Способ определения родства живых организмов

союз советских социдлистических РЕСПУБЛИКГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ(П)- Институт молекулярной генетики АН ссср . . . о. -т(за) спосов определения Род-стал ь И с - о а 1 заключаетсявтом. что осуществляют блат жиеьях ОРГАНИЗМОВ(57). Изобретение относится ЦК области биотехнологии. а именно к генетическойинже-нерии широкого круга живых объектов.мов. Целью изобретения эавляется упрощение способа ил распространение ело-на- разные таксономические группьн Способгибридизацию рестриктированной ДНК из живьтх. организмов стаеч-енной по фосфоруИзобретение относится к области биотехнологии. а именно к генетической инже нерии широкого кругаживых объектогъ. Изобретение .может быть использовано. в криминалистике (идентификация пичностук установление отцовства и материнства). во генетике и селекции сельскохозяйственных животных и растений. для классификации сортов и пород. характеристики инбредных линий. в практической микробиологии для идентификации штаммов микроорганизмои. .Целью изобретения является упрощение способа и распространения на разные таксономические группы.Способ заключается в том. что осуществляют блот-гибридизацию рестриктированной ДНК из живых организмов с меченнойпо фосфору ДНК фата М 1 З.Способ иллюстрируется следующими примерами. П р и м е р 1. о Замороженные в жидком азоте образцы тканей растирают в ступке и гомогениэиру 2591- 42 С в течение ночи. далее к пизату добавляют Маш до ГМ и проводят З-кратную деп-ротеиниэацито (фенол. смесь феновкхло реформ 11). хлороформ) ДНК осаждают катает-слом. оса-док промывают 7 О-ным спиртом и растворяют в стерильной дистил- 5Выделение ДНК из крови и ДНК инди- Евидуальных мух Влтыепооавтег проводятд известными методами. . ДНК обрабатывают рестриктами в стандартных условиях при 37 С св течение 3 часов. .Электрофорез проводят в горизонтальном блоке 1-ного агаоозного геля при напря женности поля 08 В/см.фильтры по методу Сауеерна. Гибридизацию-проводят С въпсокомеченньъми ОДНОЦЕ Ш 2179 г 99 ъбус по материнской, так изпо отцовской виним.3 почечными пробами на основе ДНК фага МЮ а отсутствие конкурента ДНК лосося. гибридизационфннй раствор содержит 6 ЗЗС. 5 мм. ЭДТА. 40 формамидэ 0.178 воз. ю-кратньд раствор Лгнхапдта. 1-2 х 107 имп/-мин с Р)ДНК пробы продолжительность инкубации составляет 16-20.ча сов при.42 С. После стибридизации фильтры отмывают при в 5 с в растворе. содержа щам Х ЗЗС. 0.1 ЧЬ-.5.35 И 73 КСПИПУЮТС рентгеновской пленкой сВысокомеченные пробы на основе ДНК 1фагового сектора МЮ получают унескольки-использованием праймера для секвениро ванио в ДНКМ 13 и 31 использованием у рассеянной затравки. Удедьнаяьактивность -. , пробтсоставляет 1.09 ими/миндалин Принтер 2. л- -20 . - у. Способьопределения родства живьах оргН ДНК обрабаты ага ют фцауаия рестриктаает 3рааличаютсзьсдтсак ото ннгдолжно быть -для двух неоодственныхф индивидуумов, дУкинбредных линий и определения МВЖЛИНВЙ, ных различий дрозофилы. ДНК. трехлиний одного вида дрозофилы Отечапооазтег да ют саою специфическую картину гибридизации. В тоже время разные особи одной линии неотличаются друг от друга накартине гибридизации. а Пример 4.пПроводятанализДНК двух-сортоваячменя шаху иМБЧ наряду с-сходными полосами гибридизации наблюдают выраженные различия, демонстрирующие возможность идентификации сортов. и - Пар нем-е р 5 -1 уПроводЯтаналиа-ДН-Кфтрех коллекционт ныхт штаммов 1 Лэ 1 чо соогегае наблюдают характерные картины гэцбридиаацииаспеци- а 1 фичные для 1 каждого штамма показы ааю щие. как тихродсто.так.и различия.д ганизмоо. включающий выделе ние ДНК. об работку рестрикционньъми эндонуклеаэами.Те или иныеварианты гипероариабельныхаучастконаследуются детьми от своихроди- офрагментов ДНК. перенос ДНКиз геля на 1 нитроцелпюлоаные фильтры. гибридиза- . цию-ДН К изжиооготдрганиа-ма (с высокоме- 7 и аченнъпмип одноце-почечными пробами вч присутствии буферной системы споследую- щейт отмы 5 вкой гибридиаадионнуыху фильт с- ров, экспонирование их на рентгеновскойтворца-больные фрагменты наследуются как - г-Прфимвр 3.2венн на особей оченнблиоки и существенно,отличаются от неродственного 7 ЖИВОТНОГО.к Осуществляют аналиаднки дляфгрезспорогдва из которых родственного один народ-д д. ственный. Ясартинн гибридизации У родитпленке ианализполученныххартин гибридизации о. тл и фчаа ю щий счя тем, под целью упрощения способа и распространения- на разные лгаксономические группы организмов. фдаНК из лживого организмасят одного помета показывающий что при. . Г. и аттроводпт при Б 59 С врастворе, содержащем чуют-т ДНК мззйдлкод характеристики 45 1 х Сти 0,1 05. 5 о - Корректор МдемчикВНИИПИ- Государственного комитета по изобретениям и открытиям при Г КНТ СССР.