Препарат для лечения гельминтозов жвачных животных

(51) МПК (2006) НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР ИНТЕЛЛЕКТУАЛЬНОЙ СОБСТВЕННОСТИ ПРЕПАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ГЕЛЬМИНТОЗОВ ЖВАЧНЫХ ЖИВОТНЫХ(71) Заявитель Республиканское научноисследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(72) Авторы Якубовский Мирослав Викторович Мясцова Татьяна Яковлевна Степанова Елена Анатольевна Лавор Светлана Михайловна Щурова Наталья Юрьевна(73) Патентообладатель Республиканское научно-исследовательское дочернее унитарное предприятие Институт экспериментальной ветеринарии им. С.Н.Вышелесского(56)2140267 1, 1999. БЕРЕЗОВСКИЙ А.В. и др. Науковий всник Нацонального аграрного унверситету. - 2001. -36. - С. 95-98.4344 1, 2002.2160536 1, 2000. ЯКУБОВСКИЙ М.В. и др. Диагностика, терапия и профилактика паразитарных болезней животных. - Минск Хата, 2001. - С. 127-128, 141-142, 149150.(57) Препарат для лечения гельминтозов жвачных животных, содержащий клозантел, альбедазол и лактозу, отличающийся тем, что дополнительно содержит левамизол и токоферола ацетат при следующем соотношении компонентов, мас.клозантел 4,75-5,25 альбедазол 14,50-15,50 левамизол 4,75-5,25 токоферола ацетат 2,37-2,65 лактоза остальное. Изобретение относится к области ветеринарной паразитологии, в частности к лечению гельминтозов (трематодозов, нематодозов и цестодозов) жвачных животных. Для лечения гельминтозов жвачных известны монопрепараты на основе фенбендазола(панакур, оксилур, тимбендазол-200, тимбендазол-500 и др.) 5-фенил-тио-2-бензимидазолкарбамат, темно-желтый порошок без вкуса и запаха, нерастворим в воде. Фенбендазол-антгельминтик широкого гельминтоцидного спектра действия. Обладает высокой эффективностью против большинства видов желудочно-кишечных и легочных нематод. Фенбендазол повреждает целостность клеток гельминтов, нарушает микро 12300 1 2009.08.30 сосудистую функцию, синтез белка, нарушает углеводный обмен и ингибирует активность фумаратредуктазы у гельминтов 1, 2. Данный препарат обладает недостатком, заключающимся в том, что при длительном применении животным у гельминтов развивается устойчивость, так как повышается активность белков и наблюдаются мутации в белках, отвечающих за функционирование ферментов детоксикации - монооксигеназ, эстераз, галактионтрансфераз 3. Известен антгельминтный монопрепарат более узкого спектра действия - Политрем. В химическом отношении представляет 1,4-бис-(трихлорметилбензол). Это белый порошок со слабым медимекаментозным запахом, в воде не растворим, без вкуса. Политрем применяют при остром и хроническом фасциолезе жвачных. У гельминтов политрем нарушает обмен углеводов, снижает энергетический обмен, подавляет синтез аденозинтрифосфорной кислоты, а также снижает иммунный статус и естественную резистентность организма животных 4. Данный препарат обладает недостатком, заключающимся в том, что он эффективен только при трематодозах, и при длительном применении животным у гельминтов развивается устойчивость, так как снижает иммунный статус и естественную резистентность организма животных. При применении монопрепаратов наблюдается сравнительно длительное восстановление иммунной системы до физиологических значений. Эти недостатки частично устранены в полипрепарате - антгельминтике широкого спектра действия - Бровадазол-плюс, содержащим фенбендазол и вермитокс. Препарат относится к малотоксичным веществам, не обладает кумулятивным, эмбриотоксическим и тератогенным свойствами 5. При длительном применении не так быстро у гельминтов развивается привыкание к компонентам препарата, потому что происходит одновременное воздействие препаратов на два разных звена метаболического процесса у гельминтов, что не приводит к возникновению мутаций в белках и снижению интенсивности передачи нервных импульсов. Кроме того, препарат при длительном применении отрицательно влияет на иммунобиологические показатели организма животных за счет того, что компоненты препарата параллельно угнетают иммунную систему, т.е. клеточный и гуморальный иммунитет 6,7. Этот недостаток частично устранен в противопаразитарном средстве Ивермек (Россия), имеющем антгельминтную направленность и содержащем антигельминтный компонент ивермектин 1 и иммуностимулятор токоферол ацетат, и консервант, выполняющий функцию инертного наполнителя 8. Препарат нарушает передачу нервных импульсов у паразита, что приводит к его параличу и гибели. Фармакодинамика препарата характеризуется быстрым распределением в организме и длительным выведением, что обеспечивает постоянное паразитоцидное действие в течение 10-14 дней. Токоферол ацетат частично восстанавливает уровень иммунной системы организма хозяина, так как ивермектин оказывает иммуносупрессивное действие 8. Однако серьезным недостатком данного препарата является длительный срок (до 28 дней) ожидания использования в пищу молока и мяса для естественного процесса самоочищения организма при метаболизме ивермектина,и при этом метаболиты выводятся из организма животного с фекальными массами. Ивермек имеет относительно узкий спектр действия, оказывает воздействие только на нематод и членистоногих. Задачей, на решение которой направлено заявленное изобретение, является создание максимально безвредного для организма животных препарата с более широким гельминтоцидным спектром действия на гельминтов (трематод, нематод и цестод) печени, легких и желудочно-кишечного тракта у жвачных животных, у которого будет усилен синергический эффект, что позволит предупреждать развитие толерантности у гельминтов к заявляемому препарату. Он будет обладать иммунокоррегирующим действием, что будет 2 12300 1 2009.08.30 способствовать более быстрому восстановлению (нормализации) патологических процессов в организме больного животного (патогенетическая терапия), т.е. активизировать естественные механизмы защиты организма животного ускоренным метаболизмом препаратов, более быстрым выведением его из организма с калом и мочой. Поставленная задача достигается тем, что препарат для лечения гельминтозов жвачных животных, содержащий клозантел, альбендазол и лактозу, дополнительно содержит левамизол и токоферола ацетат при следующем соотношении компонентов, мас.клозантел 4,75-5,25 албендазол 14,5-15,5 левамизол 4,75-5,25 токоферола ацетат 2,37-2,65 лактоза остальное. Клозантел в химическом отношении представляет собой -(5-хлор-4(4-хлорфенил)цианметил-2-гидрокси-3,5-дийодбензамид, нарушает процессы фосфорилирования и переноса электронов в организме паразитов, что приводит к нарушению энергетического обмена и гибели их. Максимальная концентрация препарата в крови достигается через 12 часов после введения и сохраняется в течение 24-36 часов. Терапевтическая концентрация препарата в организме животного сохраняется на протяжении 10-11 суток. Клозантел не подвергается биотрансформации в организме и выделяется преимущественно в неизмененном виде 9. Левамизол - в химическом отношении представляет Д,-2,3,5,6-тетрагидро-6 фенилимидозо-(2,1-)тиазол-гидрохлорид, нарушает энергетический обмен у гельминтов, блокируя образование аденозинтрифосфорной кислоты, воздействует на нервно-мышечную систему паразита, тормозя фермент ацетилхолинэстеразу, вызывает непрерывное сокращение мышц, последующую релаксацию и необратимый паралич паразита, оказывает влияние как на половозрелые, так и на молодые формы желудочно-кишечных и легочных нематод, стимулирует иммуногенез макроорганизма 10. Албендазол - албендазол-5-(пропил-тио)-1 бензимидазол-2-ил-карбамат нарушает у гельминтов энергетический обмен, тормозит активность фумаратредуктазы, что ведет к нарушению синтеза аденозинтрифосфорной кислоты у гельминтов. Обладает широким спектром действия, вызывает гибель взрослых и личиночных форм гельминтов 11. Иммуностимулятор - токоферол ацетат - обладает антиоксидантным и иммуномодулирующим свойствами, уменьшает перекисное окисление липидов, предупреждая повреждение мембран гепатоцитов, усиливает метаболизм холестерина и липопротеидов 12. Лактоза (молочный сахар) - инертный наполнитель улучшает вкус препарата и позволяет увеличить объем дозы 13. Большинство антгельминтиков, в частности клозантел и албендазол, оказывают супрессивное действие на организм хозяина, что и подтверждается нашими исследования. Компоненты предлагаемого препарата в заявленных дозах для лечения гельминтозов животных усиливают действие друг друга, т.е. проявляется синергический эффект, заключающийся в том, что не наблюдается прочного связывания компонентов препарата с соответствующими рецепторами гельминта. В результате чего не происходит активизация белков в организме гельминтов, способных удалять проникшие компоненты препарата из клеток гельминта. При таком активном одновременном воздействии препарата на различные звенья обменных процессов гельминтов у них нарушаются структурные и функциональные элементы их жизнедеятельности, что приводит к дестабилизации обмена веществ, прекращению питания, гибели и элиминации из организма. Все это позволяет предупреждать развитие толерантности у гельминтов к препарату. В то же время препарат оказывает иммунокоррегирующее и антиоксидантное воздействие на организм хозяина,выражающееся в активизации специфической и неспецифической иммунологической защиты организма животных (левамизол, токоферол ацетат). 3 12300 1 2009.08.30 Механизм действия заявляемого препарата заключается в том, что нарушаются процессы фосфорилирования и переноса электронов в организме паразитов под воздействием клозантела, нарушается энергетический обмен у гельминтов подавлением образования аденозинтрифосфорной кислоты (левамизол), воздействует на нервно-мышечную систему паразита, тормозит активность ацетилхолинэстеразы и фумаратредуктазы, что ведет к нарушению синтеза аденозинтрифосфорной кислоты у гельминтов (албендазол). Методика изготовления заявляемого препарата. Для изготовления препарата используют исходные компоненты, заявленные согласно формуле изобретения, соответствующие требованиям технических нормативных правовых актов и (или) разрешенные к применению на территории Республики Беларусь. При необходимости албендазол, клозантел, левамизол и лактозу высушивают в термостате при температуре 70-85 С в течение 1-2 ч до влажности 12-13 согласно ГФ СССР 1961. - С. 683. Взвешивание компонентов, мас.клозантела - 4,75-5,25 левамизола - 4,75-5,25 албендазола - 14,5-15,5 токоферола ацетата - 2,37-2,65 и инертный наполнитель лактозу - до 100,0 г, проводят каждого в отдельности.Описанное вещество получают простым смешиванием всех компонентов в обычных условиях. Так, сначала в произвольной последовательности смешивают активные субстанции клозантела, албендазола, левамизола и токоферола ацетата в течение 10-15 мин,затем прибавляют третью часть лактозы, перемешивают в течение 15-20 мин и после добавляют остальное количество лактозы до 100,0 г. Смешивание компонентов проводят в закрытом смесителе небольшими партиями в течение 1,5-2 ч до получения однородного равномерно окрашенного порошка. Определение токсических свойств заявляемого препарата. Определение острой и хронической токсичности препарата для лечения гельминтозов(далее по тексту препарат) проводили согласно Методическим указаниям по определению токсических свойств препаратов, применяемых в ветеринарии и животноводстве,изложенным в справочнике Ветеринарные препараты. - М., 1988. - С. 241-255. Пример 1. Острую токсичность проводили на белых мышах весом 18-20 г клинически здоровых. Для чего было сформировано 7 опытных и 1 контрольная группы по 7 голов мышей в каждой. Мышам 1 группы препарат применили в дозе 150 мг/кг, 2 группы - 500 мг/кг, 3 группы - 2500 мг/кг, 4 группы - 3500,5 мг/кг, 5 группы - 4500 мг/кг, 6 группы - 6000 мг/кг,7 группы - 7500 мг/кг однократно с кормом. Мыши всех групп хорошо поедали корм. Животные 1-6 групп оставались активными, шерсть гладкая сухая. У мышей 7 группы через 4 ч после дачи препарата наступило легкое угнетение, малоподвижность, скученность. Шерстный покров у них был гладкий, но влажный. Далее к концу первых суток мыши 7 группы корм поедали неохотно, сидели сгорбившись, шерстный покров тусклый и влажный. Падежа мышей не было. На вторые сутки клиническое состояние мышей 7 опытной группы пришло в норму. Таким образом, установить 50 и 100 не представилось возможным из-за низкой токсичности препарата. Однако доза 7500 мг/кг препарата вызывает некоторые отклонения в клиническом состоянии мышей, отличные от физиологической нормы, не приводящие к гибели животных, т.е. является пороговой дозой. Пример 2. Изучение хронической токсичности препарата проводили по вышеуказанной методике на 50 белых мышах весом 16-19 г клинически здоровых. Было сформировано 4 опытные и 1 контрольная группы по 10 голов мышей в каждой. Мышам 1 группы препарат применили внутрь в дозе 150 мг/кг, 2 группы - 500 мг/кг, 3 группы - 2500 мг/кг, 4 группы 4500 мг/кг один раз в день в течение трех дней. Мыши всех групп хорошо поедали корм. В первые двое суток животные всех групп оставались активными, шерсть гладкая сухая. 4 12300 1 2009.08.30 После третьего введения у мышей 3 группы через 2,5 ч наблюдали легкое угнетение, вялость у мышей 4 группы - сильное угнетение, скученность, шерстный покров тусклый и влажный, отказ от корма. Клиническое состояние мышей 3 группы пришло в норму через сутки, а мышей 4 группы через 1,5-2 суток. Падежа мышей не было. Согласно полученным результатам исследований, в хроническом опыте препарат в дозах 2500 мг/кг и 4500 мг/кг, что соответствует соотношению компонентов в мас.клозантела - 4,75-5,25 левамизола - 4,75-5,25 албендазола - 14,5-15,5 токоферола ацетата 2,37-2,65 и инертного наполнителя лактозы - до 100,0 г, вызывает некоторые отклонения в клиническом состоянии мышей от физиологической нормы, не приводящие к гибели животных. На основании результатов изучения острой и хронической токсичности препарат относится к веществам малотоксичным 4-ой группы опасности. Пример 3. Раздражающее действие препарата на слизистые оболочки изучали на трех кроликах. Раздражающее действие на слизистую оболочку глаза изучали путем внесения 50 мг тонко растертого комплексного препарата в конъюнктивальный мешок правого глаза, левый контроль. Через 5 мин после внесения препарата наблюдали следующее у одного кролика незначительное покраснение конъюнктивы и появление слезинки, у двух - каких-либо изменений состояния конъюнктивы отмечено не было. Пример 4. Оценку эмбриотоксической и тератогенной активности препарата проводили согласно методик, изложенных в Методических указаниях по токсикологической оценке химических веществ и фармакологических препаратов, применяемых в ветеринарии. - Минск,2007. - С. 39-41, Методических указаниях по тестированию эмбриотоксического и тератогенного действия ветеринарных антгельминтиков, 1983 и по А.Л. Дыбану и др., 1970. Изучение эмбриотоксического действия препарата проводили на крысах. В опыте было использовано 35 крыс-самок и 10 крыс-самцов. Самок разделили на четыре опытные и одну контрольную группы по 7 голов и подсадили самцов в соотношении 13 и 14. Препарат скармливали в дозе 500 мг/кг массы тела с 1/3 части корма крысам первой группы с 1 по 7 день беременности (период эмбриогенеза), второй группы - с 8 по 14 день беременности (период органогенеза), третьей группы - с 15 по 21 день беременности (плодный период филогенеза), четвертой группы - с 1 по 21 день (в течение всего периода беременности). Контрольным крысам препарат не применяли. За крысами вели клиническое наблюдение. Оценку действия препарата на развитие эмбрионов крысят проводили согласно вышеуказанным методикам. Для выявления тератогенного эффекта по 4 самки из 1-4 опытных и контрольной групп декапитировали на 20-й день беременности. При вскрытии брюшной полости провели учет количества желтых тел в яичниках, после вскрытия матки и обследования плаценты установили количество мест имплантации в матке, количество живых и мертвых плодов. Мертвых и мумифицированных плодов у крыс всех опытных и контрольной групп не обнаружили. Количество желтых тел, мест имплантации соответствует количеству плодов. Количество живых плодов у самок первой группы - 27, второй группы - 28,третьей группы - 29, четвертой - 28, контрольной - 27. Предимплантационной и постимплантационной смертности плодов не было. Все плоды исследовали для выявления уродств. Для этого плоды помещали в чашки Петри с физиологическим раствором и исследовали под бинокулярной лупой. При этом установлено, что аномалии глаз (анофтамия, микрофтамия и др.), мозга (мозговой грыжи и прочих аномалий), лицевого черепа (заячья губа, волчья пасть и др.), конечностей, пальцев, хвоста, позвоночника, передней брюшной стенки отсутствуют. Затем 50 плодов фиксировали жидкостью Буэна для изучения состояния внутренних органов, другую - в 96 спирте с последующим окрашиванием (метод Доусона) для изучения развития ске 5 12300 1 2009.08.30 лета. Разрезы плодов делали бритвой. При этом не выявлено аномалий развития внутренних органов и скелета у плодов от крыс 1-4 опытных и контрольной групп. Для выяснения органогенеза в постнатальном периоде было получено потомство от трех самок из каждой группы, за которым вели клиническое наблюдение в течение 1,5 месяцев. Учитывали двигательную активность, сроки открытия глаз, появление шерстного покрова и т.д. Результаты исследований клинических наблюдений показали, что патологических родов, уродств и мертворожденных животных не наблюдали у крыс всех опытных и контрольной группах. В первой группе родилось 21 крысенок, во второй группе 22, в третьей группе - 20, в четвертой группе - 19 и в контрольной группе - 20 крысят. Двигательная активность крысят нарушена не была. Кожные покровы целостные. Сосательный рефлекс хороший. Опушение крысят во всех группах было на 10-14 день, глаза полностью открылись на 15-18 день. В течение всего периода наблюдений у животных опытных и контрольной групп в клиническом состоянии отклонений от нормы не наблюдали. Аппетит был хороший, животные подвижные. При патологоанатомическом исследовании внутренних органов у самок крыс отклонений от нормы не отмечено. Таким образом, препарат, применяемый в дозе 500 мг/кг массы тела крысам в различные сроки беременности (периоды эмбриогенеза, органогенеза, плодный период филогенеза и в течение всего периода беременности), не вызывает патологических изменений в течение беременности у крыс, а также отклонений в развитии потомства, что свидетельствует об отсутствии у препарата тератогенных, мутагенных, кумулятивных и эмбриотоксических свойств. Пример 5. Изучение влияния препарата на организм кроликов проводили в хроническом опыте. Было сформировано 4 группы кроликов - 3 опытные и 1 контрольная группы по три головы в каждой. Кроликам 1 группы применили препарат в дозе 100 мг/кг, 2 группы - в дозе 250 мг/кг и 3 группы - в дозе 500 мг/кг внутрь один раз в день в течение трех дней подряд. Исследование крови проводили до начала применения препарата и через 5, 11, 17 и 25 дней. Определяли содержание гемоглобина, количество эритроцитов, лейкоцитов и лейкоцитарную формулу по общепринятым методам, содержание общего белка (по биуретовой реакции), активность ферментов - (, АЛТ, ЛДГ и ЩФ), общих липидов и глюкозы в сыворотке крови с использованием наборов. При анализе полученных результатов исследований у кроликов всех опытных групп установлено, что в динамике уровня гемоглобина, количества лейкоцитов, эритроцитов видно содержание общего белка, глюкозы, общих липидов и активности ферментов ,АЛТ, ЛДГ, ЩФ достоверных изменений не происходило в течение всего периода наблюдений. Так, в динамике содержания общего белка происходили колебания в пределах физиологической нормы, что не прослеживается достоверных изменений по отношению к аналогичным показателям животных контрольной группы. Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови колебалась в пределах от 170,08 до 310,62 / и только на 40 день она повысилась до 396,56-503,08 /. Таким образом, препарат для лечения гельминтозов в дозе, превышающей в 10 раз терапевтическую, не оказывает отрицательного влияния на биохимические показатели крови. Пример 6. Нами установлено, что при спонтанном фасциолезе крупного рогатого скота происходит угнетение клеточного звена иммунитета, вследствие чего наблюдается эритропения,снижение уровня гемоглобина, лейкоцитоз с выраженной эозинофилией, снижение количества Т- и В- лимфоцитов и фагоцитарной активности нейтрофилов, снижается активность лизоцима, повышается содержание циркулирующих иммунных комплексов,снижается содержание общего белка и изменяется соотношение белковых фракций, сни 6 12300 1 2009.08.30 жается концентрация ,и повышается содержаниеи билирубина, повышается активность щелочной фосфатазы, аланинамино- и аспартатаминотрансфераз. После дегельминтизации препаратом для лечения гельминтозов у животных в сыворотке крови постепенно снижалось количество циркулирующих иммунных комплексов и на 30 день после лечения наблюдали достоверное снижение их на 31,71(Р 0,05), а к 60 дню - на 40,48 (Р 0,05), т.е. приближаясь к показателям свободных от инвазии животных. Наиболее активно происходит биосинтез иммуноглобулинов классаипри некотором снижении иммуноглобулинов класса . Постепенно восстанавливается соотношение белковых фракций сыворотки крови до уровня таковых у контрольных здоровых животных. Так, через 14 дней после обработки уровень альбуминов увеличился с 31,42,42 до 36,51,35 , а на 60-й день - до 40,33,07(Р 0,05) по отношению к зараженным животным. Также повышается концентрация 1-глобулинов 64,10-70,27(Р 0,05) на 3060-й день с 6,40,72 - 6,30,28(Р 0,05) до 3,90,82 - 3,70,12 соответственно. Содержание -глобулинов увеличивается на 30,14-36,49(Р 0,05) по сравнению с инвазированными животными, которым препарат не применяли. Концентрация -глобулинов в сыворотке крови после обработки препаратом несколько снизилась с 44,80,09 в начале до 38,20,07 к 60-му дню наблюдений. Это свидетельствует о том, что происходит переориентировка биосинтеза иммуноглобулинов на биосинтез альбуминов и -глобулинов, которые являются основными трофическими белками организма. Все это способствует неспецифической активизации иммунной системы при различных (собственные исследования). Параллельно группе инвазированных фасциолами коров ввели Ивермек в стандартной дозе. При этом установлено, что при дегельминтизации ивермеком уровень Т- и Влимфоцитов достоверно не изменился и был ниже уровня животных, дегельминтизированных заявляемым препаратом. Концентрация общего белка, белковых фракций, иммуноглобулинов, активность лизоцима, содержание макро- и микроэлементов в сыворотке крови незначительно увеличивается к концу наблюдения, оставаясь ниже показателей здоровых животных. Введение Ивермека приводило к увеличению активности ферментов аспартатаминотрансферазы, аланинаминотрансферазы, щелочной фосфатазы в крови животных с 3 по 7 дни наблюдения по отношению к здоровым животным. Ивермек не оказал никакого воздействия на фасциолы. Таким образом, заявляемый препарат для лечения гельминтозов является эффективным при фасциолезе крупного рогатого скота и одновременно оказывает патогенетическое воздействие на организм животных. Изучение эффективности дегельминтизации крупного рогатого скота при фасциолезе и желудочно-кишечных нематодозах с различным содержанием мас.компонентов в препарате. Пример 7. Определение противогельмитоцидной активности заявляемого препарата. Был изготовлен препарат, состоящий, мас.клозантел - 4,75-5,25 албендазол - 14,5-15,5 левамизол - 4,75-5,25 токоферол ацетат - 2,37-2,65 и лактоза - остальное. Отработку доз и схем применения препарата при фасциолезе крупного рогатого скота провели в СПК им. Царюка Кореличского района Гродненской области. Было сформировано две группы крупного рогатого скота, инвазированность фасциолами которых составила 48 , желудочно-кишечными нематодами - 56-59 при средней степени инвазии. Обследование животных на фасциолез проводили методом последовательных смывов, на нематодозы - по Котельникову-Хренову (1974). Животным 1 группы в количестве 30 голов применили препарат в дозе 50 мг/кг однократно, 2 группы в количестве 30 голов - в дозе 25 мг/кг один раз в день в течение двух дней. Препарат задавали внутрь индивидуально. После применения препарата у животных 7 12300 1 2009.08.30 каких-либо отклонений в клиническом состоянии от физиологической нормы отмечено не было. Контролем служили аналогичное количество животных, препарат которым не применяли. Гельминтокопроовоскопическое обследование животных обеих групп на нематодозы провели через 10 дней, при этом яиц нематод не обнаружили. Первое обследование животных на эффективность при фасциолезе провели через две недели после дегельминтизации. Инвазированность крупного рогатого скота фасциолами в первой группе составила 6,6 , во второй - 0 , в контроле - 46 . При обследовании животных через 45 дней после дегельминтизации зараженность коров фасциолами в 1 и 2 группах составила 0 , в контрольной группе она не изменилась. Экстенсэффективность заявляемого препарата в дозе 50 мг/кг однократно и 25 мг/кг двукратно в течение двух дней внутрь при фасциолезе и нематодозах крупного рогатого скота составила 100 . Пример 8. Определение эффективности препарата, состоящего, мас.клозантела - 4,75-5,25 албендазола - 9,5-10,5 левамизола - 4,75-5,25 токоферола ацетата 1,18-1,32 и лактоза остальное при фасциолезе. На основании разрабатываемого ТУ для заявляемого препарата разбежка в минимальном и максимальном значении должна быть не более 5 . В СПК Пуховичский Пуховичского района Минской области было сформировано две группы крупного рогатого скота, инвазированность фасциолами которых составила 35,29 и 46,66 и желудочно-кишечными нематодами - 58,3-65,0 . Обследование животных на фасциолез проводили методом последовательных смывов и на нематодозы - по Котельникову-Хренову (1974). Животным 1 группы в количестве 17 голов применили препарат в дозе 50 мг/кг однократно, 2 группы в количестве 15 голов - в дозе 25 мг/кг один раз в день в течение двух дней. Препарат задавали внутрь индивидуально. После применения препарата у животных каких-либо отклонений в клиническом состоянии от физиологической нормы отмечено не было. Контролем служили аналогичное количество животных, препарат которым не применяли. Гельминтокопроовоскопическое обследование животных на нематодозы провели через 10 дней, при этом единичные яйца нематод обнаружили в 1 пробе фекалий (3,21 ). Инвазированность крупного рогатого скота фасциолами через две недели в первой группе составила 11,76 , во второй - 6,66 , в контроле - 25 через 45 дней - осталась на прежнем уровне. Экстенсэффективность при фасциолезе данного препарата в дозе 50 мг/кг однократно 66,68 и 25 мг/кг двукратно в течение двух дней внутрь составила 85,72 , при нематодозах - 94,49-95,06 . Пример 9. Определение эффективности препарата, состоящего, мас.клозантела - 4,75-5,25 албендазола - 19,0-21,0 левамизола - 4,75-5,25 токоферола ацетат - 2,37-2,65 и лактоза остальное при фасциолезе. На основании разрабатываемого ТУ для заявляемого препарата разбежка в минимальном и максимальном значении должна быть не более 5 . Отработку доз и схем применения препарата при фасциолезе крупного рогатого скота провели в СПК им. Царюка Кореличского района Гродненской области. Было сформировано две группы крупного рогатого скота, инвазированность фасциолами которых составила 37 и 28,6 желудочно-кишечными нематодами - 48,55-71,5 . Обследование животных на фасциолез проводили методом последовательных смывов и нематодозы - по Котельникову-Хренову (1974). Животным 1 группы в количестве 49 голов применили препарат в дозе 50 мг/кг однократно, 2 группы в количестве 25 голов - в дозе 25 мг/кг один раз в день в течение двух дней. Препарат задавали внутрь индивидуально. После применения препарата у животных 8 12300 1 2009.08.30 каких-либо отклонений в клиническом состоянии от физиологической нормы отмечено не было, однако животные более часто пили воду. Контролем служили аналогичное количество животных, препарат которым не применяли. Гельминтокопроовоскопическое обследование животных обеих групп на нематодозы провели через 10 дней, при этом яиц нематод не обнаружили. Первое обследование животных на эффективность провели через две недели после дегельминтизации. Инвазированность крупного рогатого скота фасциолами в первой группе составила 0 , во второй - 0 , в контроле - осталась на прежнем уровне. Таким образом, экстенсэффективность препарата в дозе 50 мг/кг однократно и 25 мг/кг двукратно в течение двух дней внутрь при фасциолезе и нематодозах крупного скота составила 100 . Пример 10. Определение эффективности прототипа. Испытание Ивермека при фасциолезе крупного рогатого скота провели в СПК им. Царюка Кореличского района Гродненской области. Было сформировано две группы крупного рогатого скота, спонтанно инвазированного фасциолами на 23,44 и 18,25 , нематодами - 67-78 . Обследование животных на фасциолез проводили методом последовательных смывов. Животным 1 группы в количестве 17 голов подкожно ввели Ивермек в дозе 1 мл/50 кг массы тела однократно, 2 группы (13 голов) - контроль. После применения препарата у животных каких-либо отклонений в клиническом состоянии от физиологической нормы отмечено не было. Гельминтокопроовоскопическое обследование животных обеих групп на нематодозы провели через 10 дней, при этом яиц нематод не обнаружили. Первое обследование животных на эффективность провели через две недели после дегельминтизации. Инвазированность крупного рогатого скота фасциолами в первой группе составила 18,25 , в контроле - 19,5 . Экстенсэффективность ивермека в дозе 1 мл/50 кг при фасциолезе крупного рогатого скота составила 0 , при нематодозах - 100 . Таблица 1 Сравнительная эффективность прототипа и заявляемого препарата при фасциолезе крупного рогатого скотапримера соотношение компонентов ДВ,Инвазирован- Инвазированность фасцио- ность фасциоКоличелами до лами после ство, гол. дегельминти- дегельминтизации,зации,12300 1 2009.08.30 Таблица 2 Сравнительная эффективность прототипа и заявляемого препарата при нематодозах крупного рогатого скота Инвазиро- Инвазированность ванностьпримера - соотКоличество, нематодами нематодами Экстенсэфношение компоДоза, мг/кг гол. до дегельпосле де- фективность,нентов ДВ,минтизагельминтиции,зации,50 1 - (51552,5) 30 56 0 100 Однократно заявляемый 25 двукратно 30 59 0 100 50 17 58,3 3,21 94,49 2 - (51051,25) Однократно 25 двукратно 15 65,0 3,21 95,06 50 49 37,0 0 100 3 - (52051,25) Однократно 25 двукратно 25 28,6 0 100 4 - Ивермек прото 1 мл/кг 17 78 0 100 тип Пример 11. Определение противогельмитоцидной активности заявляемого препарата при трематодозах (фасциолез), цестодозах и нематодозах овец. Был изготовлен препарат, состоящий, мас.клозантел - 4,75-5,25 албендазол - 14,5-15,5 левамизол - 4,75-5,25 токоферол ацетат - 2,37-2,65 и лактоза - остальное. Отработку доз и схем применения препарата при фасциолезе мелкого рогатого скота провели на ф. Будагово Смолевичского района Минской области. Было сформировано две группы овец, инвазированность фасциолами которых составила 51-78 , желудочнокишечными нематодами - 88-95 и цестодами (мониезии) - 15,17 . Обследование животных на фасциолез проводили методом последовательных смывов, на нематодозы - по Котельникову-Хренову (1974). Животным 1 группы в количестве 62 голов применили препарат в дозе 50 мг/кг однократно, 2 группы в количестве 56 голов - в дозе 25 мг/кг один раз в день в течение двух дней. Препарат задавали внутрь перорально. После применения препарата у животных каких-либо отклонений в клиническом состоянии от физиологической нормы отмечено не было. Контролем служили аналогичное количество животных, препарат которым не применяли. Гельминтокопроовоскопическое обследование животных обеих групп на нематодозы провели через 10 дней, при этом яиц нематод и цестод не обнаружили. Первое обследование животных на эффективность при трематодозах (фасциолезе) провели через две недели после дегельминтизации. Инвазированность овец фасциолами в первой и второй группах составила - 0 . Экстенсэффективность заявляемого препарата в дозе 50 мг/кг однократно и 25 мг/кг двукратно в течение двух дней внутрь при трематодозах, цестодозах и нематодозах овец составила 100 . В примере 7 заявляемый препарат, в котором содержалось, мас.клозантела - 4,755,25 албендазола - 14,5-15,5 левамизола - 4,75-5,25 токоферола ацетата - 2,37-2,65 и лактозы - остальное наиболее эффективен при фасциолезе крупного рогатого скота. Экстенсэффективность препарата в дозе 50 мг/кг однократно и 25 мг/кг двукратно в течение двух дней внутрь при фасциолезе крупного рогатого скота составила 100 и нематодозах 10 12300 1 2009.08.30 100 . Аналогичная эффективность заявляемого препарата получена и при фасциолезе и нематодозах овец - 100(пример 11). Заявляемый препарат, описанный в примере 8, содержащий, мас.клозантела - 4,755,25 албендазола - 9,0-11,0 левамизола - 4,75-5,25 токоферола ацетат - 1,0-1,5 и лактоза остальное не оказывает достаточно эффективного действия на фасциол. Экстенсэффективность при фасциолезе препарата в дозе 50 мг/кг однократно - 66,68 и 25 мг/кг двукратно в течение двух дней внутрь - 85,72 . Препарат, описанный в примере 9, состоящий, мас.клозантела - 4,75-5,25 албендазола - 19,0-21,0 левамизола - 4,75-5,25 токоферола ацетат - 2,37-2,65 и лактозы - остальное. Экстенсэффективность препарата в дозе 50 мг/кг однократно и 25 мг/кг двукратно в течение двух дней внутрь при фасциолезе крупного рогатого скота составила 100 . Однако применение препарата в таком составе удорожает стоимость обработки животных против данной инвазии. При анализе результатов, полученных в ходе описанных выше испытаний, пришли к заключению, что наиболее экономичным и при равной эффективности при фасциолезе и нематодозах является заявляемый препарат в следующем составе действующих компонентов, мас.клозантела - 4,75-5,25 албендазола - 14,5-15,5 левамизола - 4,75-5,25 токоферола ацетат - 2,37-2,65 и лактозы - остальное (пример 7). При применении препарата, содержащего компоненты выше заявленных, увеличивается активность ферментов печени, что отрицательно сказывается на продуктивность животных. А при применении препарата, содержащего компоненты ниже заявленных, резко снижается терапевтическая эффективность, т.е. часть гельминтов остаются живыми, что приводит к обсеменению внешней среды и дальнейшему заражению животных. Таким образом, использование вышеуказанных компонентов, мас.клозантела 4,75-5,25 албендазола - 14,5-15,5 левамизола - 4,75-5,25 токоферола ацетат - 2,37-2,65 и лактозы - остальное, позволило получить совершенно новый препарат для лечения гельминтозов, например фасциолеза и нематодозов жвачных животных, и способный восстанавливать в организме больного животного патологические процессы до уровня здоровых животных, вызванные воздействием паразитов. Компоненты заявляемого препарата в заявляемых процентах (мас.) для лечения гельминтозов животных усиливают действие друг друга, т.е. проявляется синергический эффект, заключающийся в том, что не наблюдается прочного связывания компонентов препарата с соответствующими рецепторами гельминта. В результате чего не происходит активизация белков в организме гельминтов, способных удалять проникшие компоненты препарата из клеток гельминта. При таком активном одновременном воздействии препарата на различные звенья обменных процессов гельминтов у них нарушаются структурные и функциональные элементы их жизнедеятельности, что приводит к дестабилизации обмена веществ, прекращению питания, гибели и элиминации из организма. Все это позволяет предупреждать развитие толерантности у гельминтов к препарату. В то же время препарат оказывает иммунокоррегирующее и антиоксидантное воздействие на организм хозяина, выражающееся в активизации специфической и неспецифической иммунологической защиты организма животных. В результате сокращается срок восстановления (нормализация патологических процессов до - клеточного иммунитета,содержания ЦИК, иммуноглобулинов классов , , , альбуминов и - , - и глобулинов, билирубина, щелочной фосфатазы,и АЛТ) организма животного до физиологической нормы. Механизм действия заявляемого препарата заключается в том, что нарушаются процессы фосфорилирования и переноса электронов в организме паразитов под воздействием клозантела, нарушается энергетический обмен у гельминтов подавлением образования аденозинтрифосфорной кислоты (левамизол), воздействует на нервно-мышечную систему 11 12300 1 2009.08.30 паразита, тормозит активность ацетилхолинэстеразы и фумаратредуктазы, что ведет к нарушению синтеза аденозинтрифосфорной кислоты у гельминтов (албендазол). Таким образом, заявляемый препарат в заявляемых мас.является малотоксичным,не оказывает раздражающего, аллергизирующего, эмбриотоксического, тератогенного действия на организм животного, не обладает кумулятивными свойствами и оказывает этиотропное и патогенетическое действие. Источники информации 1. Демидов Н.В. Гельминтозы животныхСправочник. - М., 1987. - С. 76. 2. Якубовский М.В. Резистентность паразитических организмов к лекарственным препаратам и пути ее профилактики // Эпизоотол., иммунобиол., фармакология и санитария. 2004. -1. - С. 37-39. 3. Болезни сельскохозяйственных животных / Под ред. профессора П.А. Красочко. Минск Бизнесофсет, 2005. - С. 593. 4. Щемякова С.А. Иммунокоррегирующая терапия при фасциолезе крупного рогатого скотаАвтореф. дисс. канд. вет. наук. - М., 1999. - С. 23. 5. Березовський А.В. Лкарськ препарати нового поколння для ветеринарно медицини. - Кив Ветнформ, 2000. - С. 28-29. 6. Даугалиева Э.Х., Филиппов В.В. Иммунный статус и пути его коррекции при гельминтозах сельскохозяйственных животных. - М. ВО Агропромиздат, 1991. - С. 120-127. 7. Даугалиева Э.Х., Колесников В.И., Новицкий С.В. Иммунобиологическая реактивность сельскохозяйственных животных при гельминтозах. - Ставрополь, 1997. - С. 92-95. 8. Ивермек //.-./. (ЗАО Нита-Фарм) (прототип). 9. Якубовский М.В., Карасев Н.Ф. Диагностика, терапия и профилактика паразитарных болезней животных. - Минск Хата, 2001. - С. 127. 10. Якубовский М.В., Карасев Н.Ф. Диагностика, терапия и профилактика паразитарных болезней животных. - Минск Хата, 2001. - С. 149-150. 11. Якубовский М.В., Карасев Н.Ф. Диагностика, терапия и профилактика паразитарных болезней животных. - Минск Хата, 2001. - С. 141. 12. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - Минск, 1987. Ч. 2. - С. 33. 13. Мозгов И.Е. Фармакология. - М. Колос, 1969. - С. 200. Национальный центр интеллектуальной собственности. 220034, г. Минск, ул. Козлова, 20. 12