Способ культивирования хлореллы

Этот недостаток отсутствует в способе культивирования хлореллы, включающей вь 1 ращивание ее на питательной среде при освещении в 5-6 параллельно работающих сосудах до достижения концентрации 40-50 млн.клеток/мл в каждом сосуде, затем полученные культуральнь 1 е жидкости сливают в один более объемный сосуд и продолжают культивирование до концентрации 210-250 млн.клеток/мл. В качестве питательной среды используют жидкие отходы, образующиеся при варке и бланщировке картофеля, которые сначала отстаивают 30 мин, затем сливают, в 100 мл фильтрата вносят 0,3 г азотнокислого калия, 0,08 г однозамещенного фосфорнокислого калия. Перемешивают, стерилизуют 2.Этот способ обладает недостатком, заключающимся в сравнительно трудоемком процессе приготовления питательной среды.Известен также способ культивирования ее на питательной среде, содержащей азотнокисль 1 й калий, однозамещенный фосфорнокислый калий и картофельное сырье, жиры при освещении в оптимальных условиях до максимального накопления биомассы 3.Питательную среду готовят следующим образом. Для приготовления фильтрата жидкие отходы, образуемые при варке и бланщировке картофеля, направляют в емкости, отстаивают в течение 20-30 мин, после чего надосадочную жидкость отфильтровывают с получением фильтрата с концентрацией сухих веществ 1,0-1,5 .В 100 мл полученного фильтрата вносят 0,2-0,5 г азотнокислого калия и тщательно перемещивают, доводят до общего объема 1 л и подвергают дробной стерилизации 3 раза через сутки при 0,2 атм в течение 30 мин. Приготовленную таким образом питательную среду переливают в сосуды и засевают маточной культурой при исходной концентрации 10 106 клеток/мл суспензии. Культивирование микроводорослей ведут при 22-24 С, освещенности 4-5 тыс.лк и чередовании светового и темнового периодов 1212 ч.Этот способ, как видно из приведенного выще описания, обладает недостатком, заключающимся в сравнительно сложном процессе приготовления питательной среды и несколько более низком приросте биомассы хлореллы в единицу времени.Задачей заявляемого изобретения является увеличение выхода биомассы хлореллы,удещевление процесса и упрощение процесса подготовки питательной среды.Поставленная задача достигается тем, что в способе культивирования хлореллы на питательной среде, содержащей отходы производства, - в качестве питательной среды используют питательную среду, содержащую марганцовокислый калий, хлористый кобальт и образующуюся при производстве спирта зернокартофельную барду с концентрацией сухих веществ 10-15 , разбавленную водой в соотношении 1( 10-30) при следующем соотнощении компонентов, мг/лБарда зернокартофельная образуется при производстве спирта с концентрацией сухих веществ 10-15 , имеет следующий физико-химический состав зольные вещества (калийные и фосфорнокислые соли) - 0,4-2,6 азотистые вещества - 1,5-1,7 крахмал 0,7-0,86 жиры - 1,5-1,7 безазотистые вещества - 4,5-4,6 белок - 2,0-3,5 , являющиеся источниками необходимых минеральных веществ и микроэлементов.Марганец - химический элемент 1/ группы периодической системы, Широко распространен в природе, в малых концентрациях встречается в почве, воде. Физиологическая роль марганца велика, т.к. он взаимодействует с ферментами, гормонами, витаминами,активизирует дыхание растений, рыб, мальков. Применение марганца способствует развитию планктонных водорослей, оказывает положительное влияние на фотосинтез низщих и высщих растений, что, в свою очередь, способствует развитию кормовых организмов для рыб, т.к. окислительно-восстановительный потенциал марганца выще, чем у железа, и поэтому он способствует окислению закисного железа в окисное. Протококковые водоросли быстрее реагируют на марганец и дают больщие приросты, чем другие водоросли.Кобальт относится К семейству железа, принадлежит К побочной подгруппе /1 П группы периодической системы. Кобальт жизненно важен для человека, растений, животных. Элемент участвует в процессах кроветворения, образования гемоглобина, является составной частью одного из витаминов группы В. По действию кобальт нельзя заменить каким-либо другим микроэлементом.Водоросли весьма Чувствительны К кобальту. Кобальт необходим для процессов фиксации азота многими азотфиксирующими бактериями и некоторыми водорослями. Отсутствие кобальта в питательной среде, равно как и наивысшая из концентраций (0,1 1,0 5,0 мг/л), а именно 5,0 мг/л, тормозят темп роста и подавляют численность водорослей.Азотистые вещества, содержащиеся в зернокартофельной барде, содержат азот, являющийся одним из самых важных биогенных элементов, участвует в синтезе белка, определяет рост и размножение водорослей и даже общую продуктивность водоема.Крахмал - источник углеродного питания водорослей.Безазотистые вещества, содержащиеся в зернокартофельной барде, - пектазаны - являются важным источником органического питания для водорослей.Зольные вещества, содержащиеся в зернокартофельной барде, являются источником фосфорного питания водорослей.Предлагаемый способ реализуется следующим образом.Для приготовления питательной среды жидкие отходы спиртовой промышленности зернокартофельную барду с концентрацией сухих веществ 10-15 разбавляют водой в соотношениях 110 - 120 - 130. В 100 мл разбавленной барды вносят 0,04-0,05 мг марганцовокислого калия и 0,08-0,10 мг хлористого кобальта и тщательно перемешивают, после чего доливают разбавленной зернокартофельной бардой до общего объема 1 л и стерилизуют в течение 30 мин.Приготовленную таким образом питательную среду переливают в сосуды и засевают маточной культурой С 111 оге 11 а уищагйз в таком количестве, чтобы исходная концентрация составляла 10 106 клеток/мл суспензии.Культивирование микроводорослей ведут при 22 С, освещенности 3 тыс.лк и чередовании светового и темпового периодов 1212 ч. В течение светового периода культуру перемешивают. Выход биомассы хлореллы составляет 172,32 106 - 20,511 106 клеток/мл суспензии.Для приготовления питательной среды жидкие отходы спиртовой промышленности,зернокартофельную барду с концентрацией сухих веществ 10-15 разбавляют водой в соотношении 110. В 100 мл разбавленной барды вносят 0,08 мг хлористого кобальта и 0,04 мг марганцовокислого калия, тщательно перемешивают. После чего доливают разбавленной в указанном соотношении бардой до общего объема 1 л и стерилизуют в течение 30 мин. Приготовленную таким образом питательную среду переливают в сосуды и засевают маточной культурой С 111 оге 11 а у 1113 аг 15 в таком количестве, чтобы исходная концентрация микроводорослей составляла 10 106 клеток/мл суспензии. Культивирование микроводорослей ведут при температуре 22 С, освещенности 3 тыс.лк и чередовании светового и темнового периодов 1212 ч. В течение светового периода культуру перемешивают воздухом. Выход составляет 204,63 106 клеток/мл численности и 4,71 г/л биомассы.Для приготовления питательной среды жидкие отходы спиртовой промышленности зернокартофельную барду с концентрацией сухих веществ 10-15 разбавляют водой в соотношении 110. В 100 мл разбавленной барды вносят 0,1 мг хлористого кобальта и 0,05 мг марганцовокислого калия, тщательно перемешивают, после чего доливают разбав 3ленной в указанном соотношении бардой до общего объема 1 л И стерилизуют в течение 30 мин.Приготовленную таким образом питательную среду переливают в сосуды и засевают маточной культурой С 111 оге 11 а уищагйз в таком количестве, чтобы исходная концентрация микроводорослей составляла 10 106 клеток/мл суспензии. Культивирование микроводорослей ведут при температуре 22 С, освещенности 4 тыс.лк и чередовании светового и темнового периодов 1212 ч, перемешивают воздухом. Выход составляет 220,59 106 клеток/мл численности и 5,07 г/л биомассы.Для приготовления питательной среды жидкие отходы спиртовой промышленности зернокартофельную барду с концентрацией сухих веществ 10-15 разбавляют водой в соотношении 120. В 100 мл разбавленной барды вносят 0,08 мг хлористого кобальта и 0,04 мг марганцовокислого калия, тщательно перемешивают, после чего доливают указанную питательную среду до общего объема 1 л и подвергают стерилизации в течение 30 мин. Засев маточной культурой С 111 оге 11 а у 1113 аг 15 на приготовленную питательную среду и культивирование микроводорослей осуществляют по примеру 1. Выход биомассы составляет 4,38 г/л или 190,27 106 клеток/мл суспензии.В 100 мл приготовленной питательной среды по примеру 3 добавляют 0,1 мг хлористого кобальта и 0,05 мг марганцовокислого калия, тщательно перемешивают, после чего доливают указанную питательную среду до общего объема 1 л и подвергают стерилизации в течение 30 мин. Засев маточной культурой С 111 оге 11 а у 1113 аг 15 на приготовленную питательную среду и культивирование микроводорослей осуществляют по примеру 1. Вь 1 ход биомассы составляет 205,11 106 клеток/мл или 4,72 г/л.Для приготовления питательной среды жидкие отходы спиртовой промышленности зернокартофельную барду с концентрацией сухих веществ 10-15 разбавляют водой в соотношении 130. В 100 мл разбавленной таким образом барды вносят 0,08 мг хлористого кобальта и 0,04 мг марганцовокислого калия, тщательно перемешивают, после чего доливают указанную питательную среду до общего объема 1 л и подвергают стерилизации в течение 30 мин. Засев маточной культурой С 111 оге 11 а уи 13 аг 15 на приготовленную питательную среду и культивирование микроводорослей осуществляют по примеру 1. Выход биомассы составляет 4,48 г/л или 172,32 106 клеток/мл.В 100 мл приготовленной питательной среды по примеру 5 добавляют 0,1 мг хлористого кобальта и 0,05 мг марганцовокислого калия, тщательно перемешивают, после чего доливают указанную питательную среду до общего объема 1 л и подвергают стерилизации в течение 30 мин. Засев маточной культурой С 111 оге 11 а у 1113 аг 15 на приготовленную питательную среду и культивирование микроводорослей осуществляют по примеру 1. Вь 1 ход биомассы составляет 4,27 г/л или 185,76 106 клеток/мл.Зернокартофельная барда, образующаяся при производстве спирта, представляет собой жидкость, содержащую ряд ценных питательных веществ - источников фосфора, азота, углерода, в том числе крахмал, белок, сахара, незаменимые аминокислоты, биологически активные вещества, некоторые микроэлементы.Проведенные исследования свидетельствуют о том, что зернокартофельная барда, образующаяся при производстве спирта в предложенных разбавлениях в сочетании с хлористым кобальтом и марганцовокислым калием, взятыми в заданных концентрациях, является сбалансированным питательным субстратом для культивирования хлореллы.Используемые значения каждого компонента, вводимого в рекомендуемую питательную среду, находили эмпирическим путем подбора компонентов и испытания вариантов среды.Результаты выращивания хлореллы на предлагаемой питательной среде, в том числе накопление клеток и сухая биомасса, отображен в примерах 1-6, а также на известной среде и среде Тамия приведены в табл. 1.Прирост биомассы хлорел Питательная среда, мг количество сухая биомлн.кл./мл масса, г/л суспензии 2Отходы спиртовой промышленности - зернокартофельная барда в разбавлении 110Отходы спиртовой промышленности - зернокартофельная барда в разбавлении 110Отходы спиртовой промышленности - зернокартофельная барда в разбавлении 120Отходы спиртовой промышленности - зернокартофельная барда в разбавлении 1205. Отходы спиртовой промышленности - зернокартофельная барда в разбавлении 1306. Отходы спиртовой промышленности - зернокартофельная барда в разбавлении 130Однозамешенный фосфорнокислый калий - 807- Фильтрат жидких отходов, образуемых при варке и бланшировке картофеля с концентрацией сухих вешеств 1,5