Способ оценки стойкости смазочно-охлаждающей жидкости к воздействию дрожжеподобных грибов

(51) МПК НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ СПОСОБ ОЦЕНКИ СТОЙКОСТИ СМАЗОЧНО-ОХЛАЖДАЮЩЕЙ ЖИДКОСТИ К ВОЗДЕЙСТВИЮ ДРОЖЖЕПОДОБНЫХ ГРИБОВ(71) Заявитель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(72) Авторы Дудчик Наталья Владимировна Трейлиб Виктория Васильевна Половинкин Леонид Васильевич(73) Патентообладатель Государственное учреждение Республиканский научно-практический центр гигиены(56) ГОСТ 9.085-78. Жидкости смазочноохлаждающие. Методы испытания на биостойкость. - С. 4-5.2001102223 , 2003.13119 1, 2010.//3946 ДУДЧИК Н.В. и др. Проблемы общественного здоровья и здравоохранения Республики Беларусь. Материалы Республиканской научно-практической конференции. - Минск, 2004. - С. 330-332. ПОЛОВИНКИН Л.В. и др. Здоровье и окружающая среда Сб. научных трудов. - 2008. - Вып. 12. - С. 376-388. Гигиена и токсикология смазочно-охлаждающих жидкостей. - Киев Здоровя,1982. - С. 58-63.(57) Способ определения стойкости смазочно-охлаждающей жидкости к воздействию дрожжеподобных грибов, заключающийся в том, что готовят жидкую питательную среду с 6,2, содержащую 20,0 г глюкозы, 1,5 г сульфата аммония, 3,0 г магния сульфата семиводного, 0,5 г натрия хлористого, 1,5 г натрия фосфорнокислого однозамещенного,0,5 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 1,0 г дрожжевого экстракта, 0,1 г кальция хлористого, 0,05 г железа сернокислого семиводного, 0,01 г марганца сульфата пятиводного, 0,07 г цинка сернокислого семиводного, 0,01 г меди сульфата пятиводного, 5,0 мг инозита, 0,0001 мг биотина, 0,25 мг пантотеновой кислоты, 1,0 мг тиамина, 0,25 мг пиридоксина, 0,5 мг никотиновой кислоты и воду дистиллированную до 1 л, в которую вносят штамм тест-культуры дрожжеподобных грибовдо конечной концентрации 104 КОЕ/мл, параллельно вносят исследуемый образец смазочно-охлаждающей жидкости до конечной концентрации 20-30 об.и равный ему объем дистиллированной воды в контрольном опыте, осуществляют культивирование при температуре 20-24 С с импедиметрической регистрацией показателей для определения времени детекции роста тест-культуры, рассчитывают показатель биостойкости смазочно-охлаждающей жидкостипо формуле, 1 где- значение времени детекции в опыте с исследуемым образцом, ч,1 - значение времени детекции в контрольном опыте, ч,17110 1 2013.04.30 и по значениюоценивают стойкость смазочно-охлаждающей жидкости при 1 смазочно-охлаждающая жидкость не обладает стойкостью в отношении дрожжеподобных грибов при 1 смазочно-охлаждающая жидкость обладает стойкостью в отношении дрожжеподобных грибов. Изобретение относится к разделу гигиены окружающей среды и санитарной микробиологии. Одним из наиболее активных в биохимическом отношении компонентов микробиологической контаминации смазочно-охлаждающих жидкостей являются дрожжеподобные грибы, в основном рода . Развитие популяции этих микроорганизмов в сочетании с бактериальными контаминантами может привести к значительным биоповреждениям в процессе эксплуатации смазочно-охлаждающих жидкостей 1. Известен способ оценки биостойкости смазочно-охлаждающих жидкостей к воздействию плесневых грибов, заключающийся в том, что на поверхность питательной среды вносят 0,3-0,4 мл суспензии спор плесневых грибов, равномерно распределяют шпателем, в зараженной среде просверливают лунки глубиной около 5 мм, в которые вносят по 0,2 мл испытуемых смазочно-охлаждающих жидкостей, посевы инкубируют в термостате при 282 С в течение 28 суток, после чего оценивают стойкость к плесневым грибам путем оценки роста и спорообразования тест-культуры плесневого гриба 2. Указанный способ является прототипом по отношению к заявленному. Недостатком диффузионных методов, в том числе и прототипа, является то, что получаемые с их помощью результаты существенно зависят от способности изучаемой смазочно-охлажадющей жидкости к диффузии в агар, от физико-химических свойств и концентрации используемой плотной среды, а также от модификации метода проведения анализа (луночный, с помощью цилиндриков и др.). Общими признаками для заявляемого способа и прототипа является то, что осуществляют внесение смазочно-охлаждающей жидкости в питательную среду, содержащую ранее определенную концентрацию тест-культуры, проводят культивирование с последующей обработкой полученных данных. Задачей заявленного изобретения является создание способа, позволяющего определять стойкость смазочно-охлаждающей жидкости к воздействию дрожжеподобных грибов. Поставленная задача достигается следующим образом. Предложен способ определения стойкости смазочно-охлаждающей жидкости к воздействию дрожжеподобных грибов, заключающийся в том, что готовят жидкую питательную среду с 6,2, содержащую 20,0 г глюкозы, 1,5 г сульфата аммония, 3,0 г магния сульфата семиводного, 0,5 г натрия хлористого, 1,5 г натрия фосфорнокислого однозамещенного, 0,5 г калия фосфорнокислого двузамещенного, 1,0 г дрожжевого экстракта, 0,1 г кальция хлористого, 0,05 г железа сернокислого семиводного, 0,01 г марганца сульфата пятиводного, 0,07 г цинка сернокислого семиводного, 0,01 г меди сульфата пятиводного,5 мг инозита, 0,0001 мг биотина, 0,25 мг пантотеновой кислоты, 1,0 мг тиамина, 0,25 мг пиридоксина, 0,5 мг никотиновой кислоты и воду дистиллированную до 1 л, в которую вносят штамм тест-культуры дрожжеподобных грибовдо конечной концентрации 104 КОЕ/мл, параллельно вносят исследуемый образец смазочно-охлаждающей жидкости до конечной концентрации 20-30 об.и равный ему объем дистиллированной воды в контрольном опыте, осуществляют культивирование при температуре 20-24 С с импедиметрической регистрацией показателей для определения времени детекции роста тест-культуры, рассчитывают показатель биостойкости смазочно-охлаждающей жидкостипо формуле,1 где- значение времени детекции в опыте с исследуемым образцом, ч,1 - значение времени детекции в контрольном опыте, ч,и по значениюоценивают стойкость смазочно-охлаждающей жидкости при 1 смазочно-охлаждающая жидкость не обладает стойкостью в отношении дрожжеподобных грибов при 1 смазочно-охлаждающая жидкость обладает стойкостью в отношении дрожжеподобных грибов. Осуществление постоянной регистрации изменений электрохимических показателей среды культивирования дает возможность провести детекцию роста тест-штамма в течение 72-101 ч. Пример выполнения. Требуется выявить биостойкость двух образцов смазочно-охлаждающих жидкостей в отношении дрожжеподобных грибов. В качестве среды при проведении исследования используют полусинтетическую среду Ридера модифицированного состава глюкоза 20 г сульфат аммония 1,5 г магния сульфат семиводный 3 г натрий хлористый 0,5 г натрий фосфорнокислый однозамещенный 1,5 г калия фосфорнокислый двузамещенный 0,5 г дрожжевой экстракт 1 г кальций хлористый 0,1 г железо сернокислое семиводное 0,05 г марганец сернокислый пятиводный 0,01 г цинк сернокислый семиводный 0,07 г медь сернокислая пятиводная 0,01 г инозит 5 мг биотин 0,0001 мг пантотеновая кислота 0,25 мг тиамин 1,0 мг пиридоксин 0,25 мг никотиновая кислота 0,5 мгсреды 6,0-6,2. Стерилизация 121 С в течение 20 мин. Среда культивирования оптимизирована по химическому составу и является полусинтетической, т.к. содержит глюкозу в концентрации 2,0 как единственный источник углерода и энергии, 0,1 дрожжевого экстракта как источник азота и фосфора, сложный минеральный состав, включающий 10 солей, обогащена витаминами для поддержания развития популяции тест-культуры. Показатель 6,0-6,4 является оптимальным для развития дрожжеподобных грибов. Культивирование тест-штамма микроорганизма на среде предложенного состава не только обеспечило полноценное развитие , но и позволило выявлять биостойкость образцов смазочно-охлаждающих жидкостей. Полученный электрохимический сигнал имел стабильную базовую линию, выраженную фазу быстрого роста культуры и высокое значение изменений электрохимических показателей среды, что обеспечило надежное выявление показателей в виде параметра(значение времени детекции) и обеспечило выявление биостойкости в отношении тест-культуры дрожжеподобных грибов. В качестве тест-культур используют дрожжеподобный грибАТСС 10231, полученный из Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов(ВКПМ), иизолят 5, полученный в ходе санитарно-гигиенического исследования пищевого производства. Штаммы являются типичными по культурально-морфологическим и биохимическим свойствам. Тест-штаммы хранят при температуре (51) С под слоем стерильного вазелинового масла на среде Сабуро. Приготовленную среду Ридера указанного модифицированного состава инокулируют параллельно тест-штаммом 10231 иизолят 5 до конечной концентрации (1104)-(1105) клеток/мл, разливают в измерительные ячейки анализатора, вносят исследуемые смазочно-охлаждающие жидкости в конечной концентрации 20 и инкубируют в термоинкубаторе в течение 72-101 ч при (222) С. Получены следующие результаты. Образец смазочно 1 охлаждающей 2 час 2 Степень биостойкости контроль, ч жидкости Образец 1 на минеобразец не обладает стойкостью в 72,00,11 72,00,28 1,0 ральной основе отношении дрожжеподобных грибов Образец 2 на синтеобразец обладает стойкостью в от 84,00,22 101,20,19 1,2 тической основе ношении дрожжеподобных грибов Представлены данные трех измерений. Определение биостойкости образцов смазочно-охлаждающих жидкостей по прототипу не могло быть определено, т.е. не предусматривает тестирование в отношении дрожжеподобных грибов. Таким образом, достигаемый технический результат заключается в определении стойкости смазочно-охлаждающих жидкостей к дрожжеподобным грибам в течение 72-101 ч,увеличении числа тест-культур микроорганизмов при оценке биостойкости смазочноохлаждающей жидкости, а также в исключении влияния на результаты определения скорости диффузии исследуемого образца смазочно-охлаждающей жидкости в агаризованную питательную среду. Источники информации 1.-. Электронный ресурс. - Режим доступа ///03 2 2 2 2.9922836 - Дата доступа 25.08.2011. 2. ГОСТ 9.085-78. Единая система защиты от коррозии и старения. Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость (прототип). Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20.