Штамм бактерий Pseudomonas chlororaphis NCIMB 40616, средство для профилактики заболеваний растений и способ профилактики заболеваний растений

12 1/20 НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ШТАММ БАКТЕРИЙ 40616, СРЕДСТВО ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ РАСТЕНИЙ И СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЙ РАСТЕНИЙ(57) 1. Штамм бактерий 40616 для борьбы с заболеваниями растений, вызываемыми патогенными грибами. 2. Средство для профилактики заболеваний растений, вызываемых патогенными грибами, отличающееся тем, что оно содержит суспензию бактерийштамма 40616 или их культуральную жидкость, содержащую метаболиты, активные в отношении патогенных грибов. 3. Средство по п. 2, отличающееся тем, что патогенным грибом является. 4. Средство по п. 2, отличающееся тем, что патогенным грибом является. 5. Средство по п. 2, отличающееся тем, что патогенным грибом является. 5073 1 6. Средство по п. 2, отличающееся тем, что патогенным грибом является. 7. Средство по п. 2, отличающееся тем, что патогенным грибом является. 8. Средство по п. 2, отличающееся тем, что патогенным грибом является. 9. Средство по любому из пп. 2-8, отличающееся тем, что дополнительно содержит носитель, приемлемый для сельского хозяйства. 10. Средство по п. 9, отличающееся тем, что носитель является жидким. 11. Средство по п. 9, отличающееся тем, что носитель является твердым пористым материалом, насыщенным бактериями указанного штамма или их культуральной жидкостью. 12. Средство по п. 2, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит клейкие добавки. 13. Средство по п. 2, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит питательные вещества. 14. Способ профилактики заболеваний растений, вызываемых патогенными грибами,путем обработки эффективной дозой микробиологического средства растения и/или его семян, и/или почвы, на которой растет или должно быть выращено растение, отличающийся тем, что в качестве микробиологического средства используют средство по любому из пп. 2-13. 15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что микробиологическое средство вносят в почву, на которой растет или должно быть выращено растение.(56)92/18613, 1. Изобретение относится к средствам защиты растений, а более конкретно - к новому штамму бактерий, и к использованию в растениеводстве средств,содержащих этот штамм или продуцированные им антибиотики, для защиты растений от поражения фитопатогенными микроорганизмами. Некоторые микробы, способные вызывать болезни растений, приносят значительный вред культурным растениям и соответственно экономические потери. Многие из них поражают листья и/или другие наземные части растений, а затем обычно переносятся спорами по воздуху на новые неинфицированные культуры. Другие передаются от одного поколения культур к другому через семена, а некоторые вызывающие заболевания и причиняющие экономический ущерб микроорганизмы передаются через почву, оставаясь в ней более или менее пассивными до появления восприимчивой к ним культуры. Многие методы борьбы с вызывающими заболевания микроорганизмами в растениеводстве требуют значительных финансовых затрат, но их использование для большинства растениеводческих хозяйств экономически необходимо. Один из широкоиспользуемых методов - обработка биостатическими или биоцидными химикатами. Их в большинстве случаев наносят опрыскиванием на посевы, обрабатывают ими семена или корни или дезинфицируют почву. Другие общепринятые методы включают селекцию культур, устойчивых к патогенам, и агротехнические мероприятия. Все эти общепринятые методы профилактики имеют некоторые недостатки. Агротехнические мероприятия эффективны или приемлемы только для решения некоторых проблем, связанных с заболеваниями растений. Селекция устойчивых к болезням культурных растений также возможна или приемлема только в определенных случаях, на нее может потребоваться много времени, а достигнутая устойчивость может быть утеряна через некоторое время с появлением новых штаммов патогена. Часто высокоэффективны химические соединения, но они могут приводить к нежелательным последствиям для окружающей 5073 1 среды, требуют осторожности в обращении из-за риска для здоровья человека и, кроме того, они могут стать неэффективными при появлении устойчивых патогенных штаммов. Использование средств биологической борьбы или биопестицидов может быть более эффективным и предпочтительным, чем использование других методов, и поэтому такие средства испытывают в широких масштабах. Известно, что некоторые штаммы бактерий или грибов подавляют рост различных фитопатогенных микроорганизмов. Для эффективного использования такие штаммы должны обладать стабильностью, давать воспроизводимые результаты в полевых условиях, и пользователи должны иметь возможности применять их в полевых условиях. До настоящего времени ряд штаммов отвечал этим требованиям, и поэтому их использовали как коммерческие продукты. Известен (международная заявка 92/18613, МПК 12 1/20,12 139,01 63/00, 1992) штамм бактерий 40189, который активен в отношении грибов - возбудителей увядания растений гороха и кукурузы, относящихся к родам , , . Недостатком штамма является ограниченный спектр его антигрибной активности. Известно (международная заявка 92/18613, МПК 12 1/20,12 139,01 63/00,1992) средство для борьбы с заболеваниями растений, вызываемыми патогенными грибами, которое включает в себя штамм бактерий 40189. Это средство эффективно против ограниченного круга патогенов, вызывающих увядание растений гороха и кукурузы. Известен (международная заявка 92/18613, МПК 12 1/20,12 139,01 63/00,1992) способ борьбы с заболеваниями растений, вызываемыми патогенными грибами,включающий введение эффективной дозы микробиологического средства в окружающую среду, где возбудитель заболевания должен быть подавлен, при котором в качестве микробиологического средства используют штамм бактерий 40189. К недостаткам этого метода следует отнести достаточно ограниченный круг заболеваний растений, для борьбы с которыми может быть использован данный способ. В задачу настоящего изобретения входило получение бактериального штамма, обладающего широким спектром активности в отношении фитопатогенных грибов, а также создание на его основе микробиологического средства и способа для борьбы с заболеваниями растений, вызываемыми патогенными грибами. Эта задача решается тем, что предложен новый штамм бактерий 40616 для борьбы с заболеваниями растений, вызываемыми патогенными грибами. Задача решается также тем, что предложено средство для борьбы с заболеваниями растений, вызываемыми патогенными грибами, отличающееся тем, что оно содержит штамм бактерий 40616 или его культуральную жидкость, содержащую метаболиты, активные в отношении патогенных грибов. Указанное средство активно, в частности, в отношении грибов, ,,,и. Предпочтительно, чтобы указанное средство дополнительно содержало носитель,приемлемый для сельского хозяйства. Наиболее предпочтительно, чтобы носитель был жидким или являлся твердым пористым материалом, насыщенным указанным штаммом или его культуральной жидкостью. Средство по изобретению может дополнительно содержать клейкие добавки или питательные вещества. Для решения указанной выше задачи предложен также способ борьбы с заболеваниями растений, вызываемыми патогенными грибами, включающий введение эффективной дозы микробиологического средства в окружающую среду, где возбудитель заболевания должен быть подавлен, отличающийся тем, что в качестве микробиологического средства используют вышеописанный штамм бактерий или его культуральную жидкость, содержащую метаболиты, активные в отношении патогенных грибов. 3 5073 1 Предпочтительно указанное введение осуществляют путем нанесения микробиологического агента на семена, на части растений, служащие для вегетативного размножения, и на растения или путем внесения в среду, на которой растет или должно быть выращено растение. На чертеже показан жирнокислотный профиль выделенного штамма 342, полученный с помощью системы распознавания патогенных микроорганизмов (,., ). Предложенный новый штамм ( 342) бактерийс желаемыми характеристиками депонирован в Национальных Коллекциях промышленных и морских бактерий ((,Абердин, Шотландия, 14 февраля 1994 г., согласно Будапештскому Договору, и ему присвоен регистрационный 40616. Характеристика нового бактериального штамма 342. Морфологические характеристики. Морфология колоний на 10 (10 г триптонсоевого бульона ( .) 12 г технического агара ( .) в 1000 мл дистиллированной воды) образует круглые белые, умеренно выпуклые колонии в виде хорошо видимых прозрачных кристаллов в агаре при высокой плотности клеток. Клетки представляют собой грамотрицательные палочки, флуоресцирующие ярко-желтым светом всреде(1,5 г 24 1,5 г 472 20 г протеолитического пептона ( .) 10 мл глицерина, 15 г агара( .) в 1000 мл дистиллированной воды). Жирнокислотный анализ. Жирнокислотный профиль бактерии показан на чертеже. Этот анализ был произведен с использованием системы распознавания патогенных микроорганизмов (,., ), версия 3.7. Согласно этой программе испытания,342 больше всего похож нас индексом подобия 0,705. Биохимические характеристики приведены в табл. 17. Предпочтительные способы репродукции штамма, приготовления препаратов и их применения в полевых условиях и теплицах. Биомассу активного штамма лучше всего получать путем ферментации, включающей в себя инокуляцию образца чистой культуры штамма в жидкую культуру, выращиваемую при встряхивании, или в ферментатор, заполненный подходящей ферментационной средой. Штамм может быть также выращен на стерильной поверхности, например на агаризованной поверхности, и когда клетки вырастут, их можно суспендировать в воде или другой известной жидкой среде. В качестве среды для выращивания в принципе пригодны любые известные среды для выращивания бактерий. Ферментацию ведут до получения достаточной концентрации клеток, например около 5-109 КОЕ (колониеобразующих единиц)/мл для жидких культуральных сред. Полученная таким образом культуральная жидкость или суспензия бактерий может быть использована в таком виде для защиты растений, ее также до использования можно обработать и приготовить состав в соответствии с рецептурой. В одном способе обработки бактериальные клетки в культуральной жидкости можно убить, например, нагревом или их можно отцентрифугировать, а оставшуюся среду или супернатант, содержащие бактериальные метаболиты, можно использовать для защиты растений как с предварительной очисткой и/или концентрированием, так и без них. Суспензии бактерий и культуральные жидкости можно также гомогенизировать в смеси с одним или несколькими известными соединениями или группами соединений при условии,что такие соединения совместимы со штаммами бактерий или их антипатогенно активными метаболитами или их производными. Подходящими соединениями могут быть порошкообразные добавки или твердые носители, такие как тальк, каолин, бентонит или монтмориллонит, известные смачивающиеся порошки, питательные вещества-источники углерода (глюкоза, сахароза и фруктоза) или комплексные бактериальные питательные 4 5073 1 вещества (дрожжевой экстракт, бактериологический пептон или триптон), соли металлов,соли жирных кислот, эфиры жирных кислот, ионные или неионные ПАВ, растительные питательные вещества, регуляторы роста растений, фунгициды, инсектициды, бактерициды и им подобные. Суспензии бактерий и культуральные жидкости могут быть высушены или лиофилизированы до или после смешивания с подходящими соединениями, а полученный продукт - использован для защиты растений. Подходящий способ сушки - например сушка на воздухе вермикулита с присутствующей в нем бактериальной культуральной жидкостью. Препараты бактерий и метаболитов могут быть применены любым способом, известным для обработки семян, частей растений, служащих для вегетативного размножения,растений и почвы штаммами бактерий разбрызгиванием, опрыскиванием, распылением,опылением, рассеиванием, осаждением, погружением или поливом в соответствии с целями и преобладающими обстоятельствами. Обычный расход препарата для обработки семян преимущественно составляет от 1011 до 1012 КОЕ/га, а при опрыскивании от 1012 до 1014 КОЕ/га, или соответствующее количество бактериальных метаболитов. Пример 1. Выделение микроорганизма 342. Выкопанные корни растенияпромыли в стерильной водопроводной воде для удаления налипшей почвы. От молодого корня отрезали кусок длиной 2-3 см, соблюдая стерильность. Этот кусок отрезали выше конца корня. В этом куске корня сделали маленькие надрезы прокаленным над пламенем скальпелем. Затем кусок корня натерли на поверхность агара 10. После прорастания бактерий микроорганизм 342 собрали и на 10 вырастили чистую культуру. Пример 2. Хранение микроорганизма 342. Чистую культуру в небольшой ампуле подвергли глубокому замораживанию при -70 . В качестве вещества-протектора замороженной культуры использовали 10 -ный раствор глицерина в водопроводной воде с 7,15 после автоклавирования. После замораживания при -70 ампулы хранили при -20 . Для длительного хранения образец подвергли лиофилизации. После прорастания в течение 48 ч на агаре 10 бактериальный газон соскребли с агаризованной поверхности,смешали с протектором лиофилизированной культуры (50 гТ 70 (.), 50 г глутамата ( ) в 1000 мл дистиллированной воды), разлили в небольшие ампулы (20 мл) и поставили в лиофильную сушку( .,) на 24 ч. После лиофилизации ампулы закрыли газонепроницаемыми резиновыми пробками и оставили на хранение при 4 . Пример 3. Действие 342 противпри первичном скрининге в теплице. Бактерии использовали для обработки семян пшеницы следующим образом 24-часовые культуры на 10, выращенные при 15 , соскребли с агаризованной поверхности 9 сантиметровой чашки Петри и смешали с 40 мл питательного бульона ( 18 г сахарозы, 5 г бактериального пептона ( .), 2 г дрожжевого экстракта ( .), 0,5 г 24 и 0,25 г 472 в 1000 мл дистиллированной воды с 7,2-7,4) и 40 мл 2 ного (масса/об.) раствора натриевой соли карбоксиметилцеллюлозыв стерильной дистиллированной воде. Этой смесью полили семена, через 20 мин излишек смеси слили,а семена высушили под вентилятором в течение ночи. Для обработки семян в этом тепличном анализе взяли две банки и засеяли в каждую по 50 семян. Банки 18 см диаметром и 4 см высотой были заполнены на 2/3 нестерилизованной коммерческой торфяной смесью с добавлением 20 по объему песка. 5 5073 1 До обработки бактериями семена озимой пшеницы (культурный сорт ) искусственно заразили патогеном. Патоген культивировали в течение 7 дней в картофельно-декстрозном бульоне (24 г картофельно-декстрозного бульона( .) в 1000 мл дистиллированной воды) при комнатной температуре на роторной качалке. Полученную кашицу гомогенизировали в кухонном смесителе и вылили на семена. Через 30 мин жидкость слили, а семена оставили сушиться под вентилятором на ночь. Таким образом инвазированные семена затем обработали штаммом 342 и высеяли в банки, как было описано выше. После высевания банки накрыли стеклянными крышками и поставили в темное место при 6 . Через 5 дней крышки сняли, каждую банку полили 100 мл воды и поместили в пятилитровый пластиковый мешок, который поддерживали две деревянные палки. Затем банки поместили в теплицу при 12-15 на 8 дней. Опыт на семенах заключался в следующем. 1. Штаммом 342 бактерии . , смешанным с /, обработали семена, инвазированные патогеном . . 2. Семена, инвазированные патогеном . , составляли контрольную группу больных. 3. Необработанные семена составляли контрольную группу здоровых. Эффект подавления заболевания зафиксировали в процентах появления всходов здоровых (то есть без мицелия) растений среди посеянных. Результаты типичного первичного анализа с патогеном .представлены в табл. 1. Пример 4. Действие 342 противпри вторичном скрининге в теплице. При этом отборе штамм 342 выращивали в течение 48 ч в полуконцентрированном (15 г/л) триптон-соевом бульоне ( .) на роторной качалке в темноте при 18-20 . Затем естественно зараженные патогеном .семена ячменя культурного сортасмешали в пластиковом мешке с полученной суспензией бактерий из расчета 300 мл на 1 кг семян и после перемешивания мешок встряхивали около 4 мин. Обработанные таким образом семена сушили под вентилятором при комнатной температуре в течение одного дня,а затем высеяли в банки, как описано в примере 3. Три засеянные банки на обработку поместили сначала в темное помещение при 6 на 7 дней, а затем в теплицу при около 20 , как описано в примере 3. Для выявления эффекта от обработки подсчитали количество появившихся ростков растений и количество растений с пораженным первым листом. Бактериальное действие сравнивали с необработанными контрольными образцами и семенами, обработанными фунгицидом 400 (гуазатин 150 г/лимазалил 10 г/л), - ., при дозе 4 мл на килограмм семян (табл. 2). Пример 5. Действие 342 на патогены растений в полевых условиях. Полевые испытания проводили в виде рандомизированных блоков с повторением от трех до восьми раз на участках с размерами от 0,15 м 2 (один эксперимент с . ) до примерно 15 м 2 (большинство экспериментов). Эти участки находились в разных местностях Швеции и в большинстве случаев на суглинистых почвах с содержанием гумуса примерно 3 . Обработку семян бактериями и препаратом 400 проводили так, как описано в примере 4. После того как обработанные семена высушили вентилятором, их оставили при комнатной температуре на различное время перед высеванием на полевые участки. Все семена, за исключением инвазированных патогеном . , были естественно инвазированы или заражены различными болезнями. Семена озимой пшеницы(культурный сорт ) были искусственно инвазированы спорами .путем смешивания 2 г зараженных .измельченных колосков с 1 кг семян пшеницы. 6 5073 1 Действие 342 на. Это действие определяли по частоте появления зараженных колосков во время созревания. Результаты, полученные во время двух испытаний в 1991/92 г. и двух испытаний в 1992/93 г., представлены в табл. 3. Разница между бактериальной и фунгицидной обработками была существенна в 1992/93 г. Действие 342 на, . , .и. В полевых экспериментах с этими патогенами измеряли число проросших и число инфицированных растений на м 2, а также в большинстве экспериментов - урожайность злаков, вес тысячи зерен и вес гектолитра зерен. Действие на. Результаты полевых испытаний в 1991-1993 гг. и действие .на ячмене в тех случаях, где проводили испытания, показаны в табл. 4, 5 и 6. Действие на. Результаты экспериментов с семенами, зараженными. , проведенных в 1991-1993 гг., приведены в табл. 7, 8 и 9. Действие на. Результаты экспериментов с семенами овса, зараженного . , проведенных в 1991 - 1993 гг., приведены в табл. 10, 11 и 12. Действие на. В полевых экспериментах с колосьями овсянки, зараженной . , было подсчитано число колосков овсянки или их процентное содержание на м 2 или их . В период созревания урожайность не определяли. Результаты трех экспериментов в 1991-1993 гг. приведены в табл. 13. Пример 6. Применение 342 для обработки семян и других частей растения. Обработка семян водным составом, содержащим 342. Бактериальные суспензии, полученные, как описано в примерах 3 и 4, смешали с каждым из следующих веществ или соединений Порошок талька , 48 г/л бактериальной суспензии. Бактериологический пептон (, .), 5 г/л бактериальной суспензии 20 ( .), 20 мл/л бактериальной суспензии.(эфир целлюлозы,), 12 г/л бактериальной суспензии.(.), 1 г/л бактериальной суспензии.(.), 1 г/л бактериальной суспензии. В других экспериментах бактериальную суспензию центрифугировали при 10000 в течение примерно 10 мин, а полученные гранулы ресуспендировали в 0,1 М 4 или в пептонной воде (5 г бактериологического пептона ( .) на литр водопроводной воды). После тщательного перемешивания полученными суспензиями обработали семена(пример 4 для несмешанных бактериальных суспензий). Обработка семян лиофилизированными бактериями. Бактерии 342, выращенные в культуре, выращиваемой при встряхивании (пример 4),центрифугировали и полученные гранулы ресуспендировали в растворе молочных сливок(200 г порошка молочных сливок фирмы, Швейцария, на литр стерильной дистиллированной воды), используемом в качестве протектора модифицированных бактерий. Смесь заморозили в закрытых стеклянных банках, а затем лиофилизировали в этих банках в течение примерно 48 ч в лиофильной сушке( ., Дания). Полученный порошок оставили до применения при 4 в пластиковых мешках или в пластиковых бутылях с завинчивающимися крышками. Для обработки семян порошок перемешали в воде или в других водных растворах, а затем обработали семена (пример 4 для бактериальной суспензии), или его смешивали в пластиковом контейнере с семенами всухую, тщательно встряхивая смесь (примерно 10 г порошка на кг семян). Гранулирование семян, обработанных 342. Бактерии 342, выращенные в культуре, выращиваемой при встряхивании (пример 4),перемешали в пропорции 11 по объему с клейким веществом (2 мас./об. водного рас 7 5073 1 твора натриевой соли карбоксиметилцеллюлозы или 50 мас./об. водного раствора гуммиарабика). Этой смесью обработали семена (пример 4). Затем в пластиковый мешок добавили избыточное количество бентонита (.) или порошка талька( . ) мешок надули и сильно потрясли в течение нескольких минут. После этого семена разложили на большие подносы под вентилятором и оставили сохнуть при комнатной температуре. Опрыскивание побегов растений бактериальной суспензией. Бактериями 342, выращенными в культуре, выращиваемой при встряхивании (см. пример 4), заполнили пластиковые ручные опрыскиватели или опрыскиватели с приводом,затем опрыскали листву и побеги растений. В другом случае бактерии сначала центрифугировали при 10000 в течение десяти минут, осадок ресуспендировали в водопроводной воде и полученную бактериальную суспензию использовали для опрыскивания листвы и побегов растений. Пример 7. Действие очищенных метаболитов из 342 против заболеваний, вызванных, при экспериментах в теплицах. Штамм 342 вырастили за 48 ч в полуконцентрированном (15 г/л) триптон-соевом бульоне ( .) на роторной качалке в темноте при 18-20 . Полученную суспензию бактерий центрифугировали при 48000 в течение 30 мин, а затем метаболиты в надосадочной жидкости подвергли дальнейшей очистке в патронах -18 ( ) следующим образом. 1. 80 мл надосадочной жидкости влили в -, активированный 10 мл метанола. 2. - промыли сначала 5 мл 30 -ного этанола, а затем 5 мл 40 -ного этанола. 3. Метаболиты элюировали 5 мл 70 -ного этанола. 4. Элюат в 70 -ном этаноле выпарили в роторном испарителе, оставив примерно 1,5 мл водного раствора. Затем его разбавили водопроводной водой до объема 6,5 мл. Семена ячменя культурного сорта , естественно зараженные . , погрузили в эти 6,5 мл водного раствора метаболитов на 30 мин, а затем посеяли в банки по 50 семян. Банки накрыли стеклянными крышками и поместили в темное место при 6 . Через 9 дней крышки сняли и банки поместили в теплицу при 15-22 на примерно 2 недели. Число проросших и число пораженных болезнью растений подсчитали (пример 4). Для контроля использовали необработанные семена и семена, обработанные надосадочной жидкостью, не очищенной в патроне - и не содержащей клетки 342. Пример 8. Результаты сравнительных испытаний штамма 342 и 11 других изолятов бактерий, полученных из разных коллекций культур. Одиннадцать разных не шведских изолятов(табл. 1) испытали вместе со штаммом 342 на действие против пятнистости листьев ячменя и на индукцию ответа в биохимических тестах согласно системе тестирования 20 . Дополнительно, образцы сравнивали по появлению колоний и кристаллических образований на чашках с агаром. Эти одиннадцать не шведских изолятов были получены из различных стран и депонированы в четырех разных признанных коллекциях культур(табл. 1). Тест на способность подавлять заболевания при испытаниях в теплице. Тесты были проведены с ячменем, зараженным(пример 4), и для обеспечения адекватного сравнения все изоляты были испытаны одновременно. Как видно из табл. 15, результаты показывают, что 342 уникален в том смысле, что ни один из других испытаний изолятов не обладает таким свойством, как 342, при таком тестировании, а именно - способность подавлять инфекцию, вызванную. 5073 1 Индукция реакций при биохимических тестах согласно системе тестирования 20 . Тесты проводились, как описано выше. Результаты приведены в табл. 16. Они показывают, что 342 и в этом отношении уникален и отличается от остальных 11 испытанных изолятов. Некоторые из испытанных изолятов нельзя считать, согласно этому тесту главными среди видов. Сравнение появления колоний и образования кристаллов на чашках с агаром. Изоляты культивировали в чашках Петри на 10, как описано выше. Наблюдали небольшую разницу в появлении колоний различных изолятов, но по этому признаку все изоляты различить нельзя. Однако изолят 342 был единственным, который образовывал типичные прозрачные кристаллы в агаре и по этому свойству его можно было отличить от всех других изолятов. Таблица 1 Влияние штамма 342 на всхожесть и проявление заболевания озимой пшеницы, выращенной из семян, инвазированных патогеном М.Вид обработки Процентздоровых растений среди посеянных 81 1 89 Таблица. 2 Действие штамма МА 342 и фунгицида 400 на ячмень, зараженный. , при обычном вторичном тепличном скрининге Вид обработки Контроль 400, 4 мл/кг МА 342, 300 мл/кг Таблица 3 Действие суспензии штамма МА 342 на зерновую инфекциюВид обработки Контроль 5073 1 Таблица 4 Результаты четырех полевых экспериментов на ячмене, зараженномв 1991 г., приведены средние показатели экспериментов, проведенных в Алнарпе, Ланне, Стренгнесе и Ультуне Кол-во инУрожай- Кол-во рас 2 фиц. растеность, кг/га тений на м ний на м 2 Контрольная 4970 361 47 Таблица 5 Результаты пяти полевых экспериментов на ячмене, зараженномв 1992 г., приведены средние показатели экспериментов, проведенных в Сваалефе,Нигорде, Келбеке, Ультуне и Ребексдалене Вид обработки Таблица 6 Результаты двух полевых экспериментов на ячмене, зараженномв 1993 г., приведены средние показатели экспериментов, проведенных в Келбеке и Ультуне Вид обработки Контроль Кол-во инфицированных растений на м 2 74 1 5 Таблица 7 Результаты одного полевого эксперимента с ячменем, зараженным . Кол-во инфицированных растений на м 2 31 2 1 5073 1 Таблица 8 Результаты пяти полевых экспериментов с ячменем, зараженным .в 1992 г., приведены средние показатели экспериментов, проведенных в Свалефе, Нигорде, Келбеке, Ультуне и Ребексдалене Вид обработки Таблица 9 Результаты двух полевых экспериментов в 1993 г. с ячменем, зараженным. , приведены средние показатели экспериментов, проведенных в Келбеке и Ультуне Вид обработки Контроль Кол-во инфицированных растений на м 2 46 1 8 Таблица 10 Результаты экспериментов с одного участка овса , зараженного.1991 г., Уппсала Вид обработки Контроль Кол-во инфицированных растений на м 2 74 32 17 Таблица 11 Результаты четырех полевых экспериментов в 1992 г. с овсом ( и ),зараженным . , приведены средние показатели экспериментов, проведенных в Свалере и Ультуне Кол-во инУрожай- Кол-во расВес гектолит- Вес 1000 зе 2 фиц. растений ность, кг/га тений на м ра, кг рен, г на м 2 Контроль 3990 428 22 57,5 35,4 Кол-во инфицированных растений на м 2 79 14 27 Таблица 13 Результаты трех экспериментов с овсом, зараженным 300 мл в 1991 и 1992 гг. 200 мл в 1993 г. Таблица 14 Действие очищенных метаболитов из МА 342 и надосадочной жидкости, содержащей клетки МА 342, на .на ячмене при обычных испытаниях в теплице Вид обработки Контроль (необработанные семена) Надосадочная жидкость с клетками МА 342 Выпаренный элюат без клеток растений с поражением первого листа 21,6 1,0 0,0 Таблица 15 Названия образцов, страны происхождения и действие МА 342 и 11 других изолятов .на ячмень, зараженный .при испытаниях в теплице Название образцов МА 34220751869148741486918541068673576508 АТСС 9446 АТСС 17414 АТСС 17811 Контроль (необработанныерастения) Страна происхождения Швеция Чехословакия Новая Зеландия США, Колорадо США, Иллинойс США, Луизиана Англия Англия Германия США США США Действие на пятнистость листьев при испытаниях в теплице. Зараженные растения после обработки рассматриваемым изолятом,9 53 60 56 58 43 54 58 56 61 50 58 71 5073 1 Таблица 16 Реакции, индуцированные различными изолятами, использованными в нескольких биохимических тестах согласно системе тестирования 20 .означает положительную реакцию, - - нет/отрицательную реакцию Свойства в тестах МА по 20342 Восстановление нитратов Продуцирование индола Превращение глюкозы в кислоту Аргининдигидро лаза Уреаза Гидролиз эскулина Гидролиз желатина Усвоение арабинозы Усвоение маннозы Усвоение маннита Усвоение глюкозамина Усвоение мальтозы Усвоение глюкона-та Усвоение капрата Усвоение адипата Усвоение малата Усвоение фенилацетата Цитохромоксидаза Испытанный изолят В В В В ВАТСС АТСС АТСС 075 1869 4874 14869 1854 10686 7357 6508 9446 17414 17811 Таблица 17 Биохимические характеристики Характеристики, полученные при экспресс-анализе по 20 Восстановление нитратов Продуцирование индола Превращение глюкозы в кислоту Аргининдигидролаза Уреаза Гидролиз эскулина Гидролиз желатина Реакция изолята МА 342 5073 1 Продолжение таблицы 17 Усвоение глюкозы Усвоение арабинозы Усвоение маннозы Усвоение маннита Усвоение -ацетил-глюкозамина Усвоение мальтозы Усвоение глюконата Усвоение капрата Усвоение адипата Усвоение малата Усвоение цитрата Усвоение фенилацетата Цитохромоксидаза., Франция. Характеристики, полученные в результате дополнительных анализов Продуцирование левана Усвоение ксилозы Усвоение сорбита Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 14