Способ оценки состояния антиоксидантной системы эритроцитов

(12) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОЦЕНКИ СОСТОЯНИЯ АНТИОКСИДАНТНОЙ СИСТЕМЫ ЭРИТРОЦИТОВ(71) Заявитель Государственное высшее учебное учреждение Белорусская медицинская академия последипломного образования(72) Авторы Канус Иван Иванович Олецкий Валерий Эдуардович(73) Патентообладатель Государственное высшее учебное учреждение Белорусская медицинская академия последипломного образования(57) Способ оценки состояния антиоксидантной системы эритроцитов путем воспроизведенияусловий функционирования указанной системы, заключающийся в том, что из выделенных эритроцитов пациента готовят две равные по объему пробы, содержащие 10 по гематокриту взвеси эритроцитов в изотоническом фосфатном буфере с рН 7,4, в обе пробы добавляют азид натрия до концентрации 7,80,1 ммоль/л, после чего в одну из проб вносят пероксид водорода до концентрации 0,00100,0005 ммоль/л, а во вторую,являющуюся контрольной, - равный объем буфера, обе пробы инкубируют в течение 30 мин на водяной бане при температуре 37 С, затем охлаждают до температуры 15-25 С, после этого эритроциты осаждают добавлением 20 трихлоруксусной кислоты до ее концентрации в пробах 5 , затем пробы центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин,фотоколориметрическим методом определяют в надосадочной жидкости концентрацию восстановленного глутатиона и при выявлении снижения концентрации глутатиона в 1,4 раза и более в опытной пробе по отношению к контрольной делают вывод о недостаточности антиоксидантной системы эритроцитов.(56) Меньшикова В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. - М. Медицина,1987. - С. 119-120.2134420 1, 1999.2102766 1, 1998. Изобретение относится к медицине, к области лабораторной диагностики. Известен способ оценки состояния антиоксидантной системы эритроцитов путем фотоколориметрического определения концентрации восстановленного глутатиона в эритроцитах 1. Указанный способ является прототипом по отношению к заявляемому. Однако указанный способ обладает следующими недостатками 5751 1 отражает сложившуюся на момент исследования концентрацию восстановленного глутатиона в эритроцитах, возникающую в результате целого ряда конкурирующих процессов позволяет только косвенно судить о функциональных возможностях антиоксидантных систем эритроцитов. Задачей заявляемого способа является повышение точности оценки функционального состояния антиоксидантной системы эритроцитов. Поставленная задача решается следующим образом. Предложен способ оценки состояния антиоксидантной системы эритроцитов путем воспроизведенияусловий функционирования указанной системы, заключающийся в том, что из выделенных эритроцитов пациента готовят две равные по объему пробы, содержащие 10 по гематокриту взвеси эритроцитов в изотоническом фосфатном буфере с рН 7,4, в обе пробы добавляют азид натрия до концентрации 7,80,1 ммоль/л, после чего в одну из проб вносят пероксид водорода до концентрации 0,0010,0005 ммоль/л, а во вторую, являющуюся контрольной, - равный объем буфера, обе пробы инкубируют в течение 30 мин на водяной бане при температуре 37 С, затем охлаждают до комнатной температуры 15-25 С, после этого эритроциты осаждают добавлением 20 трихлоруксусной кислоты до ее концентрации в пробах 5 , затем пробы центрифугируют в течение 15 мин при 3000 об/мин, фотоколориметрическим методом определяют в надосадочной жидкости концентрацию восстановленного глутатиона и при выявлении снижения концентрации глутатиона в 1,4 раза и более в опытной пробе по отношению к контрольной делают вывод о недостаточности антиоксидантных систем эритроцитов. Пример. Больная К. 68 летистории 277 поступила в клинику 22.02.97 с диагнозом отравление уксусной эссенцией тяжелой степени, химический ожог слизистой ротовой полости,глотки, пищевода, желудка 2-3 степени, внутрисосудистый гемолиз, экзотоксический шок,гемоглобинурийный нефроз, острая почечная недостаточность. Сахарный диабет, инсулинонезависимая форма. ИБС атеросклеротический кардиосклероз, атеросклероз аорты, сосудов головного мозга, коронарных артерий. Для определения показаний к включению антиоксидантов в программу комплексной,интенсивной терапии было проведено исследование содержания восстановленного глутатиона в эритроцитах по общепринятой методике. При этом концентрация восстановленного глутатиона составила 0,84 ммоль на грамм гемоглобина, что существенно не отличалось от нормальных значений. Параллельно состояние антиоксидантной системы эритроцитов было исследовано с помощью заявляемого способа. Для этого из отмытых эритроцитов больной готовят 2 пробы по 2 мл, содержащие 10 по гематокриту взвеси эритроцитов в изотоническом фосфатном буфере рН 7,4. В обе пробы добавляют азид натрия (3) до конечной концентрации 7,8 ммоль/л. В опытную пробу вносят пероксид водорода до конечной концентрации 0,001 ммоль/л, а в контрольную - равный объем буфера. Обе пробы инкубируют в водяной бане при 37 С 30 мин, затем охлаждают, и взвесь эритроцитов осаждают 20 трихлоруксусной кислотой, которую добавляют до конечной концентрации 5 . Затем обе пробы центрифугируют в течении 15 мин при 3000 об/мин и в надосадочной жидкости фотоколориметрическим способом определяют концентрацию восстановленного глутатиона, эта величина, выраженная в единицах оптической плотности, в опытной (с пероксидом водорода) пробе составила 0,14, а в контрольной (без пероксида водорода) - 0,29. Отношение концентраций в контрольной и опытной пробах составило 0,292,07 . 0,14 5751 1 Концентрация восстановленного глутатиона в опытной пробе по отношению к контрольной снизилась в 2,07 раза, что позволило выявить истощение системы антиоксидантной защиты эритроцитов и определить необходимость включения в программу интенсивной терапии антиоксидантов. Таким образом, заявляемый способ обладает следующими преимуществами перед прототипом позволяет судить о функциональных возможностях антиоксидантной системы эритроцитов,блокада каталазы эритроцитов с помощью азида натрия делает возможным использовать концентрации перекиси водорода, не вызывающие гемолиз, и создатьусловия функционирования антиоксидантной системы эритроцитов, близкие к физиологическим,обладает большей чувствительностью и позволяет диагностировать истощение системы антиоксидантной защиты на более раннем этапе. Источники информации 1. Меньшикова В.В. Лабораторные методы исследования в клинике. - М. Медицина,1987. - С. 119-120. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.