Способ получения водных экстрактов из растений и экстракты

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДНЫХ ЭКСТРАКТОВ ИЗ РАСТЕНИЙ И ЭКСТРАКТЫ(71) Заявитель БОМСУНД ГРУПО АСЕСОР, С.Л.(73) Патентообладатель БОМСУНД ГРУПО АСЕСОР, С.Л.(57) 1. Способ получения водного экстракта из растений, включающий следующие стадии) удаление загрязнений из растений) обработку измельченной растительной массы излучением красного линейного диодного лазера с длиной волны 150-810 нм, мощностью 1-60 Вт и диаметром луча 1-6 мм) суспендирование полученной на стадии с) массы в воде) выдерживание суспензии, полученной на стадии ), для осуществления мацерации) отделение водного экстракта. 2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что длина волны составляет 200-400 нм, предпочтительно 250 нм, мощность - 20 Вт, диаметр луча равен 4 мм. 3. Способ по п. 1 или 2, отличающийся тем, что получают экстракт из одного или нескольких растений одного вида или нескольких растений разных видов. 4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что получают экстракт из какойлибо части или частей растений, таких как стебли, листья или цветки. 5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что удаление загрязнений осуществляют с помощью воды, предпочтительно в тоннельной мойке. 6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что измельчение осуществляют вручную или с помощью измельчителя. 7. Способ по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что каждый 1 кг измельченной растительной массы обрабатывают излучением лазера в течение 3-10 мин, предпочтительно в течение 5 мин. 8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что суспендируют 50-300 г,предпочтительно 100-250 г, обработанной излучением лазера растительной массы в 1 л воды. 9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что суспензию выдерживают в течение 5-20 дней, предпочтительно в течение 7-15 дней, при температуре 2-10 С, предпочтительно при 4-8 С. 10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что отделение водного экстракта осуществляют путем декантации с последующим фильтрованием, включающим три последовательные пресс-фильтрации с использованием фильтров на 5 мкм, 1 мкм и 0,22 мкм. 10038 1 2007.12.30 11. Способ по любому из пп. 1-10, отличающийся тем, что получают экстракт из однодольных или двудольных растений. 12. Способ по любому из пп. 1-11, отличающийся тем, что растения принадлежат к семействам , , е, е, , ееи . 13. Способ по любому из пп. 1-12, отличающийся тем, что растения выбраны из следующих видов,,,,,,,,и. 14. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что растение представляет собой. 15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что получают экстракт из цветков. 16. Способ по любому из пп. 1-13, отличающийся тем, что получают экстракт из смеси,и. 17. Способ по п. 16, отличающийся тем, что получают экстракт из листьев,и. 18. Водный экстракт из растений, полученный способом по любому из пп. 1-13. 19. Лиофилизат водного экстракта из растений, полученного способом по любому из пп. 1-13. 20. Водный экстракт из растений, полученный способом по п. 14 или 15. 21. Лиофилизат водного экстракта из растений, полученного способом по п. 14 или 15. 22. Водный экстракт из растений, полученный способом по п. 16 или 17. 23. Лиофилизат водного экстракта из растений, полученного способом по п. 16 или 17. 24. Применение водного экстракта из растений, полученного способом по любому из пп. 1-17, или его лиофилизата для изготовления медикамента. 25. Применение водного экстракта из растений, полученного способом по любому из пп. 14-17, или его лиофилизата для изготовления медикамента для лечения иммуносупрессивных заболеваний. 26. Применение по п. 25, отличающееся тем, что иммуносупрессивное заболевание представляет собой раковое заболевание, туберкулез, грипп, простуду, аллергию, красную волчанку, псориаз или СПИД. 27. Применение по п. 26, отличающееся тем, что раковое заболевание представляет собой карциному печени, рак легких, рак почек, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак или аденокарциному простаты, опухоль мозга, такую как астроцитома или глиобластома, рак шейки матки или рак мочевого пузыря. 28. Применение водного экстракта из растений, полученного способом по п. 16 или 17,или его лиофилизата для изготовления медикамента для лечения вирусных заболеваний. 29. Применение по п. 28, отличающееся тем, что вирусное заболевание представляет собой гепатит А, В, С,или Е. 30. Применение водного экстракта из растений, полученного способом по п. 16 или 17,или его лиофилизата для изготовления медикамента для лечения патологий, связанных с высоким уровнем трансаминаз и билирубина. 31. Применение по п. 30, отличающееся тем, что патология представляет собой цирроз печени или карциному печени. 32. Применение водного экстракта из растений, полученного способом по п. 16 или 17,или его лиофилизата для изготовления медикамента для стимуляции регенерации гепатоцитов. 33. Фармацевтический препарат, включающий водный экстракт из растений по любому из пп. 18, 20 или 22, или его лиофилизат. 34. Фармацевтический препарат по п. 33, отличающийся тем, что дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель. 35. Фармацевтический препарат по п. 33 или 34, отличающийся тем, что дополнительно включает, по меньшей мере, еще одно фармацевтически активное соединение. 2 10038 1 2007.12.30 Настоящее изобретение касается способа получения водных экстрактов из растений и самих водных экстрактов, полученных этим способом, причем некоторые из них находят применение в медицине, в частности при лечении иммуносупрессивных заболеваний или при лечении вирусных заболеваний. Растения и растительные организмы вообще все еще служат важным источником активных композиций и соединений, применяемых в медицине. Новые растения, новые соединения из растений или даже модификации соединений, находящихся в растениях,представляют возможный интерес для фитохимической промышленности. Способы, применяемые при экстракции компонентов из растительных организмов и растений, имеют большое значение не только с точки зрения выхода получаемых соединений, но и химической природы тех соединений, которые реально могут быть получены. Обычные способы, применяемые в фитохимической промышленности, основаны на экстракции из измельченных растений или растительных организмов водой или паром,органическим растворителем или смесью воды и органических растворителей, таких как вода и спирты. Включение стадии мацерации также хорошо известно в данной области. Наконец, отделение водного экстракта от твердой фазы осуществляется обычными способами, такими как декантация, центрифугирование или фильтрация. Также могут применяться дополнительные химические обработки для модификации структуры соединений,находящихся в растениях. Дополнительную информацию по этой теме можно найти в .,.. , , 12 , 1990. Французский патент 2733419 описывает получение экстрактов из смеси, по меньшей мере, трех различных растений, выбранных из родов ,и ,путем вымачивания 300-400 г свежих листьев, 10-50 г сухих листьеви 10-50 г сухих листьевв 3 л воды при 15-30 С в течение 3-15 дней. Согласно 2733419, полученная таким способом композиция находит применение при лечении раковых заболеваний. Однако активность этих экстрактов оказалась неудовлетворительной, как видно из приведенных ниже примеров. Европейская патентная заявка ЕР 0 934 746 А раскрывает способ получения водного экстракта из растений родови , а также из вида, в котором данные экстракты получают из следующих количеств указанных растений в воде 10-60 г сухогоили 300-360 г свежего, 10-60 г сухогои 10-60 г сухогов 300 г воды. Способ получения данных водных экстрактов включает вымачивание измельченных растений в воде перед пресс-фильтрацией смеси и последующим центрифугированием. Согласно ЕР 0 934 746 А,этот экстракт может применяться в онкологической практике как составная часть программы терапии рака. Однако активность этих экстрактов оказалась неудовлетворительной, как видно из приведенных ниже примеров. Таким образом, в этой области существует потребность в способах получения альтернативных экстрактов из растений, которые могут применяться в качестве лекарственных средств и в конечном счете могут обеспечить доступ к новым соединениям. Настоящее изобретение предусматривает способ получения водных экстрактов из растительных организмов, в частности из растений, а также композиции, получаемые этим способом, причем некоторые из них находят применение в медицине, в частности при лечении иммуносупрессивных заболеваний, таких как рак, туберкулез, грипп, простуда, аллергия, красная волчанка, псориаз и СПИД, либо при лечении вирусных заболеваний,таких как гепатит. Один из аспектов изобретения касается способа получения водных экстрактов из растений, который включает следующие стадии а) удаление загрязнений из растений) измельчение растений с) обработку измельченной растительной массы излучением красного линейного диодного лазера с длиной волны 150-810 нм, мощностью 1-60 Вт и диаметром луча 1-6 мм 3) суспендирование полученной на стадии с), массы в воде) выдерживание суспензии, полученной на стадии ) для осуществления мацерации) отделение водного экстракта. Второй аспект изобретения касается композиций или водных экстрактов (гидролятов),полученных данным способом. Следующий аспект изобретения касается применения данной композиции в качестве лекарственного средства при лечении иммуносупрессивных заболеваний, таких как рак,туберкулез, грипп, простуда, аллергия, красная волчанка, псориаз и СПИД, или при лечении вирусных заболеваний, таких как гепатит. Следующий аспект изобретения касается фармацевтических композиций, включающих водные экстракты, полученные способом настоящего изобретения. Способ по изобретению отличается от способов, описанных ранее в данной области тем, что измельченные растения подвергают облучению лазером. Как будет показано на нижеследующих примерах, обработка измельченных растений лазерным излучением приводит либо к появлению новых активностей, либо к неожиданно высокому увеличению активностей экстрактов. Следовательно, полученные при этом экстракты обязательно должны отличаться от экстрактов, получаемых способами, не предусматривающими лазерного облучения. Как указано выше, первый аспект изобретения касается способа получения водных экстрактов из растительных организмов, в частности из растений, который включает стадии) удаление загрязнений из растений) обработку измельченной растительной массы излучением красного линейного диодного лазера с длиной волны 150-810 нм, мощностью 1-60 Вт и диаметром луча 1-6 мм) суспендирование полученной на стадии с), массы в воде) выдерживание суспензии, полученной на стадии ) для осуществления мацерации) отделение водного экстракта. Под термином растение подразумевается одно или несколько растений одного вида,или несколько растений разных видов, или какая-либо часть или части растения, такие как стебли, листья, цветки и т.д. Удаление загрязнений осуществляется промыванием растений водой. Количество воды на этой стадии не имеет решающего значения оно может варьировать в зависимости от степени загрязненности растений. Температура воды должна быть между 10 и 40 С,предпочтительно от 20 до 35 С, наиболее предпочтительно 28 С, хотя не исключаются и более высокие или более низкие температуры. Для ускорения этой стадии может применяться тоннельная мойка. И количество воды, и время нахождения растений в тоннельной мойке не имеют решающего значения, поэтому они могут варьировать в зависимости от степени загрязненности растений. Стадию мойки можно повторять несколько раз, просушивая растения перед очередной мойкой. Операция просушки предпочтительно осуществляется помещением растений на солнце. После тщательной очистки растений их измельчают стандартными способами, например, с помощью измельчительной машины или даже вручную. Растения следует измельчать при температуре от 10 до 40 С, хотя не исключаются и более высокие или более низкие температуры. Затем измельченные растения подвергают обработке лазерным излучением (стадия с). Источником лазерного излучения предпочтительно служит красный линейный диодный лазер, способный к генерации излучения в диапазоне длин волн от 150 до 810 нм. Более предпочтительно длина волны излучения лазера находится между 200 и 400 нм, наиболее предпочтительно 250 нм. Мощность лазерного излучения предпочтительно составляет от 1 до 60 Вт, более предпочтительно от 10 до 30 Вт и наиболее предпочтительно 20 Вт. Лазерный луч предпочтительно имеет диаметр от 1 до 6 мм, более предпочтительно от 2 до 5 мм и наиболее предпочтительно 4 мм. Измельченные растения подвергают облучению лазером 4 10038 1 2007.12.30 так, чтобы облучить всю смесь или большую часть смеси. Это достигается либо перемещением лазерного излучателя по измельченным растениям, либо прохождением измельченной массы на конвейере через несколько лазерных излучателей. Предпочтительно каждый 1 кг измельченной массы подвергается облучению лазером в течение от 3 до 10 мин, более предпочтительно в течение 5 мин. Обработка измельченных растений лазерным излучением должна проводиться при температуре от 10 до 40 С, хотя не исключаются и более высокие или более низкие температуры. Обработанную лазером массу затем суспендируют в воде. На этой стадии можно использовать любую коммерческую минеральную воду. Суспендирование осуществляется таким образом, чтобы на 1 л воды приходилось от 50 до 300, предпочтительно от 100 до 250 г обработанной лазером массы. Суспендирование измельченных растений следует проводить при температуре от 10 до 40 С, хотя не исключаются и более высокие или более низкие температуры. Затем суспензию выдерживают от 5 до 20 дней, предпочтительно от 7 до 15 дней, при температуре от 2 до 10 С, предпочтительно от 4 до 8 С, при этом происходит мацерация смеси (стадия ). Наконец, после стадии мацерации, проводится отделение жидкой фазы от твердой фазы. Твердую фазу можно отжимать для облегчения разделения. Разделение можно осуществлять при помощи одной декантации или предпочтительно декантации с последующей фильтрацией. Фильтрование предпочтительно проводится под давлением. Наиболее предпочтительно проводят три следующие друг за другом пресс-фильтрации с помощью фильтров на 5 мкм, 1 мкм и 0,22 мкм. Разделение следует проводить при температуре от 10 до 40 С, хотя не исключаются и более высокие или более низкие температуры. Способ изобретения можно применять к любым видам растений, как однодольным,так и двудольным. Он может применяться к смесям различных растений. Обработке способом изобретения может подвергаться целое растение, хотя предпочтительны листья и цветки. Способ изобретения может применяться к следующим семействам растений (не ограничиваясь ими) , , , , , и . Примеры видов растений, к которым может применяться способ изобретения, включают,,,,и, но не ограничиваются ими. Предпочтительные виды, к которым может применяться способ изобретения,следующие,,и. Следующий аспект изобретения составляют водные экстракты (гидроляты или композиции), полученные способом изобретения. Так, композиции, полученные при применении данного способа к таким представителям, как,,,,и, подпадают под действие изобретения. Особый интерес представляют водные экстракты, полученные при применении способа изобретения ки к смеси,и, также подпадающие под действие изобретения. Как оказалось, некоторые из водных экстрактов, полученных способом изобретения, находят применение в медицине. Это составляет, как указано выше, третий аспект изобретения. Водные экстракты, полученные способом изобретения из, в особенности при применении способа изобретения к цветкам этого растения, обладают активностью иммуностимуляторов. Эта активность неожиданно оказалась чрезвычайно высокой,как видно из нижеследующих примеров. Предполагается, не ограничиваясь только этой теорией, что данные экстракты действуют стимулируя трансформацию лимфоцитов при активации лимфоцитов Т, В и макрофагов. Таким образом, экстракты, полученные способом изобретения из, находят применение при лечении иммуносупрессивных заболеваний. Примеры таких заболеваний включают раковые заболевания, такие как карцинома печени, рак легких, рак почек, рак толстой кишки, рак молочной железы,5 10038 1 2007.12.30 рак или аденокарцинома простаты, опухоли мозга, такие как астроцитома и глиобластома,рак шейки матки и рак мочевого пузыря туберкулез, грипп, простуда, аллергия, красная волчанка и СПИД, но не ограничиваются ими. Более того, водные экстракты, полученные при применении способа изобретения к,и, в особенности водные экстракты,полученные при применении способа изобретения к смеси листьев из,и, неожиданно проявляли антивирусную активность. В частности, этот экстракт особенно активен против вирусных гепатитов А, В, С,и Е. Такая активность была особенно высокой, как видно из нижеследующих примеров. Кроме того, этот экстракт также обладает высокой регуляторной активностью на метаболизм трансаминаз и билирубина, а также действует как стимулятор регенерации гепатоцитов. Следовательно, экстракт, полученный при применении способа изобретения к,и, находит применение при лечении вирусных заболеваний. Неограничивающие примеры таких заболеваний представлены гепатитами А, В, С,и Е. Этот экстракт также может применяться при лечении патологий печени,связанных с высокими уровнями трансаминаз и билирубина. Примеры таких заболеваний включают гепатиты А, В, С,и Е, цирроз печени и карциному печени, но не ограничиваются ими. Согласно исследованиям и экспериментам, поставленным автором изобретения, можно предположить, не ограничиваясь только этой теорией, что лазерная обработка катализирует реакции между определенными соединениями растений и/или усиливает экстракцию определенных соединений из растений, так что присутствие этих соединений в экстрактах приводит к неожиданным активностям, описанным выше. Следующий аспект изобретения касается фармацевтических композиций, включающих жидкие экстракты, полученные настоящим способом. Водные экстракты по настоящему изобретению могут применяться как таковые или в лиофилизованном виде для получения фармацевтических композиций. Они могут вводиться либо раздельно, в виде водных экстрактов или лиофилизатов, либо в виде фармацевтических препаратов. Готовые препараты представлены лекарственными формами,которые (1) содержат только экстракт по изобретению (2) содержат одно или несколько из соответствующих связывающих веществ, носителей и/или других вспомогательных материалов и (3) могут дополнительно содержать другие фармацевтически активные вещества. Носители, связывающие вещества и/или вспомогательные материалы должны быть фармацевтически и фармакологически приемлемыми, с тем чтобы их можно было комбинировать с другими компонентами лекарственной формы или препарата и не вызывать неблагоприятных эффектов на организм. Лекарственные формы включают такие, которые подходят для перорального или парентерального введения (включая подкожное, внутрикожное, внутримышечное или внутривенное), хотя наилучший способ введения зависит от состояния пациента. Лекарственные формы могут быть в виде разовых доз. Готовые формы получают согласно способам, известным в области фармакологии. Соответствующие количества активных субстанций, подходящие для введения, могут варьировать в зависимости от конкретной области терапии. В общем, концентрация активной субстанции в препарате разовой дозы составляет от 5 до 95 от общего состава. Изобретение, представленное данной заявкой, раскрывается на примерах, представленных ниже. Пример 1. Получение водного экстракта из цветковстандартным способом(сравнительный пример). 500 г цветковпомещали в тоннельную мойку и тщательно промывали водой примерно при 28 С. Затем цветки измельчали в измельчителе. Далее получен 6 10038 1 2007.12.30 ные 500 г измельченного материала суспендировали в 2 л воды при температуре около 20 С. Затем суспензию выдерживали 12 дней при температуре 4 С. Наконец, проводили разделение жидкой и твердой фаз, сначала путем декантации жидкости (твердую фазу отжимали для лучшего разделения), а затем при помощи трех последовательных прессфильтраций через фильтры на 5, 1 и 0,22 мкм при температуре около 20 С. В результате получали приблизительно 1,7 л раствора (водного экстракта) цвета охры. Пример 2. Получение водного экстракта из цветковспособом изобретения. 500 г цветковпомещали в тоннельную мойку и тщательно промывали водой примерно при 28 С. Затем цветки измельчали в измельчителе. Полученные 500 г измельченного материала подвергали обработке красным линейным диодным лазером, способным к генерации излучения при длине волны 250 нм, мощностью в 20 Вт и диаметром луча 4 мм. Обработку проводили, перемещая лазерный излучатель вручную по измельченному материалу в течение 2,5 мин так, чтобы облучить всю смесь или большую часть смеси. Далее обработанный лазером материал суспендировали в 2 л воды при температуре около 20 С. Затем суспензию выдерживали 12 дней при температуре 4 С. Наконец, проводили разделение жидкой и твердой фаз, сначала путем декантации жидкости(твердую фазу отжимали для лучшего разделения), а затем при помощи трех последовательных пресс-фильтраций через фильтры на 5, 1 и 0,22 мкм при температуре около 20 С. В результате получали приблизительно 1,7 л раствора (водного экстракта) цвета охры. Примеры 3-14. Водные экстракты перечисленных ниже растений получали согласно методике примеров 1 и 2. Те части растений, которые подвергались указанным выше процессам, указаны в скобках(стебли),(листья),(листья и цветки),(листья),(листья и цветки),(листья). Водные экстракты, полученные в примерах 1-14, тестировали на активность в качестве иммуностимуляторов по их действию на трансформацию лимфоцитов . Под трансформацией лимфоцитов понимается то, что лимфоциты переходят из состояния покоя в активное состояние, которое необходимо для борьбы с болезнями по иммунологическому механизму или для восстановления иммунной системы, ослабленной под воздействием различных факторов. Эти опыты проводилисьпри добавлении экстрактов к лимфоцитам, выделенным из мышей, согласно литературе..,, . 54,6. - . 1531-1542 (1991). Измеряли включение тимидина, которое отражает репликацию ДНК. Включение тимидина отражает и возрастание числа лимфоцитов, и повышение активности лимфоцитов. Результаты представлены в таблице. Пример Повышение( ) метод с лазерной стандартный метод обработкой 277120426123432119827010628011261228 Приведенные в таблице результаты показывают, что водные экстракты, полученные способом изобретения, проявляют более сильное повышение активности в трансформации 7 10038 1 2007.12.30 лимфоцитов, чем водные экстракты, полученные стандартным способом, то есть экстракции без лазерной обработки. Более того, очень неожиданным было такое сильное повышение активности в трансформации лимфоцитов, которое проявлял экстракт, полученный способом изобретения. Пример 15. Получение водного экстракта из листьев растений,истандартным способом (сравнительный пример) 250 г листьев, 250 г листьеви 250 г листьевпомещали в тоннельную мойку и тщательно промывали водой примерно при 28 С. Затем листья измельчали в измельчителе. Далее полученные 750 г измельченного материала суспендировали в 3 л воды при температуре около 20 С. Затем суспензию выдерживали 12 дней при температуре 4 С. Наконец, проводили разделение жидкой и твердой фаз, сначала путем декантации жидкости (твердую фазу отжимали для лучшего разделения), а затем при помощи трех последовательных пресс-фильтраций через фильтры на 5, 1 и 0,22 мкм при температуре около 20 С. В результате получали приблизительно 2,7 л раствора (водного экстракта) темно-зеленого цвета. Пример 16. Получение водного экстракта из листьев растений,испособом изобретения 250 г листьев, 250 г листьеви 250 г листьевпомещали в тоннельную мойку и тщательно промывали водой примерно при 28 С. Затем цветки измельчали в измельчителе. Полученные 500 г измельченного материала подвергали обработке красным линейным диодным лазером, способным к генерации излучения при длине волны 250 нм, мощностью в 20 Вт и диаметром луча 4 мм. Обработку проводили, перемещая лазерный излучатель вручную по измельченному материалу в течение 4 мин так, чтобы облучить всю смесь или большую часть смеси. Далее обработанный лазером материал суспендировали в 3 л воды при температуре около 20 С. Затем суспензию выдерживали 12 дней при температуре 4 С. Наконец, проводили разделение жидкой и твердой фаз, сначала путем декантации жидкости (твердую фазу отжимали для лучшего разделения), а затем при помощи трех последовательных пресс-фильтраций через фильтры на 5, 1 и 0,22 мкм при температуре около 20 С. В результате получали приблизительно 2,7 л раствора (водного экстракта) темно-зеленого цвета. Водные экстракты, полученные в примерах 15 и 16, использовали в клинических испытаниях на 28 пациентах, страдающих различными заболеваниями печени, вследствие чего они проявляли повышенные уровни трансаминаз (, , ), билирубина и высокие титры вирусов. Пациенты, получавшие экстракт, полученный в примере 15, после 3 месяцев лечения проявляли небольшое снижение трансаминаз без изменения титра вирусов. Однако пациенты, получавшие экстракт, полученный в примере 16, после 2 месяцев лечения неожиданно проявляли нормализацию симптомов, нормальные уровни трансаминаз и билирубина, а также заметное снижение титра вирусов, даже в случае гепатита С штамма 1-В и мутантного вируса. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 8