Вакцина для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, способ её получения и способ профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ВАКЦИНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ГИПОДЕРМАТОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА, СПОСОБ Е ПОЛУЧЕНИЯ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ГИПОДЕРМАТОЗА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им.С.Н.Вышелесского(72) Авторы Якубовский Мирослав Викторович Степанова Елена Анатольевна Трус Иван Анатольевич Мясцова Татьяна Яковлевна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(56) СТЕПАНОВА Е.А. Иммунодиагностика, эпизоотология и ранняя профилактика гиподерматоза крупного рогатого скота. Автореферат диссертации. Минск, 2004. - С. 1-18. ЯКУБОВСКИЙ М.В. Ветеринарная наука - производству. Материалы Международной научно-практической конференции Актуальные проблемы ветеринарной медицины в условиях современного животноводства. Научные труды. Вып. 38. - Минск, 2005. С. 571-574. ЯТУСЕВИЧ А.И и др. Ветеринарная медицина Беларуси. - 2003. -3. С. 15. СТЕПАНОВА Е.А. и др. Эпизоотология, иммунобиология, фармакология,санитария. - 2004. -1. - С. 12-14. ЯКУБОВСКИЙ М.В. и др. Эпизоотология, иммунобиология, фармакология, санитария. - 2008. -1. - С. 45-53.2204383 1, 2003.2284816 1, 2006.1854 2, 2006.2102070 1, 1998.(57) 1. Вакцина для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, содержащая смесь взятых в соотношении 11 водорастворимых белков личинок овода 2 или 3 стадии с концентрацией 1,2-2,5 г на 1 л физиологического раствора и адъюванта вода в масле, причем в смесь добавлен фенол до концентрации 0,2-0,4 . 2. Способ получения вакцины по п. 1, заключающийся в том, что отмывают личинки овода 2 или 3 стадии физиологическим раствором, гомогенизируют, обрабатывают ультразвуком при 35 кГц 20 минут, центрифугируют при 5000 в течение 20 минут, разводят полученную надосадочную жидкость физиологическим раствором до 16754 1 2013.02.28 концентрации белка 1,2-2,5 г/л, смешивают с адъювантом вода в масле в соотношении 11 и добавляют фенол до конечной концентрации 0,2-0,4 . 3. Способ профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, отличающийся тем,что за месяц до начала лета оводаживотному вводят вакцину по п. 1 двукратно в дозах по 2-3 мл с интервалом в 12-15 дней. Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии, в частности к области получения биопрепаратов, и может быть использовано в биологической промышленности и ветеринарии для массовой профилактики заболевания гиподерматоза у крупного рогатого скота. Установлено, что заболевание крупного рогатого скота гиподерматозом имеет два этапа бессимптомный (с момента заражения до появления свищей и желваков) и период выраженных клинических признаков (с момента образования желваков и свищей до выпадения личинок из тела животного) 1. В связи с тем, что заболевание имеет длительный период без клинического течения (69 месяцев) и невозможно выявить больных животных на ранних стадиях заболевания,приходится применять лечебно-профилактические обработки ко всем животным, что увеличивает расход препаратов, повышает в связи с этим себестоимость сельскохозяйственной продукции. Также снижается экологическое качество животноводческой продукции,так как все химиотерапевтические препараты имеют срок ограничения применения продукции после применения 2. Более перспективными считаются направления по разработке вакцины и способ ее получения для профилактики заболеваний животных. Существует ряд вакцин для профилактики инфекционных заболеваний, полученных из штаммов соответствующих микроорганизмов, однако способ их получения и применения не приемлем для вакцинопрофилактики паразитарных (инвазионных) заболеваний. Так как отсутствует методика культивирования паразитов для наработки биомассы, как это принято в микробиологии и вирусологии. Однако наряду с вакцинами против инфекционных заболеваний разработаны вакцины и для профилактики паразитарных заболеваний против аскаридоза (приготовленная из личинок аскарид), диктиокаулеза (приготовленная из облученных личинок диктиокаул),цистицеркоза (приготовленная из экстракта яиц цистицерков) и др. Для специфической профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота вакцина не разработана. Для терапевтической химеопрофилактики данного заболевания предложен ряд препаратов. Известен препарат для химиопрофилактики гиподерматоза крупного рогатого скота Ивермектим. Ивермектим- инъекционный препарат для терапии гиподерматоза крупного рогатого скота. Он представляет собой прозрачную бесцветную жидкость со слабым специфическим запахом и является стерильным раствором ивермектина в органических растворителях, в 1 мл которого содержится 1 мг 22,23-дигидроавермектина 1 3. Недостатком этого препарата является то, что он предназначен для лечения гиподерматоза крупного рогатого скота, но не профилактирует это заболевание. Известна вакцина для профилактики паразитарных заболеваний, например аскаридоза животных, полученная из эмбриональных яиц 4. Недостатком этой вакцины является то, что ее невозможно использовать для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, так как она узкоспецифична и предназначена только для профилактики аскаридоза. Известна вакцина для профилактики паразитарных заболеваний, например диктиокаулеза крупного рогатого скота, включающая в свой состав ослабленные личинки ( ) в третьей стадии развития 5. 2 16754 1 2013.02.28 Недостатком этой вакцины является то, что ее невозможно использовать для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, так как она узкоспецифична и предназначена только для профилактики диктиокаулеза. Ближайшего аналога, т.е. прототипа вакцины, не выявлено, так как известные вакцины не профилактируют гиподерматоз. Известными способами получить заявляемую вакцину для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота нельзя. Известны различные способы получения вакцин против паразитарных болезней животных. Чаще всего известные вакцины содержат в своем составе белки паразитов. Известен способ получения вакцины для профилактики аскаридоза животных. Для получения вакцины эмбриональные яйцаподвергают обработке гипохлоридом натрия для удаления оболочки яиц, суспендируют яйца без оболочек в сбалансированном солевом растворе и углекислого газа до полного вылупления личинок из яиц,вызывают сбрасывание чехликов личинок под действием трипсина, культивируют личинок второй стадии без чехликов, затем обрабатывают личинки ультразвуком и добавляют адъювант алюминий-сапонин 6. Недостатком этого способа получения вакцины является то, что способ сбора яиц и приведенный способ получения вакцины является очень трудоемким и наработка вакцины в больших количеств при данной технологии невозможна. Также эта вакцина является узкоспецифичной и предназначена только для профилактики аскаридоза. Аналогом можно считать способ получения водорастворимых белков личинок подкожного овода для получения аллергена для диагностики гиподерматоза крупного рогатого скота путем отмывания личинок 2-3-й стадий физиологическим раствором, механической гомогенизацией с последующим центрифугированием и ультразвуковой дезинтеграции 7. Недостатком данного способа является то, что он предназначен для внутрикожной диагностики и не профилактирует гиподерматоз крупного рогатого скота. Для стабилизации аллергена используется фенол в максимально допустимой концентрации (до 0,5 ). Фенол является токсичным веществом, обладает тератогенными и канцерогенными свойствами. Стоит отметить, что введение аллергена не вызывает выработки антител, достаточных для создания защитного иммунитета против гиподерматоза крупного рогатого скота. Известны различные способы применения вакцин. Известен способ применения вакцины против диктиокаулеза крупного рогатого скота,включающей в свой состав ослабленные личинки ( ). Для профилактики диктиокаулеза вакцину вводят телятам двукратно с интервалом 4 недели 8. Недостатком данного способа вакцинации является длительный период ожидания реиммунизации (4 недели). Основным недостатком является то, что ее невозможно использовать для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, так как она узкоспецифична и предназначена только для профилактики диктиокаулеза. Известен способ применения вакцины против аскаридоза, полученной из эмбриональных яиц. Для профилактики аскаридоза вакцину вводят двукратно с интервалом 14 дней 9. Недостатком этой вакцины является то, что ее невозможно использовать для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, так как она узкоспецифична и предназначена только для профилактики аскаридоза. Ближайшего аналога, т.е. прототипа применения вакцины, не выявлено, так как известные вакцины не профилактируют гиподерматоз. Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является создание высокоэффективной, специфичной вакцины для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, способа ее получения и способа профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота. 3 16754 1 2013.02.28 Поставленная задача достигается тем, что вакцина для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота содержит в своем составе смесь взятых в соотношении 11 водорастворимых белков личинок овода 2 и 3-й стадий с концентрацией 1,22,5 г на 1 л физиологического раствора и адъюванта вода в масле, причем в смесь добавлен фенол до концентрации 0,2-0,4 . Кроме того, в способе получения вакцины, заключающемся в том, что отмывают личинки овода 2 и 3-й стадий физиологическим раствором, гомогенизируют, обрабатывают ультразвуком при 35 кГца 20 минут, центрифугируют при 5000 в течение 20 минут, разводят полученную надосадочную жидкость физиологическим раствором до концентрации белка 1,2-2,5 г/л, смешивают с адъювантом вода в масле в соотношении 11 и добавляют фенол до конечной концентрации 0,2-0,4 . И в способе профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, заключающемся в том, что за месяц до начала лета оводаживотному вводят вакцину двукратно в дозах 2-3 мл с интервалом 12-15 дней. Для изготовления вакцины в качестве сырья используются личинки подкожного овода. Личинки подкожного овода являются промежуточной стадией метоморфоза имаго подкожного овода рода , отряда(двукрылые), подотряда(короткоусые) 10. Вылупившаяся из яйца личинкастадии проникает через волосяные фолликулы кожи хозяина в подкожную клетчатку. Затем личинки .мигрируют вдоль крупных сосудов и нервов к позвоночнику и через межпозвоночные отверстия попадают в жировую ткань спинномозгового канала. Общая продолжительность пребывания личинок в спинномозговом канале составляет 5-6 месяцев. По истечении этого времени личинки мигрируют в область спины и поясницы, где формируют соединительнотканные капсулы. Для дальнейшего развития они нуждаются в кислороде, для чего личинки образуют в коже свищевые отверстия. Через 1-8 дней после этого личинки линяют и переходят востадию. Личинкистадии крупнее (18-20 мм), на месте ротовых крючков у них небольшие пигментированные участки. Сроки и продолжительность развития личинок под кожей спины животных различны. Обычно через 3-4 недели личинкастадии совершает линьку и превращается в личинкустадии. Личинкистадии .в длину до 28 мм, более темного оттенка, тело массивное,продолговато-овальной формы. К концу созревания кутикула личинки утолщается и приобретает шероховатую поверхность. Созревшие личинкистадии через свищевые отверстия в коже выходят из капсулы и падают на землю, где во внешней среде происходит их окукливание. Выпавшие личинки малоактивны, окукливаются они в течение 1-2 и реже - в течение 7 суток 11. В качестве разбавителя используется адъюванта в виде эмульсии вода в масле. Эмульсия - это дисперсия жидкой (диспергируемой) фазы в другой жидкой (непрерывной) фазе, с которой первая не смешивается. Адъювантом называется субстанция, которая в ассоциации с антигеном может вызывать иммунный ответ против данного антигена. Адъювант должен обеспечить эффективность (сильный иммунный ответ, кратковременный и/или продолжительный, гуморальный и/или клеточный). В настоящее время в ветеринарии применяются следующие адъюванты 16754 1 2013.02.28 Таблица 1 Адъюванты Эмульсии вода в масле Эмульсии масло в воде Эмульсии вода в масле в воде Липосомы Полимерные микрочастицы А(ОН)3 Адъюванты применяемые в ветеринарии Преимущества Недостатки Векторы Долговременный иммунитет. Высокоскоростной процесс. Местные Стабильность, рентабельность. реакции при активных антигенах. БезКлеточный иммунный ответ опасность повышена при качественном(КИО). минеральном масле, разлагаемом масле, оптимизации дозы Кратковременный иммунитет Недолговременный иммунный ответ.(прорыв). Уравновешенная,Менее КИО-ориентирован. жидкая. Рентабельность. Простота в производстве. Кратко- и долговременный им- Менее КИО-ориентирован. Вариант 2 мунный ответ. Жидкая и уравстадийного процесса. новешенная. Простота в производстве (одностадийность). Безопасность. Стабильность, процесс, высокая цена. Безопасность. Стабильность, процесс, высокая цена. Минеральные соли Уравновешенная. Низкая эффективность с очищенном Рентабельность. антигеном, не КИО. Недолговременный иммунный ответ. Натуральные соединения Вызывает КИО. Побочные эффекты. Высокая стоимость. Вызывает КИО. Различия в партиях. Побочные эффекты при плохом сапонине. При изготовлении масляных эмульсий используются различные минеральные масла(химическое вещество, которое не смешивается с водой и которое при нормальной температуре находится в жидком состоянии). Известны различные производители выпускающие адъюванты типа вода в масле 50 (50/50)70 (70/30)и другие 12, 13, 14. Таким образом, как видно из табл. 1, большим преимуществом обладает адъювант типа вода в масле. В качестве консервирующего вещества используется фенол, объемная доля которого не должна находиться в пределах 0,2-0,4 . Фенол (кислота карболовая кристаллическая) С 6 Н 66 представляет собой бесцветную кристаллическую массу со специфическим запахом. Растворы фенола оказывают сильное бактерицидное действие в отношении вегетативных форм микроорганизмов. В фармацевтической практике применяют фенол (0,5-0,1 ) для консервирования лекарственных веществ, сывороток, свечей и др. 15. Пример приготовления вакцины для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота. Для приготовления вакцины личинки подкожного оводаистадий отмывают физиологическим раствором и механически гомогенизируют. Водорастворимые антигены личинок выделяют с помощью центрифугирования при 5000 в течение 5 16754 1 2013.02.28 20 мин и ультразвуковой дезинтеграции на УЗДН-1 при 35 кГц 20 мин. Далее проводят нормализацию концентрации белка (1,2-2,5 г/л) и добавляют адъювант типа вода в масле в соотношении 11, после чего проводят консервацию фенолом (0,2-0,4 ). В готовой вакцине концентрация водорастворимых белков личинок подкожного оводадолжна составлять 0,6-1,25 г/л. Пример применения вакцины для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота. Вакцинацию осуществляют путем введения крупному рогатому скоту за месяц до начала лета имаго подкожного овода в дозе 2-3 мл на голову двукратно с интервалом 1215 дней. Сущность изобретения иллюстрируется следующими примерами. Пример 1. Подбор компонентов вакцины. Для приготовления экспериментальных серий вакцины личинки подкожного оводаистадий отмыли физиологическим раствором и механически гомогенизировали. Водорастворимые антигены личинок выделили с помощью ультразвуковой дезинтеграции на УЗДН-1 при 35 кГц 20 мин, центрифугировали при 5000 в течение 20 мин. Далее провели нормализацию концентрации белка (5 г/л) и добавили адъювант типа вода в масле,после чего провели консервацию фенолом (0,3 ). 1) Была получена вакцина, содержащая водорастворимые белки личинок подкожного оводас адъювантом в соотношении 11. 2) Была получена вакцина, содержащая водорастворимые белки личинок подкожного оводас адъювантом в соотношении 12. 3) Была получена вакцина, содержащая водорастворимые белки личинок подкожного оводас адъювантом в соотношении 21. Полноценность - способность диагностического препарата вступать в реакцию и вызывать выработку антител - изучали на сыворотках крови иммунизированных кроликов. Для испытания эффективности полученных серий вакцины трем группам животных (кролики по 5 голов в каждой группе) ввели внутрикожно в среднюю треть шеи в дозе 1 мл вакцины из личинок подкожного овода, трехкратно с интервалом 10-14 дней. Четвертой группе кроликов (5 голов) вакцину не вводили. Было установлено, что после окончания иммунизации сыворотки крови кроликов, иммунизированных экспериментальными сериями вакцины, дают линии преципитации с экстрактом, приготовленным из личинок гиподерм, в различных разведениях. Следовательно, приготовленная нами вакцина обладает свойствами полных антигенов, то есть вступает в реакцию с организмом и вызывает выработку антител. Однако экспериментальная серия вакцины 1 (содержащая водорастворимые белки личинок подкожного оводас адъювантом в соотношении 11) проявила себя более эффективно(образовывала множественные линий преципитации), в связи с чем в дальнейшем мы использовали соотношение с адъювантом 11. Пример 2. Определение иммунной эффективности полученных серий вакцины. Провели опыт, в котором использовали 5 групп животных (10 голов в каждой). После формирования животных в группы животным весной перед началом лета оводов (май) ввели вакцину, содержащую 2,5 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введениегруппа - однократногруппа - двукратно, с интервалом между инъекциями 14 днейгруппа - трехкратно, с интервалом между инъекциями 14 днейгруппа - четырехкратно, с интервалом между инъекциями 14 днейгруппу (положительный контроль) обработке не подвергали. Эффективность действия введенной вакцины определяли по наличию заболевания у крупного рогатого скота опытных и контрольных групп весной следующего года. 6 16754 1 2013.02.28 Статистический анализ полученных данных был проведен с помощью пакетов прикладных программ 1 0 и 2.5.0. В результате проведенных исследований установлено, что животные - групп (которым вакцина вводилась двукратно и более) личинками подкожного овода инвазированы не были, тогда как у животных(которым вакцину вводили однократно) игрупп (которых обработке не подвергали) были выявлены личинки подкожного овода с интенсивностью инвазии 1-12 личинок на голову. Пример 3. Определение оптимальной концентрации содержания белка в одной дозе вакцины и кратности ее введения. Для определения оптимальной концентрации раствора водорастворимых белков личинок подкожного оводав одной дозе вакцины и кратности ее введения провели опыт, в котором использовали 19 групп животных (5 голов в каждой). После формирования животных в группы животным весной перед началом лета оводов (май) ввели вакцину, содержащую различные концентрации водорастворимых белков личинок подкожного овода 1 группа - вакцину, содержащую 0,166 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, однократно 2 группа - вакцину, содержащую 0,166 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, двукратно, с интервалом 14 дней 3 группа - вакцину, содержащую 0,166 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, трехкратно, с интервалом 14 дней 4 группа - вакцину, содержащую 0,333 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, однократно 5 группа - вакцину, содержащую 0,333 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, двукратно, с интервалом 14 дней 6 группа - вакцину, содержащую 0,333 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, трехкратно, с интервалом 14 дней 7 группа - вакцину, содержащую 0,4 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, однократно 8 группа - вакцину, содержащую 0,4 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, двукратно, с интервалом 14 дней 9 группа - вакцину, содержащую 0,4 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, трехкратно, с интервалом 14 дней 10 группа - вакцину, содержащую 0,833 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, однократно 11 группа - вакцину, содержащую 0,833 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, двукратно, с интервалом 14 дней 12 группа - вакцину, содержащую 0,833 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, трехкратно, с интервалом 14 дней 13 группа - вакцину, содержащую 1,25 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, однократно 14 группа - вакцину, содержащую 1,25 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, двукратно, с интервалом 14 дней 15 группа - вакцину, содержащую 1,25 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, трехкратно, с интервалом 14 дней 16 группа - вакцину, содержащую 1,666 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, однократно 17 группа - вакцину, содержащую 1,666 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, двукратно, с интервалом 14 дней 16754 1 2013.02.28 18 группа - вакцину, содержащую 1,666 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводав дозе 3 мл на введение, трехкратно, с интервалом 14 дней животные 19 группы (положительный контроль) обработке не подвергали. Эффективность действия введенной вакцины определяли по наличию заболевания у крупного рогатого скота опытных и контрольных групп животных весной следующего года. Статистический анализ полученных данных был проведен с помощью пакетов прикладных программ 1 0 и 2.5.0. Результаты исследований представлены в табл. 2. Таблица 2 Определение оптимальной концентрации содержания белка в одной дозе вакцины и кратности ее введения Содержание белка Эффективность Группа животных Кратность введения вакцины,мг/мл в одной дозе, мг 1 однократно 0 2 0,166 0,5 двукратно, с интервалом 14 дней 0 3 трехкратно, с интервалом 14 дней 20 4 однократно 0 5 0,333 1,0 двукратно, с интервалом 14 дней 20 6 трехкратно, с интервалом 14 дней 40 7 однократно 20 8 0,400 1,2 двукратно, с интервалом 14 дней 100 9 трехкратно, с интервалом 14 дней 100 10 однократно 20 11 0,833 2,5 двукратно, с интервалом 14 дней 100 12 трехкратно, с интервалом 14 дней 100 13 однократно 60 14 1,250 3,75 двукратно, с интервалом 14 дней 100 15 трехкратно, с интервалом 14 дней 100 16 однократно 60 17 1,666 5 двукратно, с интервалом 14 дней 100 18 трехкратно, с интервалом 14 дней 100 19 Не вводили В результате проведенных исследований установлено, что животные 8, 9, 11, 12, 14,15, 17, 18-й групп (которым вводили вакцину, содержащую в одной дозе 1,2-5 мг водорастворимых белков личинок подкожного овода, дву- и трехкратно) личинками подкожного овода инвазированы не были, тогда как у животных 1-7, 10, 13, 16-й групп (которым вводили вакцину, содержащую 0,5-1 мг водорастворимых белков личинок подкожного оводав одной дозе при различной кратности введения и содержащую в одной дозе 1,2-5 мг белка однократно) и 19-й группы (которых обработке не подвергали) были выявлены личинки подкожного овода с интенсивностью инвазии 1-12 личинок на голову. Таким образом, для профилактики гиподерматоза следует применять вакцину, содержащую в одной дозе 1,2-5 мг водорастворимых белков личинок подкожного овода, дву- и трехкратно. Наиболее рациональным является применение вакцины, содержащей в одной дозе 1,23,75 мг водорастворимых белков личинок подкожного овода, двукратно. Пример 4. Определение оптимального срока между введениями вакцины. 8 16754 1 2013.02.28 Для определения оптимальной срока между введением вакцины провели опыт, в котором использовали 6 групп животных (5 голов в каждой). После формирования животных в группы животным весной перед началом лета оводов (май) ввели вакцину, содержащую 1,0 г/л водорастворимых белков личинок подкожного овода, двукратно 1 группа - с интервалом между введением 10 дней 2 группа - с интервалом между введением 12 дней 3 группа - с интервалом между введением 14 дней 4 группа - с интервалом между введением 15 дней 5 группа - с интервалом между введением 18 дней 6 группа - с интервалом между введением 20 дней Эффективность действия введенной вакцины определяли по наличию заболевания у крупного рогатого скота опытных и контрольных групп животных весной следующего года. Статистический анализ полученных данных был проведен с помощью пакетов прикладных программ 1 0 и 2.5.0. В результате проведенных исследований установлено, что животные 2-4-й групп (которым вводили вакцину с интервалом 12-15 дней) личинками подкожного овода инвазированы не были, тогда как у животных 1, 5, 6 групп были выявлены личинки подкожного овода с интенсивностью инвазии 1-12 личинок на голову. Таким образом, наиболее оптимальные данные были получены при введении вакцины с интервалом 12-15 дней между введениями. Пример 5. Подбор наиболее оптимального объема введенной вакцины. Для определения оптимального количества вакцины провели опыт, в котором использовали 7 групп животных (5 голов в каждой). После формирования животных в группы животным весной перед началом лета оводов (май) ввели вакцину, содержащую 0,6 г/л водорастворимых белков личинок подкожного оводадвукратно с интервалом 12-15 дней 1 группа - 1 мл (0,6 мг/животное) 2 группа - 2 мл (1,2 мг/животное) 3 группа - 3 мл (1,8 мг/животное) 4 группа - 4 мл (2,4 мг/животное) 5 группа - 5 мл (3 мг/животное) 6 группа - 5 мл (3,6 мг/животное) 7 группу (положительный контроль) обработке не подвергали. Эффективность действия введенной вакцины определяли по наличию заболевания у крупного рогатого скота опытных и контрольных групп животных весной следующего года. Статистический анализ полученных данных был проведен с помощью пакетов прикладных программ 10 и 2.5.0. В результате проведенных исследований установлено, что животные 2-6-й групп личинками подкожного овода инвазированы не были, тогда как у животных 1 и 7 групп были выявлены личинки подкожного овода с интенсивностью инвазии 1-12 личинок на голову. Таким образом, наиболее оптимально использовать вакцину в дозе 2-3 мл на голову. Пример 6. Подбор концентрации консервирующего вещества и влияние его на сохранность вакцины, стерильность, срок ее годности, токсических свойств. В фармацевтической практике применяют фенол (0,5-0,1 ) для консервирования лекарственных веществ, сывороток, свечей и др. Приготовили вакцину, при изготовлении которой в качестве консервирующего вещества применили фенол в количестве 0,2-0,4 . 9 16754 1 2013.02.28 Изучение токсических свойств диагностического препарата провели согласно Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемым в ветеринарии и животноводстве, изложенным в справочнике Ветеринарные препараты(1988) 16. При изучении острой токсичности установлено, что в течение 10 дней после однократного применения вакцины падежа белых мышей и крыс не наблюдалось. В течение всего периода наблюдений животные всех групп были подвижны, поедали корм, состояние шерстного покрова, слизистых оболочек было в норме. Следовательно, препарат является нетоксичным. Отсутствие раздражающего действия препарата на слизистую конъюнктивы установили путем внесения 0,1 мл препарата. Установлено, что покраснения, воспалений и отеков кожи не наблюдали. Безвредность вакцины определяли на 10 клинически здоровых белых мышах. Животным вводили подкожно в область паха по 0,05 см 3 вакцины. За белыми мышами вели наблюдение в течение 1-2 дней. Препарат не вызывал гибели животных, и на месте его введения не наблюдалась воспалительная реакция, следовательно его можно считать безвредным. Аллергизирующим действием препарат не обладает. После применения препарата в разрешающей дозе покраснения и инфильтрации кожи не наблюдали. Определение срока годности приготовленной вакцины определяли путем исследования сывороток крови иммунизированных бычков с вакциной в РИД, которые хранили при различных температурах (при комнатной температуре (1518 С) и в холодильнике(24 С. Результаты исследований показали, что образец, который хранили при комнатной температуре (1518 С), сохраняет свою диагностическую эффективность в течение 1 месяца. У образца, который поместили в холодильник (010 С), диагностическая эффективность сохранялась в течение 12 месяцев. Стерильность вакцины исследовали путем посева на мясопептонный бульон и мясопептонный агар. Установлено, что рост микроорганизмов в исследуемых опытных образцах аллергена не был выявлен. Таким образом установлено, что вакцина является безвредной, не токсичной, не обладает раздражающим и аллергизирующим действием, стерильна. Срок годности вакцины 12 месяцев со дня изготовления при условии хранения ее в темном месте при температуре от 0 до 10 С. Использование вышеуказанных параметров в их совокупности позволило подобрать наиболее оптимальные этапы и компоненты для приготовления и применения вакцины для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота. Таким образом, были подобраны этапы и компоненты для приготовления вакцины,предназначенной для профилактики гиподерматоза крупного рогатого скота, содержащей в своем составе водорастворимые белки (0,6-1,25 г/л) личинок подкожного оводавторой - третьей стадий, фенол (0,2-0,4 ) и адъювант вода в масле. Вакцинацию эффективнее осуществлять путем введения ее крупному рогатому скоту за месяц до начала лета имаго подкожного овода в дозе 2-3 мл на голову двукратно с интервалом 12-15 дней. Источники информации 1. Грунин, К.Я. Подкожный овод . Фауна СССР.- М., 1962. - 237 с. 2. Якубовский М.В., Карасев Н.Ф. Диагностика, терапия и профилактика паразитарных болезней животных. - Минск Бел. изд. тов-во Хата, 2001. - С. 150-152. 3. Якубовский М.В., Карасев Н.Ф. Диагностика, терапия и профилактика паразитарных болезней животных. - Минск Бел. изд. тов-во Хата, 2001. - С. 150-152. 10 16754 1 2013.02.28 4. , .// Реферативный журнал. Сельское хозяйство. Ветеринария. - ВНИИТЭИСХ. - 1983. -Серия 25. -6. - С. 49. 5../,// Реферативный журнал. 82. Ветеринария. Отдельный выпуск. - Москва. - 1983. -11. - С.16. 6. , .// Реферативный журнал. Сельское хозяйство. Ветеринария. - ВНИИТЭИСХ. - 1983. -Серия 25. -6. - С. 49. 7. Степанова, Е.А. Иммунодиагностика, эпизоотология и ранняя профилактика гиподерматоза крупного рогатого скота автореф. дис канд. вет. наук 03.00.19. - Минск,2004. - С. 8-9. 8../,// Реферативный журнал. 82. Ветеринария. Отдельный выпуск. - Москва. - 1983. -11. - С.16. 9. , .// Реферативный журнал. Сельское хозяйство. Ветеринария. - ВНИИТЭИСХ. - 1983. - Серия 25. -6. -С. 49. 10. Грунин К.Я. Подкожный овод . Фауна СССР. - М., 1962. - 237 с. 11. Ершов В.С., Антипин Д.Н., Золоторев Н.А., Саляев В.А. Ветеринарная энтомология // Паразитология и инвазионные болезни сельскохозяйственных животных / Под ред. В.С. Ершова. - 3-е изд. испр. и доп. - М. Колос, 1964. - С. 316-320. 12. , - Масляные адъюванты их применение в ветеринарной биологии. В сб.,, 1986. 13..,.,. Адъюванты для ветеринарных вакцин и вакцин для людей -20012119 (17-19) 2666-72. 14. Масляные адъюванты для ветеринарных вакцин и препаратов для инъекций/// дата доступа 14.09.2009. 15. Машковский, М.Д. Лекарственные средства Пособие по фармакотерапии для врачей. - Минск Беларусь, 1987. - Т. 2. - С. 357-358. 16. Ветеринарные препараты / Под ред. А.Д. Третьякова. - М. ВО Агропромиздат,1988. - С. 240-246. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 11