепей (Шйпгег и др.,1994). Антитела, приближающиеся по составу к человеческим, могут, например,быть получены путем СОК-трансплантации (европейский патент 0239400). Также могут быть модифицированы каркасные участки (европейский патент 0519596). Для приближения к человеческим антителам сейчас могут быть использованы такиеМЕТОДЫ, как полимеразная ЦСПНИЯ реакция (СМ., например, СВрОПСЙСКИС ПЕГГСНТЫ