Способ подготовки предметных стекол для цитологических исследований

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ПРЕДМЕТНЫХ СТЕКОЛ ДЛЯ ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ(71) Заявитель Учреждение образования Гомельский государственный медицинский университет(72) Авторы Надыров Эльдар Аркадьевич Никонович Сергей Николаевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Гомельский государственный медицинский университет(56) .19961997. .,1996, .64. Обработка стекол для микроскопии. Найдено на //// 20051111060045////(57) Способ подготовки предметных стекол для цитологических исследований, включающий погружение стекол в водный раствор хромокалиевых квасцов и сушку, отличающийся тем, что используют раствор, полученный путем растворения 1,0-1,3 г агарозы в 500 мл воды, нагрева до 100 С с добавлением 0,25-0,50 г хромокалиевых квасцов при постоянном помешивании, добавления 50-100 мг тимола и фильтрации, предметные стекла,предварительно обезжиренные и высушенные, погружают в нагретый раствор на 1-2 сек и сушат в вертикальном положении при комнатной температуре не менее часа. Изобретение относится к медицине, а именно к клинической лабораторной диагностике, и может быть использовано для приготовления мазков-отпечатков, в том числе и для срочного интраоперационного исследования в практике клинической цитологии. Для приготовления мазков-отпечатков используют обычные предметные стекла, которые перед использованием обезжиривают в жидкости Никофорова при комнатной температуре 1. Недостатками являются отсутствие гистотопографических соотношений изучаемых морфологических структур в мазке-отпечатке, так как к стеклу в первую очередь прикрепляются клетки и неклеточные структуры, имеющие наименьшие межмолекулярные связи низкая информативность способа для диагностики злокачественных и доброкачественных опухолей с преобладанием фиброзного компонента смывание части материала с поверхности предметного стекла при фиксации и окрашивании в растворах красителей, что значительно ухудшает качество цитологических препаратов 11400 1 2008.12.30 меньшая информативность при сравнении с гистологическими методами исследования. Известен способ подготовки предметных стекол, который применяется при иммуногистохимических исследованиях. Его суть заключается в покрытии предметных стекол адгезивами, к которым относятся органосилан, полилизин или растворы, включающие в свой состав желатин. Согласно этому способу готовят раствор из 2,5 г желатина, 2,0 г калийхромовых квасцов и 500 мл дистиллированной воды, полученный раствор нагревают до 60 С при постоянном помешивании, фильтруют, предметные стекла, предварительно обезжиренные и высушенные, погружают в раствор на 1-2 сек, сушат в вертикальном положении при комнатной температуре 2. Недостатками прототипа являются дополнительное фоновое окрашивание мазка-отпечатка высокая стоимость реактивов поддержание постоянной температуры 60 С трудновыполнимо приготовленный раствор требует хранения в герметичной емкости при температуре 4 С и не более 3 месяцев Задача, на решение которой направлено предполагаемое изобретение, состоит в создании способа подготовки предметных стекол для цитологических исследований, обеспечивающего надежную и прочную фиксацию клеток и неклеточных структур из исследуемого очага на предметном стекле с целью определения характера патологического процесса. Задача решается за счет того, что способ подготовки предметных стекол для цитологических исследований, включающий погружение стекол в водный раствор хромокалиевых квасцов и сушку, причем используют раствор, полученный путем растворения 1,01,3 г агарозы в 500 мл воды, нагрева до 100 С с добавлением 0,25-0,50 г хромокалиевых квасцов при постоянном помешивании, добавления 50-100 мг тимола и фильтрации,предметные стекла, предварительно обезжиренные и высушенные, погружают в нагретый раствор на 1-2 сек и сушат в вертикальном положении при комнатной температуре не менее часа. Приготовленный раствор без изменения свойств может храниться в герметичной таре не менее 10-12 месяцев. Для приготовления мазков-отпечатков с операционного материала предметные стекла прикладывают к патологическому очагу. При этом на стекле остаются отпечатки приставших к нему клеток и неклеточных структур с частичным сохранением их гистотопографических соотношений, что особенно важно при экспресс-диагностике злокачественных опухолей с преобладанием фиброзного компонента. Далее предметные стекла высушивают, фиксируют по общепринятым методикам и окрашивают различными красителями, после чего выполняют цитологический анализ материала и постановку диагноза. Пример Первоначально к 500 мл дистиллированной воды добавили навеску агарозы массой 1,3 г. Раствор нагрели до температуры 100 С до полного растворения агарозы при постоянном помешивании стеклянной палочкой, в раствор добавили 0,4 г хромокалиевых квасцов, перемешивали до полного растворения квасцов. После чего добавили 75 мг тимола,размешали и отфильтровали раствор с использованием бумажного фильтра. Стекла,предварительно обезжиренные спирто-эфирной смесью, и высушенные окунали в свежеприготовленный раствор после чего высушили в вертикальном положении в течение 2 часов при комнатной температуре. Приготовленные предлагаемым способом стекла использовали для приготовления мазков-отпечатков с тканей опухоли молочной железы, имеющей скиррозное строение. Для сравнения качества мазков-отпечатков использовали стекла, приготовленные традиционным способом обезжиренные спирто-эфирной смесью и высушенные при комнатной температуре. 2 11400 1 2008.12.30 Подготовленные стекла приложили к срезам опухоли молочной железы (медкарта 386/24). Стекла окрасили, провели цитологический анализ с включением таких показателей, как количество кластеров в поле зрения, количество клеток в кластере. В результате мазок-отпечаток на стеклах, подготовленных по предлагаемому способу, имел на 10 больше кластеров, чем мазок-отпечаток, подготовленный по стандартной методике. Количество клеток в кластере на стеклах, приготовленных по предлагаемому способу, оказалось на 15 больше, чем на мазках-отпечатках, подготовленных традиционным способом. Предлагаемый способ подготовки предметных стекол дает возможность повысить информативность цитологических исследований операционного материала, в том числе срочных интраоперационных биопсий, что достигается высокой адгезией клеток и неклеточных структур на поверхности предметного стекла с сохранением органотипического строения. Источники информации 1. Полонская Н.Ю., Егорова О.В. Основы цитологической диагностики и микроскопическая техника. - М. Издательский центр Академия, 2005. - 160 с. 2. .1996-1997/ ,. 1996, . 64. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 3