Композиция, обладающая гепатопротекторными свойствами

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ(71) Заявитель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(72) Авторы Шейбак Владимир Михайлович Горецкая Марианна Викторовна Смирнов Виталий Юрьевич Лис Руслан Евгеньевич(73) Патентообладатель Учреждение образования Гродненский государственный медицинский университет(57) Композиция, обладающая гепатопротекторными свойствами, содержащая лейцин и сульфат цинка, взятые в соотношении 41. Изобретение относится к области медицины, а именно к парафармацевтической промышленности, производящей препараты лечебного и профилактического назначения, и может быть использовано в качестве вспомогательного средства, способствующего коррекции нарушений функции печени. Известен препарат гепатил (-орнитинааспартат Гепа-Мерц Орницетил), используемый для лечения печеночной недостаточности, который на экспериментальной модели печеночной недостаточности в дозе 330 мг/кг в час снижал уровень аммиака в плазме крови и уменьшал вероятность отека мозга Подымова С.Д., Надинская Н.Ю., Буеверов А.С. Печеночная энцефалопатия применение Гепа-Мерца и методы контроля его эффективности // Клин. фарм. и терапия. - 1996. - 1. -С. 16-18.Н..-,-- - 1990. -. 10, .1. Введение препарата повышало в плазме крови содержание глутамата, таурина, ГАМК, аланина,лейцина, валина и изолейцина. Недостатком этого препарата является необходимость введения больших его доз, что негативно влияет на усвоение питательных веществ организмом. Известен препарат аминостерил - ( ) для лечения поражений печени(разветвленные аминокислоты, ароматические аминокислоты, метионин), который позволяет осуществлять достаточное поступление аминокислот в рамках полного парентерального питания. Аминостерил не содержит углеводов и электролитов Инфузионная терапия и клиническое питание / Под ред. А.Г.Хлябича-Фрезениус, 1992. - . 795 Тулбаев Э.Л.,Нартайлаков М.А., Галимов Ш.Н. Современные аспекты метаболической терапии печеночной недостаточности // Здравоохранение Башкортостана. - 1999.-5. - С. 52-57. 11542 1 2009.02.28 Недостатком препарата является большой список противопоказаний (гипергидратация, гипонатриемия, гипокалиемия, сердечная недостаточность). Внутривенное введение аминостерила может провоцировать повышенную продукцию соляной кислоты и возникновение стресс-язвы. Наиболее близким к предлагаемому является препарат тавамин, используемый для нормализации нарушенной функции печени, состоящий из аминокислот лейцина, изолейцина, валина и таурина. Разводовский Ю.Е., Дорошенко Е.М., Прокопчик Н.И. и др. Гепатопротективные эффекты аминокислот с разветвленной цепью и таурина при экспериментальной субхронической алкогольной интоксикации и отмене этанола // Биомед. химия. 2004. -1. - С. 64-72. Недостатком известного препарата является то, что он содержит высокие дозы аминокислот, что чревато развитием гипераммониемии, снижает аппетит и не приводит к полноценной нормализации аминокислотного баланса в плазме крови. Задачей изобретения является разработка нового доступного лекарственного препарата биологически активной добавки, способствующей коррекции нарушенной функции печени. Изобретение направлено на расширение ассортимента лекарственных средств, используемых для лечения острых и хронических заболеваний печени. Поставленная задача решается путем создания композиции, содержащей лейцин и сульфат цинка в количественном соотношении 41 в дозах, не превышающих 100 мг/кг в отношении лейцина и 25 мг/кг в отношении сульфата цинка. Известно, что у пациентов с недостаточностью функции печени возникает дисбаланс аминокислотного состава плазмы крови, что приводит к увеличению поступления ароматических аминокислот (фенилаланин, тирозин) в ткань мозга и провоцирует развитие печеночной энцефалопатии. Более выраженный дисбаланс характеризует более тяжелую стадию печеночной недостаточности у больного. Поскольку аминокислотный состав плазмы крови является интегральным показателем, в силу взаимосвязи всех метаболических путей отражающим степень нарушения обменных процессов в организме, его анализ может использоваться для определения эффективности проводимой коррекции нарушенной функции печени. Приводим результаты эксперимента, подтверждающего возможность осуществления изобретения. Эксперимент проводился на белых крысах-самках породы Вистар массой 170-200 г. Животные были разделены на 3 группы (одна контрольная и 2 опытные), по 8 штук в каждой. В качестве агента, поражающего печень, использовали парацетамол, который вводили в желудок в виде взвеси в 2 слизи крахмала 1 раз в день ежедневно в течение 5 дней в дозе 750 мг/кг массы тела Кравчук Р.И. и др. // Журнал ГГМУ. - 2005. -1. - . 56-72. После декапитации животных в пробирки забирали кровь и выделяли печень. Один кусочек печени фиксировали в жидкости Карнуа, а другой замораживали в жидком азоте. Из фиксированной в жидкости Карнуа печени готовили гистологические препараты, окрашенные гематоксилином и эозином. На препаратах, окрашенных гематоксилином и эозином, производилась общая оценка морфологического состояния ткани печени. Из замороженных в жидком азоте кусочков печени плодов готовили криостатные срезы на микротоме - криостате МК-25. На криостатных срезах проводили тетразолиевые гистохимические реакции по выявлению активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - маркера анаэробного гликолиза, -дегидрогеназы (НАДН-ДГ) - показателя активности митохондриальных процессов и сукцинатдегидрогеназы (СДГ) - маркера ЦТК. На гистохимических препаратах печени определялся уровень активности вышеуказанных ферментов в цитоплазме гепатоцитов. Уровень активности ферментов учитывался с помощью микроабсорциометра-флюориметра в комплекте со сканирующим микроскопом МФТХ-2 М(ЛОМО) по коэффициенту пропускания окрашенного среза в единицах оптической плотности. Фотометрирование уровня активности дегидрогеназ производилось при длине волны 580 нм. 2 11542 1 2009.02.28 У всех интактных животных наблюдается нормальная картина печени. Архитектоника печени после введения парацетамола соответствовала норме. Однако наблюдалась картина гепатита ступенчатый некроз, перипортальный лимфоцитоз, диффузный лимфоцитоз. Кроме того, наблюдается очаговый кариолизис и баллонная дистрофия. У животных этой группы гепатоциты без признаков патологических изменений наблюдаются в основном центролобулярно. Уровень активности СДГ и НАДН-ДГ соответствует показателям у интактных животных. Уровень активности ферментов в гепатоцитах опытных групп либо соответствует интактным показателям, либо превышает их. В 1-й опытной группе крысам (8 шт.) одновременно с парацетамолом через 30 мин вводили внутрижелудочно зондом лейцин в дозе 100 мг/кг массы тела. При этом произошла нормализация уровней глутамата, метионина, тирозина и лейцина, сохранялось снижение уровней только двух аминокислот - глицина и таурина. Одновременно увеличилось содержание аминокислоты аланина в плазме крови, что может отражать факт усиления процессов глюконеогенеза в периферических тканях. Во 2-й опытной группе животным (8 шт.) одновременно с парацетамолом вводили предлагаемую композицию, содержащую лейцин и цинка сульфат в отношении 41. Доза лейцина составляла 100 мг/кг массы тела, а цинка сульфата, 25 мг/кг массы тела. Композицию вводили ежедневно в течение 5 дней через 30 минут после введения парацетамола. В результате практически нивелировались изменения в печени, вызванные введением парацетамола. Данные, полученные в ходе эксперимента, отражены в табл. 1-2. Таблица 1 Структура пула свободных аминокислот в плазме крови животных с интоксикацией парацетамолом, получавших лейцин и сульфат цинка Показатели Общее содержание аминокислот,мкмоль/л ЗА/НА АРУЦ/ААК Глу/Глн Фен/Тир Примечание ЗА - заменимые аминокислоты, НА - незаменимые аминокислоты, АРУЦ аминокислоты с разветвленной углеродной цепью, ААК - ароматические аминокислоты, достоверно (р 0,05) относительно контрольной группы животных. Таблица 2 Концентрации свободных аминокислот в плазме крови животных после поражения печени парацетамолом и введения лейцина и сульфата цинка, мкмоль/л Аминокислоты Таурин Аспартат Треонин Серин Глутамат Глутамин Пролин Глицин Аланин 11542 1 2009.02.28 Продолжение таблицы 2 Аминокислоты Аминомасляная кислота Валин Метионин Изолейцин Лейцин Тирозин Фенилаланин Этаноламин Орнитин Лизин Гистидин р 0,05 по отношению к- контроль,- парацетамол,- парацетамоллейцин. Соотношение компонентов оптимизировано нами исходя из проведенных предварительно экспериментов. Стоит отметить, что достоверная положительная корреляционная связь между лейцином, с одной стороны, и валином и изолейцином - с другой, изменялась только при совместном введении лейцина и сульфата цинка в установленном соотношении и не изменялась при введении одного лейцина. Для интегральной оценки влияния композиции на фонд свободных аминокислот был проведен дискриминантный анализ. По значению показателя лямбды Вилкса (0,0445) можно судить о достаточно хорошей дискриминации, а на основании классификационной матрицы можно сделать вывод о 100 корректности выборок для всех групп. Из графика проекции пространства показателей на плоскость двух главных компонент очевидно(ил.1), что положение изучаемых показателей при интоксикации парацетамолом, а также при введении крысам на этом фоне как лейцина, так и предлагаемой композиции лейцина и сульфата цинка в отношении 41 значительно отличается от положения показателей контрольных животных, причем расстояние между центрами контрольной и парацетамольной группы было больше, чем между центрами контрольной группы и группами с введением изучаемых соединений. Относительно первого главного компонента группы с введением препаратов не отличались друг от друга, а относительно второго компонента наблюдалось различие между группой совместного введения лейцина и сульфата цинка с остальными группами. Следует указать на некоторый нормализующий эффект одного лейцина, но его эффект усиливается комбинацией его с сульфатом цинка, при этом появляются дополнительные механизмы корригирующего действия. Таким образом, предлагаемая композиция, состоящая из лейцина и цинка сульфата в соотношении 41, назначаемая в виде суспензии или в таблетированной форме, что делает ее удобной для применения, действительно оказывает корригирующее действие при нарушении функции печени. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 4