Способ получения флавоноидов, обладающих противовоспалительной и противомикробной активностью

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(72) Авторы Кузнецова Зинаида Павловна Цыганков Василий Георгиевич Соколов Сергей Михайлович Прихожий Сергей Степанович Бондарук Алла Михайловна Жуков Андрей Михайлович Царева Ольга Владимировна Журихина Лидия Николаевна(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научнопрактический центр гигиены(57) Способ получения флавоноидов, обладающих противовоспалительной и противомикробной активностью, из вегетативной массы клюквы крупноплодной, при котором осуществляют ее экстрагирование 65-70 -ным этиловым спиртом при температуре кипения,экстракт упаривают до полного удаления спирта, водный остаток очищают от гидрофильных балластных веществ хлороформом, затем извлекают флавоноиды этилацетатом и упаривают этилацетатные вытяжки в вакууме при 40 С досуха. Изобретение относится к медицине и касается создания лечебно-профилактических и лекарственных средств на основе природного растительного сырья. Известен способ получения флавоноловых соединений из вегетативной массы клюквы крупноплодной, при котором осуществляют многократное холодное экстрагирование сырья 75 -ным этиловым спиртом, из объединенных этаноловых извлечений отгоняют в вакууме спирт, очищают водный остаток от балластных веществ на полиамидном сорбенте, элюируют целевой продукт 85 -ным этиловым спиртом, объединенные этанольные экстракты сгущают в вакууме и сушат при 40 1. Указанный способ является прототипом к заявляемому. Общими признаками для заявляемого способа и прототипа является экстракция этиловым спиртом, упаривание экстракта до водного остатка. Однако метод колоночной хроматографии на полиамидном порошке нецелесообразен для промышленного применения. Это многофазовый метод, что ведет к потере флавоноидных веществ при их адсорбции и десорбции с полиамидного порошка. Задачей заявляе 12012 1 2009.06.30 мого изобретения является получение более качественного флавоноидного комплекса, дополнительно обладающего противовоспалительной и противомикробной активностью. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ получения флавоноидов, обладающих противовоспалительной и противомикробной активностью, из вегетативной массы клюквы крупноплодной, при котором осуществляют ее экстрагирование 65-70-ным этиловым спиртом при температуре кипения. Экстракт упаривают до полного удаления спирта, водный остаток очищают от гидрофильных балластных веществ хлороформом, затем извлекают флавоноиды этилацетатом и упаривают этилацетатные вытяжки в вакууме при 40 С досуха. Предложенная технология позволяет получить более качественный целевой продукт с некоторым уменьшением конечного продукта с 3,8-4,0 до 3,0-3,5 , при этом время получения флавоноидного комплекса уменьшается с 5 до 3 суток. Кроме того, в флавоноидном комплексе, полученном по новой технологии, наряду с флавоноловыми соединениями присутствуют катехины, относящиеся к классу флавоноидов и хлорогеновые кислоты. Пример получения 1 кг воздушно-сухой, измельченной до размера частиц 1-2 см, вегетативной массы клюквы крупноплодной экстрагируют 65-70 -ным этиловым спиртом при температуре кипения. Извлечения повторяют до обесцвечивания растворителя. Этанольные экстракты объединяют и концентрируют до полного удаления спирта. Этанол может быть использован многократно с небольшими потерями. Водный остаток охлаждают и очищают хлороформом от гидрофильных балластных веществ. Очистку проводят трехкратно, соотношение водного остатка и хлороформа - 13 по объему. Очищенный водный остаток элюируют этилацетатом 3 раза по 200 мл. Этилацетатные вытяжки упаривают досуха в вакуумном ротационном испарителе при 40 С. Сухой остаток измельчают. Выход флавоноидов - 2,8-3,0 от веса сухого сырья. Изучение фармакологической активности флавоноидного комплекса клюквы крупноплодной проводилось в лаборатории инфекционной ЦНИЛ БГМУ. Противовоспалительную активность флавоноидов клюквы изучали на экспериментальной модели отека лапы у белых крыс массой 140-200 г, вызванного субпланитарным введением 0,1 мл 1 раствора каррагинина 2. По изменению лапы у опытных и контрольных животных вычисляли процент угнетения отека. Было установлено, что флавоноидный комплекс клюквы при однократном введении в дозе 50 мг/кг обладает умеренной противовоспалительной активностью (угнетение отека на 53-84 ). Однако следует отметить, что антиэкссудативный эффект флавоноидного комплекса клюквы сопоставим с антиэкссудативным действием ацетилсалициловой кислоты в фазе нарастания каррагининового воспаления и несколько превосходит ее активность на стадии обратного развития отека. Развитие каррагининового воспаления под влиянием флавоноидов клюквы характеризуется торможением экссудативной фазы на всех стадиях его развития. Необходимо указать,что в контрольной группе животных особенно интенсивно отек нарастает после 2-го часа и достигает максимума к 3-4 ч. В то же время следует отметить, что под действием изучаемого препарата отек задерживается несколько сильнее, именно на пике воспаления (3-4 ч). Сравнительный анализ влияния флавоноидов клюквы и ортофена на течение экспериментального воспаления показывает значительно более выраженную (в 1,5-2 раза, Р 0,005) положительную динамику отека у крыс, которым вводили ортофен. Вместе с тем, по эффективности флавоноиды клюквы не уступают ацетилсалициловой кислоте в первые 3 ч развития каррагининового отека и в 1,7 раза (Р 0,05) превосходит ее на 5 ч наблюдения. При изучении противомикробной активности был использован количественный метод разведения флавоноидного комплекса в плотной питательной среде. 12012 1 2009.06.30 Установлено, что изучаемый флавоноидный комплекс клюквы обладает противомикробным действием в концентрации 1100 на золотистый и эпидермальный стафилококк,спороносные бактерии, неферментирующие граммотрицательные палочки антрокоид (из группы сибиреязвенных бактерий) и не подавляет рост синегнойной и кишечной (лабораторный штамм) палочки, протея, грибов рода . В концентрации 11000 этот флавоноидный комплекс оказывает неполное (частичное) противомикробное действие лишь на кишечную палочку (клинический штамм) и неферментирующие граммотрицательные бактерии. В коцентрации 1104 - 1106 флавоноидный комплекс клюквы противомикробным действием не обладает. Показатель эффективности противомикробного действия комплекса клюквы на стафилококки выше, чем у сульфацила натрия (55,50,5 мг/мл) и близок к нему у борной кислоты (3,00,2 мг/мл), резорцина (5,60,02 мг/мл), хлорамина Б (5,60,02 мг/мл), диоксина(2,60,07 мг/мл). Следовательно, противомикробная активность изученного флавоноидного комплекса клюквы крупноплодной проявляется в концентрации 1-10 мг/мл в отношении граммположительных бактерий (золотистый и эпидермальный стафилококк), спороносных бактерий и антрокоид, а также неферментирующих граммотрицательных бактерий. Таким образом, достигаемый технический результат заявляемого способа заключается в получении более качественного флавоноидного комплекса и сокращения времени его получения с 5 до 3-х суток. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3